研究者データベース

滝口 満喜(タキグチ ミツヨシ)
獣医学研究院 獣医学部門 臨床獣医科学分野
教授

基本情報

所属

  • 獣医学研究院 獣医学部門 臨床獣医科学分野

職名

  • 教授

学位

  • 博士(獣医学)(北海道大学)
  • 修士(獣医学)(北海道大学)

J-Global ID

研究キーワード

  • 自己免疫疾患   超音波診断   画像診断   Veterinary Diagnostic imaging   Autoimmune Diseases   Diagnostic Ultrasound   Diagnostic imaging   

研究分野

  • ライフサイエンス / 放射線科学
  • ライフサイエンス / 膠原病、アレルギー内科学
  • ライフサイエンス / 獣医学
  • ライフサイエンス / 獣医学
  • ライフサイエンス / 獣医学

職歴

  • 2007年10月 - 現在 北海道大学 大学院獣医学研究科 教授
  • 2004年10月 酪農学園大学獣医学部教授
  • 2004年06月 北海道大学大学院獣医学研究科助教授
  • 2000年 - 2004年 Lecturer, Graduate School of Veterinary Medicine,
  • 2004年 - Professor, School of Veterinary Medicine, Rakuno gakuen Univ.
  • 2004年 - Assistant Professor, Graduate School of Veterinary Medicine,
  • 2000年07月 北海道大学大学院獣医学研究科講師
  • 1995年 - 2000年 Instractor, Graduate School of Veterinary Medicine
  • 1996年03月 - 1996年08月 文部省在外研究員
  • 1995年04月 北海道大学大学院獣医学研究科助手
  • 1993年 - 1995年 Instractor, Faculty of Veterinary Medicine, Hokkaido Univ.
  • 1993年10月 北海道大学獣医学部助手
  • 1992年06月 オハイオ州立大学獣医学部客員研究員
  • Hokkaiddo Univ.
  • Hokkaiddo Univ.
  • Hokkaiddo Univ.

学歴

  • 1987年04月 - 1989年03月   北海道大学   獣医学研究科   (修士課程)予防治療学専攻
  •         - 1989年   北海道大学
  • 1983年04月 - 1987年03月   北海道大学   獣医学部   獣医学科
  •         - 1987年   北海道大学

所属学協会

  • 国際獣医放射線学会   日本小動物獣医学会   日本超音波医学会   日本獣医画像診断学会   日本免疫学会   日本獣医学会   

研究活動情報

論文

  • Tatsuyuki Osuga, Kensuke Nakamura, Tomoya Morita, Sue Yee Lim, Nozomu Yokoyama, Keitaro Morishita, Hiroshi Ohta, Mitsuyoshi Takiguchi
    AMERICAN JOURNAL OF VETERINARY RESEARCH 76 8 702 - 709 2015年08月 [査読有り][通常論文]
     
    OBJECTIVE To evaluate the effects of dobutamine, esmolol, milrinone, and phenylephrine on left atrial phasic function of healthy dogs. ANIMALS 9 healthy Beagles. PROCEDURES Following sedation with propofol on each of 4 experimental days, dogs were administered a constant rate infusion of dobutamine (5 mu g/kg/min), esmolol (500 mu g/kg/min), milrinone (25 mu g/kg, IV bolus, followed by 0.5 mu g/kg/min), or phenylephrine (2 mu g/kg/min). There was at least a 14-day interval between experimental days. Each drug was administered to 6 dogs. Conventional and 2-D speckle tracking echocardiography were performed before (baseline) and after administration of the cardiovascular drug, and time-left atrial area curves were derived to calculate indices for left atrial reservoir, conduit, and booster pump functions (left atrial phasic function) and left ventricular contractility and lusitropy. RESULTS Compared with baseline values, indices for left atrial reservoir and booster pump functions and left ventricular contractility and lusitropy were significantly increased following dobutamine administration; indices for left atrial phasic function and left ventricular lusitropy were changed insignificantly, and indices for left ventricular contractility were significantly impaired following esmolol administration; indices for left atrial phasic function and left ventricular relaxation were changed insignificantly, and indices for left ventricular systolic function were significantly augmented following milrinone administration; and indices for left atrial phasic function and left ventricular lusitropy were changed insignificantly, and indices of ventricular contractility were significantly impaired following phenylephrine administration. CONCLUSIONS AND CLINICAL RELEVANCE Results indicated that, following administration of dobutamine, esmolol, milrinone, or phenylephrine to healthy dogs, left atrial phasic function indices were fairly stable and did not parallel changes in left ventricular function indices.
  • Kensuke Nakamura, Sue-Yee Lim, Kenji Ochiai, Masahiro Yamasaki, Hiroshi Ohta, Keitaro Morishita, Satoshi Takagi, Mitsuyoshi Takiguchi
    VETERINARY RADIOLOGY & ULTRASOUND 56 1 55 - 62 2015年01月 [査読有り][通常論文]
     
    Abdominal ultrasonography is one of the most common diagnostic imaging modalities used for dogs with suspected insulinoma; however, pancreatic masses are clearly identified in fewer than half of affected dogs and benign pancreatic nodules can be difficult to differentiate from malignant ones. The purpose of this prospective study was to describe contrast-enhanced ultrasonography (CEUS) characteristics of confirmed pancreatic insulinoma in a group of dogs. Inclusion criteria were as follows: (1) repeated hypoglycemia (blood glucose levels <60 mg/dl, twice or more); (2) elevated blood insulin levels with hypoglycemia; (3) pancreatic nodules detected with conventional ultrasonography; and (4) histological confirmation of pancreatic islet cell carcinoma. Immediately following conventional ultrasonography of the entire abdomen, CEUS of the pancreatic nodule and adjacent parenchyma was performed using contrast-specific technology pulse inversion imaging and perflubutane microbubble contrast agent. Three dogs met inclusion criteria. Pancreatic nodules in all the three dogs became more clearly demarcated after injection of the contrast agent. Each nodule showed different enhancement patterns: markedly hyperechoic for 5 s, slightly hyperechoic for 1 s, and clearly hypoechoic for over 30 s. These results were not in complete agreement with previously reported CEUS findings in human patients with insulinoma. All nodules were surgically resected and histopathologically confirmed as malignant insulinomas. Findings from the current study indicated that contrast-enhanced ultrasound may help to increase conspicuity of pancreatic insulinomas in dogs and that enhancement characteristics may be more variable in dogs than in humans. (C) 2014 American College of Veterinary Radiology.
  • Yu Tamura, Hiroshi Ohta, Nozomu Yokoyama, Sue Yee Lim, Tatsuyuki Osuga, Keitaro Morishita, Kensuke Nakamura, Masahiro Yamasaki, Mitsuyoshi Takiguchi
    JOURNAL OF VETERINARY MEDICAL SCIENCE 76 10 1407 - 1410 2014年10月 [査読有り][通常論文]
     
    Lymphocytic-plasmacytic colitis (LPC) is a common form of inflammatory bowel disease (IBD) affecting the canine large intestine. Cytokines are thought to be involved in the pathogenesis of IBD. However, to date, few studies have investigated cytokine mRNA expression in dogs with LPC. In this study, we investigated mRNA transcription levels of T helper cell cytokines, such as IFN-gamma, IL-4, IL-17 and IL-10 and pro-inflammatory cytokines, such as IL-1 beta, IL-6, TNF-alpha., IL-8, IL-12 and IL-23, in colonic mucosa from LPC dogs by quantitative real-time RT-PCR. No significant differences were detected in cytokine mRNA expressions between dogs with LPC and controls, except for IL-23p19. Dogs with LPC failed to express a predominant cytokine profile in inflamed colonic mucosa as opposed to human IBD.
  • Masahiro Yamasaki, Eriko Harada, Yu Tamura, Sue Yee Lim, Tatsuyuki Ohsuga, Nozomu Yokoyama, Keitaro Morishita, Kensuke Nakamura, Hiroshi Ohta, Mitsuyoshi Takiguchi
    VETERINARY PARASITOLOGY 205 3-4 424 - 433 2014年10月 [査読有り][通常論文]
     
    Babesia gibsoni is a causative pathogen of canine babesiosis, which is commonly treated with anti-babesial drugs; however, the development of novel, more effective anti-babesial drugs is necessary because the currently used drugs cannot remove the parasites from dogs. Therefore we investigated the anti-babesial effect of amphotericin B (AmB), a membrane-active polyene macrolide antibiotic. The interaction of such compounds with sterols in bilayer cell membranes can lead to cell damage and ultimately cell lysis. AmB exhibits in vitro activity against B. gibsoni in normal canine erythrocytes within 12 h. We also studied liposomal AmB (L-AmB), a liposomal formulation of AmB that required a longer incubation period to reduce the number of parasites. However, L-AmB completely inhibited the invasion of free parasites into erythrocytes. These results indicated that free parasites failed to invade erythrocytes in the presence of L-AmB. Both AmB and L-AmB induced mild hemolysis of erythrocytes. Moreover, the methemoglobin level and the turbidity index of erythrocytes were significantly increased when erythrocytes were incubated with AmB, suggesting that AmB induced oxidative damage in erythrocytes. Finally, the anti-babesial activity of AmB in vivo was observed. When experimentally B. gibsoni-infected dogs were administered 0.5 and 1 mg/kg AmB by the intravenous route, the number of parasites decreased; however, recurrence of parasitemia was observed, indicating that AmB did not eliminate parasites completely. Blood urea nitrogen and creatinine of dogs were abnormally elevated after the administration of 1 mg/kg AmB. These results indicate that AmB has in vivo activity against B. gibsoni; however, it does not eliminate parasites from infected dogs and affects kidney function at a high dose. (C) 2014 Elsevier B.V. All rights reserved.
  • Yu Tamura, Hiroshi Ohta, Takuya Kashiide, Jun Matsumoto, Tatsuya Sakurai, Nozomu Yokoyama, Keitaro Morishita, Kensuke Nakamura, Masahiro Yamasaki, Mitsuyoshi Takiguchi
    VETERINARY PARASITOLOGY 205 1-2 412 - 415 2014年09月 [査読有り][通常論文]
     
    An eight-year-old, neutered, female Shetland Sheepdog presented with a 6-week history of small intestinal diarrhea. Regenerative anemia, hypoproteinemia, and an increased plasma C-reactive protein concentration were detected On blood examination. Fecal examination and abdominal radiography were unremarkable. Abdominal ultrasonography showed diffusely hyperechoic mucosa in the small intestine. Gastroduodenoscopy, performed under general anesthesia, revealed mucosal edema and increased granularity in the duodenum and jejunum. Histopathological examination of the endoscopically biopsied small intestinal mucosa revealed tapeworm infection. A single administration of a combined anthelmintic drug (5 mg/kg praziquantel, 14.4 mg/kg pyrantel pamoate, and 15 mg/kg febantel) was successful for deworming, and the dog fully recovered. The parasites were removed from stored frozen duodenal mucosa and morphologically identified as Mesocestoides sp. immature adult worms. Mitochondrial (mt) 12S rDNA and mt cytochrome c oxide subunit I genes were amplified from the parasites. DNA sequence analysis showed that the genes shared 100% identity with those of reported M. vogae (syn. M. corti). This is the first reported case of protein-losing enteropathy caused by M. vogae in a dog. (C) 2014 Elsevier B.V. All rights reserved.
  • Kimiaki Yamano, Hirokazu Kouguchi, Kohji Uraguchi, Takeshi Mukai, Chikako Shibata, Hideaki Yamamoto, Noboru Takaesu, Masaki Ito, Yoshinori Makino, Mitsuyoshi Takiguchi, Kinpei Yagi
    PARASITOLOGY INTERNATIONAL 63 4 621 - 626 2014年08月 [査読有り][通常論文]
     
    The causative parasite of alveolar echinococcosis, Echinococcus multilocularis, maintains its life cycle between red foxes (Vulpes vulples, the definitive hosts) and voles (the intermediate hosts) in Hokkaido, Japan. Primates, including humans, and some other mammal species can be infected by the accidental ingestion of eggs in the feces of red foxes. In August 2011, a 6-year-old zoo-raised female Diana monkey (Cercopithecus diana) died from alveolar echinococcosis. E. multilocularis infection was confirmed by histopathological examination and detection of the E. multilocularis DNA by polymerase chain reaction (PCR). A field survey in the zoo showed that fox intrusion was common, and serodiagnosis of various nonhuman primates using western blotting detected a case of a 14-year-old female Celebes crested macaque (Macaca nigra) that was weakly positive for E. multilocularis. Computed tomography revealed only one small calcified lesion (approximately 8 mm) in the macaque's liver, and both western blotting and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) showed a gradual decline of antibody titer. These findings strongly suggest that the animal had recovered spontaneously. Until this study, spontaneous recovery from E. multilocularis infection in a nonhuman primate had never been reported. (C) 2014 Elsevier Ireland Ltd. All rights reserved.
  • Hiroshi Ohta, Yuji Sunden, Nozomu Yokoyama, Tatsuyuki Osuga, Sue Yee Lim, Yu Tamura, Keitaro Morishita, Kensuke Nakamura, Masahiro Yamasaki, Mitsuyoshi Takiguchi
    AMERICAN JOURNAL OF VETERINARY RESEARCH 75 8 746 - 751 2014年08月 [査読有り][通常論文]
     
    Objective-To determine the expression of tight junction and adherens junction proteins in duodenal mucosa samples of dogs with inflammatory bowel disease (IBD). Animals-12 dogs with IBD and 6 healthy control Beagles. Procedures-Duodenal mucosa biopsy samples were endoscopically obtained from dogs with IBD and healthy control Beagles. The expression of claudin-1, -2, -3, -4, -5, -7, and -8; E-cadherin; and beta-catenin in the duodenal mucosa samples was determined by means of immunoblotting. The subcellular localization of E-cadherin in the duodenal mucosa samples was determined with immunofluorescence microscopy. Results-The expression of each claudin and beta-catenin was not significantly different between control dogs and dogs with IBD. However, expression of E-cadherin was significantly lower in duodenal mucosa samples of dogs with IBD than it was in samples obtained from healthy control dogs. Results of immunofluorescence microscopy indicated decreased intensity of E-cadherin labeling in the tips of villi in duodenal mucosa samples obtained from 6 dogs with IBD, compared with staining intensity for other dogs. Conclusions and Clinical Relevance-Results of this study indicated expression of claudin-1, -2, -3, -4, -5, -7, and -8 and beta-catenin was not significantly different between duodenal mucosa samples obtained from control dogs and those obtained from dogs with IBD. However, E-cadherin expression was significantly lower in the villus epithelium in duodenal mucosa samples obtained from dogs with IBD versus samples obtained from control dogs, which suggested that decreased expression of that protein has a role in the pathogenesis of IBD in dogs.
  • Ohta H, Takada K, Sunden Y, Tamura Y, Osuga T, Lim SY, Murakami M, Sasaki N, Wickramasekara, Rajapakshage BK, Nakamura K, Yamasaki M, Takiguchi M
    The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science 76 3 409 - 414 2014年03月 [査読有り][通常論文]
     
    Inflammatory bowel disease (IBD) is a common cause of chronic gastrointestinal signs in dogs. In humans, T helper cells have important roles in the pathogenesis of IBD. In contrast, no specific involvement of a distinct T cell subset has been described in canine IBD. The present study evaluated the gene and protein expression of cytokines of T cell subsets in duodenal mucosa from dogs with IBD. Relative quantification of interleukin (IL)-17A, interferon (IFN)-gamma, IL-4 and IL-10 mRNA transcription was performed using duodenal mucosa from 27 IBD dogs and 8 controls. Duodenal mucosal IL-17A, IFN-gamma and IL-10 protein levels were determined by ELISA in 15 IBD dogs and 8 controls. There was no significant difference in each cytokines mRNA transcription level between groups. There was no significant difference in IL-17A, IFN-gamma and IL-10 protein expression levels between groups. Thus, there is no clear evidence for the involvement of distinct Th cytokine in the pathogenesis of canine IBD.
  • Sue Yee Lim, Kensuke Nakamura, Keitaro Morishita, Noboru Sasaki, Masahiro Murakami, Tatsuyuki Osuga, Hiroshi Ohta, Masahiro Yamasaki, Mitsuyoshi Takiguchi
    JOURNAL OF VETERINARY MEDICAL SCIENCE 75 12 1601 - 1607 2013年12月 [査読有り][通常論文]
     
    Quantitative contrast enhanced ultrasound is a major breakthrough for ultrasound imaging in recent years. However, contrast enhancement of the pancreas is brief with bolus injection. To assess if continuous infusion of Sonazoid (R) can prolong the duration of pancreatic enhancement over bolus injections, eight adult dogs received bolus injection and continuous infusion of Sonazoid (R) on separate days. Contrast enhanced ultrasound of the pancreatic parenchyma and proximal descending duodenum was performed, and time intensity curves reflecting tissue perfusions were generated. Perfusion parameters- time to initial upslope, peak time, time to wash-out and peak intensity were calculated and evaluated. Fast wash-in to intense peak, followed by rapid wash-out was observed for time intensity curves of bolus injection. With continuous infusion, contrast wash-in to peak intensity was gradual, followed by long plateau and slow wash-out. Median contrast enhancement durations of the pancreas and duodenum were significantly prolonged by continuous infusion from 11 sec (range, 10 to 23 sec) and 16 sec (range, 3 to 43 sec) at bolus injection to 205 sec (range, 170 to 264 sec, P<0.01) and 193 sec (range, 169 to 216 sec, P<0.05), respectively. Median peak intensity of the pancreas was 100.9 MPV (range, 80.2 to 124.3 MPV) at bolus injection and 77.6 MPV (range, 58.2 to 99.5 MPV, P<0.05) at continuous infusion. Prolonged continuous imaging is afforded by continuous infusion of contrast agent. Peak intensity of the pancreas was slightly diminished in continuous infusion, but offered adequate imaging subjectively.
  • Asuka Suto, Masahiro Yamasaki, Yukari Takasaki, Yasuyuki Fujita, Riichiro Abe, Hiroshi Shimizu, Hiroshi Ohta, Mitsuyoshi Takiguchi
    The Journal of veterinary medical science 75 11 1471 - 7 2013年11月 [査読有り][通常論文]
     
    Due to the lack of a gold standard method in canine lipoprotein analysis, it is unclear whether canine high-density lipoprotein (HDL) and low-density lipoprotein (LDL) can be accurately evaluated by the lipoprotein analysis methods used for dogs. This study investigated whether the ultracentrifugation-precipitation (U-P) method was suitable as a gold standard method for analyzing canine lipoprotein. First, the U-P method was compared with a gel permeation high-performance liquid chromatography system (GP-HPLC). The concentrations of canine HDL cholesterol (HDL-C) and LDL cholesterol (LDL-C) determined by the U-P method correlated closely with those determined by GP-HPLC. However, the canine HDL-C concentration determined by the U-P method was lower than that determined by GP-HPLC, and the canine LDL-C concentration determined by the U-P method was higher than that determined by GP-HPLC. This study showed that some canine HDL could be precipitated with heparin manganese chloride solution. Second, the HDL and LDL fractions separated by the U-P method were analyzed by LC-MS/MS. The HDL fraction was found to contain only apolipoprotein A-I, which is an apolipoprotein of HDL, whereas the LDL fraction contained both apolipoprotein A-I and apolipoprotein B-100, which is an apolipoprotein of LDL. This data showed that a certain lipoprotein that includes apolipoprotein A-I might precipitate with canine LDL when using heparin manganese chloride solution. These results indicated that the U-P method is not currently a gold standard method for analyzing canine lipoproteins.
  • Yu Tamura, Hiroshi Ohta, Shidow Torisu, Masashi Yuki, Nozomu Yokoyama, Masahiro Murakami, Sue Yee Lim, Tatsuyuki Osuga, Keitaro Morishita, Kensuke Nakamura, Masahiro Yamasaki, Mitsuyoshi Takiguchi
    VETERINARY IMMUNOLOGY AND IMMUNOPATHOLOGY 156 1-2 32 - 42 2013年11月 [査読有り][通常論文]
     
    Inflammatory colorectal polyps (ICRPs) in miniature dachshunds were recently recognized as a major cause of large bowel diarrhea in this dog breed in Japan. ICRPs are characterized by the formation of multiple small polyps and/or space-occupying large polyps in the colorectal area and are thought to be a novel form of inflammatory bowel disease (IBD). To explore key mediators in the pathogenesis of ICRPs, we analyzed several pro-inflammatory cytokine (IL-1 beta, IL-6, TNF-alpha, IL-8, IL-12p35, IL-12/23p40, and IL-23p19) mRNA expressions in colorectal polyps in ICRP dogs by quantitative PCR. Among these cytokines, IL-8 mRNA expression was markedly up-regulated in large polyps. To examine IL-8 protein expression, we analyzed IL-8 protein level and its location in colorectal mucosal specimens of ICRP dogs by ELISA and immunofluorescence microscopy. IL-8 protein was significantly increased in large polyps and serum in dogs with ICRPs compared to controls. By immunofluorescence microscopy, IL-8 was only localized in macrophages, but not in mucosal epithelial cells or neutrophils. IL-8-positive macrophages were significantly increased in large polyps compared to controls. These results suggest that IL-8 is produced mainly by macrophages and may induce neutrophil infiltration in the colorectal area of ICRP dogs. (C) 2013 Elsevier B.V. All rights reserved.
  • Hiroshi Ohta, Kanae Takada, Shidow Torisu, Masashi Yuki, Yu Tamura, Nozomu Yokoyama, Tatsuyuki Osuga, Sue Yee Lim, Masahiro Murakami, Noboru Sasaki, Kensuke Nakamura, Masahiro Yamasaki, Mitsuyoshi Takiguchi
    VETERINARY IMMUNOLOGY AND IMMUNOPATHOLOGY 155 4 259 - 263 2013年10月 [査読有り][通常論文]
     
    Inflammatory colorectal polyps (ICRPs) in miniature dachshunds are recently recognized as a major cause of large bowel diarrhea in this dog breed in Japan. ICRPs are characterized by the formation of multiple small polyps and a space-occupying large polyp in the colorectal area, and are thought to be a novel form of inflammatory bowel disease (IBD). In humans, specific cytokine patterns attributed to T helper (Th)1, Th17 and regulatory T cells have important roles in the pathogenesis of IBD. Thus, the aim of the present study was to assess the gene expression of cytokines of T cell subsets in the colorectal mucosa from dogs with ICRPs. Colorectal mucosal specimens from 10 dogs with ICRPs and 14 control dogs were used in this study. Interferon (IFN)-gamma, interleukin (IL)-4, IL-17A and IL-10 mRNA expression was assessed using quantitative real-time PCR. IL-17A mRNA expression was significantly increased in large polyps compared to small polyps and controls. IFN-gamma and IL-10 mRNA expression in large polyps were significantly higher than in controls. There was no significant difference in IL-4 mRNA expression among the three groups. IL-17A is thought to play important roles in the pathogenesis of ICRPs. IL-10 up-regulation could oppose the proinflammatory function of IL-17A. (C) 2013 Elsevier B.V. All rights reserved.
  • Masahiro Murakami, Songji Zhao, Yan Zhao, Wenwen Yu, Chowdhury Nusrat Fatema, Ken-Ichi Nishijima, Masahiro Yamasaki, Mitsuyoshi Takiguchi, Nagara Tamaki, Yuji Kuge
    Oncology Letters 6 3 667 - 672 2013年09月 [査読有り][通常論文]
     
    An early identification of the tumor response to sorafenib treatment is indispensable for selecting optimal personalized treatment strategies. However, at present, no reliable predictors are clinically available. 18F-fluorothymidine (18F-FLT) positron emission tomography (PET) is used to assess tumor proliferation, since the FLT uptake level reflects thymidine kinase-1 (TK-1) activity. Thus, the present study determined whether FLT was able to evaluate the early tumor response to sorafenib treatment in a human renal cell carcinoma (RCC A498) xenograft in comparison with the tumor proliferation marker, Ki-67. Mice bearing A498 tumors were assigned to the control and sorafenib-treated groups and the tumor volume was measured every day. [Methyl-3H(N)]-3′-fluoro-3′-deoxythymidine (3H-FLT) was injected 2 h prior to the sacrifice of the mice on days three and seven following the treatment. 3H-FLT autoradiography (ARG) and Ki-67 immunohistochemistry (IHC) were performed using tumoral 3H-FLT uptake level diffusely increased following the treatment, while no significant changes were observed in Ki-67 IHC. The intratumoral 3H-FLT uptake levels significantly increased by 2.7- and 2.6-fold on days three and seven following the treatment, while the tumor volume and Ki-67 index did not significantly change. Thus, an increased FLT uptake level was demonstrated following the treatment, which may indicate the suppression of thymidylate synthase (TS) and the compensatory upregulation of TK-1 activity by sorafenib.
  • Tatsuyuki Osuga, Kensuke Nakamura, Sue Yee Lim, Yu Tamura, Wickramasekara Rajapakshage Bandula Kumara, Masahiro Murakami, Noboru Sasaki, Keitaro Morishita, Hiroshi Ohta, Masahiro Yamasaki, Mitsuyoshi Takiguchi
    AMERICAN JOURNAL OF VETERINARY RESEARCH 74 6 864 - 869 2013年06月 [査読有り][通常論文]
     
    Objective-To evaluate left atrial phasic function in healthy dogs by means of 2-D speckle tracking echocardiography with time-left atrial area curve analysis and to assess repeatability and reproducibility of obtained measurements. Animals-6 healthy Beagles. Procedures-Each dog underwent echocardiography twice on different days (3 nonconsecutive examinations/d). Images were analyzed with offline software; area of the left atrium was automatically calculated in each frame throughout the cardiac cycle to derive time-left atrial area curves. Variables used to assess left atrial phasic function (total, passive, and active emptying area and emptying fractions and mean active and total emptying rates) were calculated. Agreement between variables measured via speckle tracking echocardiography and a manual tracing method was assessed with modified Bland-Altman analysis. Withinday and between-day coefficients of variation were determined. Results-Mean +/- SD total, passive, and active emptying fractions of the left atrium were 49.8 +/- 3.5%, 27.7 +/- 4.0%, and 30.5 +/- 4.3%, respectively. Mean +/- SD total and active emptying rates were 16.0 +/- 2.5 cm(2)/s and 25.1 +/- 4.9 cm(2)/s, respectively. Within-day and between-day coefficients of variation were < 20% (range, 0.41% to 16.4%) for all variables except mean active emptying rate (between-day coefficient of variation, 29.2%). Agreement between variables measured via speckle tracking echocardiography and the manual tracing method was good, and differences between methods were nonsignificant. Conclusions and Clinical Relevance-Evaluation of left atrial phasic function via speckle tracking echocardiography was feasible; repeatability and reproducibility of measurements were adequate in healthy dogs. Studies are needed to determine clinical applicability in canine patients. (Am J Vet Res 2013;74:864-869)
  • Masahiro Murakami, Songji Zhao, Yan Zhao, Nusrat Fatema Chowdhury, Wenwen Yu, Ken-Ichi Nishijima, Mitsuyoshi Takiguchi, Nagara Tamaki, Yuji Kuge
    INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY 41 5 1593 - 1600 2012年11月 [査読有り][通常論文]
     
    The mechanistic dissociation of 'tumor starvation' versus 'vascular normalization' following anti-angiogenic therapy is a subject of intense controversy in the field of experimental research. In addition, accurately evaluating changes of the tumor microenvironment after anti-angiogenic therapy is important for optimizing treatment strategy. Sorafenib has considerable anti-angiogenic effects that lead to tumor starvation and induce tumor hypoxia in the highly vascularized renal cell carcinoma (RCC) xenografts. F-18-fluoromisonidazole (F-18-FMISO) is a proven hypoxia imaging probe. Thus, to clarify early changes in the tumor microenvironment following anti-angiogenic therapy and whether F-18-FMISO imaging can detect those changes, we evaluated early changes in the tumor microenvironment after sorafenib treatment in an RCC xenograft by sequential histological analysis and F-18-FMISO autoradiography (ARG). A human RCC xenograft (A498) was established in nude mice, for histological studies and ARG, and further assigned to the control and sorafenib-treated groups (80 mg/kg, per os). Mice were sacrificed on Days 1, 2, 3 and 7 in the histological study, and on Days 3 and 7 in ARG after sorafenib treatment. Tumor volume was measured every day. F-18-FMISO and pimonidazole were injected intravenously 4 and 2 h before sacrifice, respectively. Tumor sections were stained with hematoxylin and eosin and immunohistochemically with pimonidazole and CD31. Intratumoral F-18-FMISO distribution was quantified in ARG. Tumor volume did not significantly change on Day 7 after sorafenib treatment. In the histological study, hypoxic fraction significantly increased on Day 2, mean vessel density significantly decreased on Day 1 and necrosis area significantly increased on Day 2 after sorafenib treatment. Intratumoral F-18-FMISO distribution significantly increased on Days 3 (10.2-fold, p<0.01) and 7 (4.1-fold, p<0.01) after sorafenib treatment. The sequential histological evaluation of the tumor microenvironment clarified tumor starvation in A498 xenografts treated with sorafenib. F-18-FMISO hypoxia imaging confirmed the tumor starvation. F-18-FMISO PET may contribute to determine an optimum treatment protocol after anti-angiogenic therapy.
  • Bandula Kumara Wickramasekara Rajapakshage, Masahiro Yamasaki, Shiang-Jyi Hwang, Noboru Sasaki, Masahiro Murakami, Yu Tamura, Sue Yee Lim, Kensuke Nakamura, Hiroshi Ohta, Mitsuyoshi Takiguchi
    JOURNAL OF VETERINARY MEDICAL SCIENCE 74 9 1139 - 1148 2012年09月 [査読有り][通常論文]
     
    The stability of the characteristics of the diminazene aceturate (DA)-resistant B. gibsoni isolate was initially determined in vitro. Part of the DA-resistant B. gibsoni isolate was cultured without DA for 4 weeks, and then newly exposed to 200 ng/m/ DA. As a result, this isolate could proliferate the same as the DA-resistant isolate, indicating that the characteristic of DA resistance was stable in the DA-resistant isolate. Additionally, the level of parasitemia in the DA-resistant isolate was comparatively lower than in the wild-type, suggesting that the proliferation potential of the DA-resistant isolate would be lower than that of the wild-type. Subsequently, to investigate the involvement of mitochondrial DNA (mtDNA) in DA resistance in B. gibsoni, the nucleotide sequences and deduced amino acid sequences of mitochondrial genes such as COXI, COXIII, and CYTb genes of the DA-resistant isolate, were compared with those of the wild-type. As a result, these three genes were not altered in the DA-resistant B. gibsoni isolate. Moreover, the transcription levels of COXI,COXIII, and CYTb genes were observed by semi-quantitative RT-PCR. As a result, the gene transcription of those genes in the DA-resistant isolate was not significantly altered. These results indicated that DA did not affect mtDNA directly in DA-resistant B. gibsoni. Thus, it is suggested that mtDNA should not be deeply involved in DA resistance in B. gibsoni.
  • Kensuke Nakamura, Masahiro Yamasaki, Tomohiro Osaki, Hiroshi Ohta, Noboru Sasaki, Keisuke Aoshima, Takashi Kimura, Mitsuyoshi Takiguchi
    JOURNAL OF THE AMERICAN ANIMAL HOSPITAL ASSOCIATION 48 5 327 - 330 2012年09月 [査読有り][通常論文]
     
    Bilateral segmental aplasia of the uterine horns with unilateral pyometra and uterine horn torsion were diagnosed in a Pomeranian bitch that presented with chronic abdominal distension and an acute onset of anorexia and lethargy. Because radiographic and ultrasonographic findings revealed the presence of markedly enlarged bilateral uterine horns filled with fluid in the caudal abdomen, a tentative diagnosis of either pyometra or hydrometra with uterine horn torsion was made. Exploratory laparotomy showed bilateral, segmentally distended uterine horns with unilateral uterine horn torsion. Ovariohysterectomy was performed, and bilateral segmental aplasia of the uterine horns with the development of unilateral uterine horn torsion was diagnosed histopathologically. To the authors' knowledge, this is the first report of uterine horn torsion in conjunction with segmental aplasia of the uterine horn in a bitch. (J Am Anim Hosp Assoc 2012; 48:327-330. DOI 10.5326/JAAHA-MS-5771)
  • Bandula Kumara Wickramasekara Rajapakshage, Masahiro Yamasaki, Masahiro Murakami, Yu Tamura, Sue Yee Lim, Tatsuyuki Osuga, Noboru Sasaki, Kensuke Nakamura, Hiroshi Ohta, Mitsuyoshi Takiguchi
    JAPANESE JOURNAL OF VETERINARY RESEARCH 60 2-3 51 - 61 2012年08月 [査読有り][通常論文]
     
    In our previous study, the level of parasitemia of the diminazene aceturate (DA)-resistant B. gibsoni isolate was continuously lower than that of the wild-type, indicating the possible alteration of energy metabolism in that isolate. Therefore, in the present study, the concentrations of ATP, glucose, lactate, and pyruvate, and the activities of lactate dehydrogenase and pyruvate kinase in the wild-type and DA-resistant isolate of B. gibsoni were measured and compared to investigate the amount of energy generation and the activity of the glycolysis pathway. As a result, the intracellular ATP and glucose concentrations in the DA-resistant B. gibsoni isolate were significantly higher than those in the wild-type. Meanwhile, the concentrations of lactate and pyruvate and the activities of lactate dehydrogenase and pyruvate kinase in the DA-resistant B. gibsoni isolate were not different from those in the wild-type. These results indicated that the DA-resistant B. gibsoni isolate contained a higher ATP concentration than the wild-type, but the activity of the glycolysis pathway was not altered in the DA-resistant B. gibsoni isolate. However, we could not determine the mechanism of the high energy production of the DA-resistant B. gibsoni isolate. Further studies on the energy metabolism of B. gibsoni are necessary to clarify the mechanism of the high energy production in the DA-resistant B. gibsoni isolate.
  • Noboru Sasaki, Nobuki Kudo, Kensuke Nakamura, Sue Yee Lim, Masahiro Murakami, W. R. Bandula Kumara, Yu Tamura, Hiroshi Ohta, Masahiro Yamasaki, Mitsuyoshi Takiguchi
    ULTRASOUND IN MEDICINE AND BIOLOGY 38 1 109 - 118 2012年01月 [査読有り][通常論文]
     
    Ultrasound targeted microbubble destruction has succeeded in delivering drugs and genes. This study was designed to explore characteristics of ultrasound targeted microbubble destruction using short-pulsed diagnostic ultrasound. Canine thyroid adenocarcinoma cells were exposed to short-pulsed diagnostic ultrasound in the presence of cis-diamminedichloroplatinum (II) (cisplatin) and ultrasound contrast agent Sonazoid (R) microbubbles. The cytotoxic effect of cisplatin was enhanced by short-pulsed diagnostic ultrasound and microbubbles. Incubation time with microbubbles influenced the cytotoxic effect of cisplatin. However, exposure duration did not affect the cytotoxic effect of cisplatin. Therefore, short-pulsed diagnostic ultrasound may activate microbubbles near cells and deliver cisplatin into cells. In addition, activation of microbubbles may be concluded in a short time. Our results suggest that short exposure duration could be potentially sufficient to induce efficient drug delivery by ultrasound targeted microbubble destruction using short-pulsed diagnostic ultrasound. (E-mail: mtaki@vetmed.hokudai.ac.jp) (C) 2012 World Federation for Ultrasound in Medicine & Biology.
  • Masahiro Yamasaki, Norihisa Tamura, Kensuke Nakamura, Noboru Sasaki, Masahiro Murakami, Wickramasekara Rajapakshage, Bandula Kumara, Yu Tamura, Sue Yee Lim, Hiroshi Ohta, Mitsuyoshi Takiguchi
    JOURNAL OF PARASITOLOGY 97 6 1190 - 1192 2011年12月 [査読有り][通常論文]
     
    Nystatin is a membrane-active polyene macrolide antibiotic and a channel-forming ionophore. Nystatin exhibits in vitro activity against Babesia gibsoni infecting normal canine erythrocytes containing low potassium (LK) and high sodium concentrations, i.e., LK erythrocytes. The calculated IC(50) value of nystatin against B. gibsoni infecting LK erythrocytes was 31.96 mu g/ml. The anti-babesial activity of nystatin disappeared when B. gibsoni in LK erythrocytes were incubated in culture media containing high potassium concentrations (HK). Moreover, when the parasites were harbored in canine HK erythrocytes, which contained high potassium and low sodium concentrations as a result of high Na-K-ATPase activity, the in vitro anti-babesial activities of nystatin also disappeared, apparently due to protection by HK erythrocytes. This suggested that nystatin could show in vitro anti-babesial activity against B. gibsoni by its ionophorous activity, the same as other ionophores such as valinomycin. Subsequently, the effects of nystatin on the host cells were observed. Nystatin could not modify the intracellular concentrations of potassium, sodium, adenosine triphosphate, or glucose in either LK or HK erythrocytes, although it caused weak hemolysis in HK erythrocytes. In addition, nystatin did not affect the survival of canine peripheral polymorphonuclear leukocytes. In conclusion, nystatin destroyed B. gibsoni by ionophorous activity but did not affect either canine erythrocytes or leukocytes in vitro.
  • Masahiro Yamasaki, Mikiko Ishida, Kensuke Nakamura, Noboru Sasaki, Masahiro Murakami, Wickramasekara Rajapakshage Bandula Kumara, Yu Tamura, Sue Yee Lim, Hiroshi Ohta, Mitsuyoshi Takiguchi
    VETERINARY PARASITOLOGY 180 3-4 215 - 225 2011年08月 [査読有り][通常論文]
     
    Antibodies that recognized either Babesia gibsoni or canine red blood cell (RBC) 70-kilodalton (kDa) protein were detected in serum from acutely and chronically B. gibsoni-infected. In those sera, antibodies that reacted with recombinant B. gibsoni and canine heat shock protein 70 (rBgHsp70 and rcHsp70) were detected; therefore, B. gibsoni and canine RBC 70-kDa proteins seemed to be BgHsp70 and cHsp70, respectively. In infected dogs, the amounts of these antibodies increased after infection. Interestingly, polyclonal antibody raised against rBgHsp70 in two rabbits reacted not only with rBgHsp70 but also with rcHsp70 and native cHsp70 from canine RBCs. Because BgHsp70 showed high homology with cHsp70 (70.8%), anti-rBgHsp70 antibody might cross-react with cHsp70. Additionally, the localizations of both BgHsp70 and cHsp70 were observed by indirect fluorescence assay. As a result, cHsp70 was not found on the membrane surface of erythrocytes, suggesting that erythrocytes would not be targets of anti-cHsp70 antibody. Meanwhile, only exoerythrocytic parasites were stained by anti-rBgHsp70 antibody. This result showed that BgHsp70 would be expressed on the surface of parasites during the exoerythrocytic stage. These results indicated that BgHsp70 was a highly immunogenic protein in canine B. gibsoni infection, and that exoerythrocytic parasites might be targets of anti-BgHsp70 antibody. (C) 2011 Elsevier B.V. All rights reserved.
  • Hiroshi Ohta, Tomoki Yamaguchi, B. K. Wickramasekara Rajapakshage, Masahiro Murakami, Noboru Sasaki, Kensuke Nakamura, Shiang-Jyi Hwang, Masahiro Yamasaki, Mitsuyoshi Takiguchi
    AMERICAN JOURNAL OF VETERINARY RESEARCH 72 8 1046 - 1051 2011年08月 [査読有り][通常論文]
     
    Objective-To examine the expression and distribution of tight junction (TJ) and adherens junction (AM proteins in canine duodenal and colonic mucosa. Sample-Mucosa obtained from 4 healthy Beagles. Procedures-Biopsy specimens of the duodenum and colon were obtained via endoscopy from 4 healthy dogs. The expression patterns and subcelluar localization of claudin-1, -2, -3, -4, -5, -7, and -8; E-cadherin; and beta-catenin in the duodenum and colon were analyzed by use of immunoblotting and immunofluorescence microscopy. Results-In the duodenum, there was clear expression of claudin-3 and -5, E-cadherin, and beta-catenin proteins and weak expression of claudin-7 protein. In contrast, there was clear expression of claudin-2 and -3, E-cadherin, and beta-catenin proteins and weak expression of claudin-5 and -7 proteins in the colon, as determined by use of immunoblotting. As determined by the use of immunofluorescence microscopy, the duodenum and colon had staining for claudin-3 and -5, E-cadherin, and beta-catenin in the most apical region and staining for claudin-7 in the basolateral region. Staining for claudin-2 was also observed in the colon. Conclusions and Clinical Relevance-Information was provided about the expression patterns of TJ and AJ proteins in the duodenum and colon of clinically normal dogs. These results may provide valuable information for use in evaluating the importance of these TJ and AJ proteins in the pathogenesis of inflammatory bowel disease in dogs. (Am J Vet Res 2011;72:1046-1051)
  • Masahiro Yamasaki, Yusuke Kobayashi, Kensuke Nakamura, Noboru Sasaki, Masahiro Murakami, Bandula Kumara Wickramasekara Rajapakshage, Hiroshi Ohta, Osamu Yamato, Yoshimitsu Maede, Mitsuyoshi Takiguchi
    EXPERIMENTAL PARASITOLOGY 127 1 119 - 126 2011年01月 [査読有り][通常論文]
     
    In this study, we attempted to detect Babesia gibsoni in blood smears and formalin-fixed, paraffin-embedded tissues obtained from B. gibsoni-infected dogs using in situ hybridization. Using a digoxigenin-conjugated deoxyribonucleic acid (DNA) probe, both intraerythrocytic and exoerythrocytic parasites in the culture could be specifically stained in blood smears fixed with 4% phosphate-buffered paraformaldehyde. This indicated that genomic DNA extracted from the parasites could be detected using in situ hybridization. Moreover, the parasite could be specifically stained in paraffin-embedded spleen, lymph node, and kidney sections using in situ hybridization. Infected erythrocytes in blood vessels in the spleen and kidney, hemosiderin-laden macrophages in the spleen, and phagocytized erythrocytes, which seemed to be infected with the parasites, in lymph nodes were also specifically stained. This suggests that in situ hybridization can be utilized to investigate both the life cycle of B. gibsoni and the pathological condition of canine babesiosis. (C) 2010 Elsevier Inc. All rights reserved.
  • Shiang-Jyi Hwang, Masahiro Yamasaki, Kensuke Nakamura, Noboru Sasaki, Masahiro Murakami, Bandula Kumara Wickramasekara Rajapakshage, Hiroshi Ohta, Yoshimitsu Maede, Mitsuyoshi Takiguchi
    JAPANESE JOURNAL OF VETERINARY RESEARCH 58 3-4 155 - 164 2010年11月 [査読有り][通常論文]
     
    In our previous report, we developed a diminazene aceturate (DA)-resistant Babesia gibsoni strain that was maintained in culture with 200 ng/ml DA. While developing this strain, we also obtained DA-resistant B. gibsoni variants, which were maintained in culture with DA from 1 to 175 ng/ml for more than 8 weeks. Because heat shock protein 70 (Hsp70) seems to play important roles in adaptation to a stress environment in protozoan parasites, in the present study, we examined the copy number of B. gibsoni Hsp70 (BgHsp70) transcripts of those DA-resistant variants using quantitative real-time reverse transcription-polymerase chain reaction. We found that when wild-type B. gibsoni was exposed to 1 ng/ml DA, the level of BgHsp70 transcripts was decreased at day 14. The copy number of BgHsp70 transcripts in the DA-resistant variant cultured with 1 ng/ml DA was significantly lower than in wild-type B. gibsoni, while those in DA-resistant variants increased with escalating doses of DA from 1 to 75 ng/ml, although they were lower than in wild-type B. gibsoni. However, those in DA-resistant variants cultured with > 125 ng/ml DA were almost the same as wild-type B. gibsoni. These results indicated that the transcript levels of the BgHsp70 gene might be reduced when the parasites are exposed to a low concentration of DA, and then might recover to the normal level after achieving resistance against DA. We expect that further study of the function of BgHsp70 will elucidate the mechanism of drug resistance against DA in B. gibsoni.
  • Hwang SJ, Yamasaki M, Nakamura K, Sasaki N, Murakami M, Wickramasekara, Rajapakshage BK, Ohta H, Maede Y, Takiguchi M
    The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science 72 6 765 - 771 2010年06月 [査読有り][通常論文]
  • Osamu Ichii, Saori Otsuka, Nobuya Sasaki, Akira Yabuki, Hiroshi Ohta, Mitsuyoshi Takiguchi, Yoshiharu Hashimoto, Daiji Endoh, Yasuhiro Kon
    LABORATORY INVESTIGATION 90 3 459 - 475 2010年03月 [査読有り][通常論文]
     
    Identification of factors that exacerbate a disease is important for the development of biomarkers. In this study, we discovered ectopic overexpression of interleukin-1 family, member-6 (IL-1F6) in several murine renal diseases. IL-1F6 participates in cytokine/chemokine production in the epithelium. In PCR array analysis for inflammatory mediators, Il1f6 showed the highest expression in the kidney of the B6. MRLc1 glomerulonephritis model. IL-1F6 was localized in the epithelium from the DCTs to CCDs, which showed tubular dilations or epithelial deciduations. Ultrastructual examination of the epithelial cells revealed that IL-1F6 was localized on the cytoplasmic ribosome, vesicles, and nucleus. In and around these tubules, we found infiltrations of CD3-positive T-cells and nestin- or alpha-smooth-muscle actin-positive mesenchymal cells. Expression of the IL-1F6 protein and Il1f6 mRNA in the kidney was increased by the development of TILs in the B6. MRLc1 model and in lupus (BXSB, NZB/WF1, and MRL/lpr), nephrotic syndrome (ICGN), and streptozotocin-induced diabetic models. IL-1F6 was also detected in the epithelia having squamous or deciduous contours in other organs such as the skin, esophagus, thymus, or uterus. In vitro analysis using M-1 cells from the murine collecting duct revealed that Il1f6 mRNA induction was related to the upregulation of IL-6, TGF-beta receptor-1, and mesenchymal markers and to the downregulation of epithelial markers and changes in the squamous cells of the epithelium. Interestingly, urine Il1f6 mRNA expression was detected earlier than renal dysfunctions in these mouse models. Ectopic overexpression of IL-1F6 in kidneys is associated with TILs and especially with cell infiltrations and changes in epithelial morphology. We propose that local overexpression of IL-1F6 is related to the development of TILs.
  • Kensuke Nakamura, Satoshi Takagi, Noboru Sasaki, Wickramasekara Rajapakshage Bandula Kumara, Masahiro Murakami, Hiroshi Ohta, Masahiro Yamasaki, Mitsuyoshi Takiguchi
    VETERINARY RADIOLOGY & ULTRASOUND 51 1 79 - 85 2010年01月 [査読有り][通常論文]
     
    In six normal beagles and 27 dogs with spontaneous focal or multifocal liver lesions, contrast-enhanced ultrasonography using Sonazoid (R) was performed. Sonazoid (R) is a newly developed second-generation contrast agent with the ability to be used for real-time contrast imaging along with parenchymal imaging. An appropriate protocol for the evaluation of all three phases (arterial, portal, and parenchymal) was established based on the results for normal beagles. By evaluation of the echogenicity of hepatic nodules during the arterial and parenchymal phases it was possible to differentiate malignant tumors from benign nodules with very high accuracy. In 15 of 16 dogs diagnosed as malignant tumors, nodules were clearly hypoechoic to the surrounding normal liver during the parenchymal phase. Additionally, malignant tumors had different echogenicity compared with the surrounding normal liver during the arterial phase in 14 of 15 dogs. In the portal phase, there were no characteristic findings. Contrast-enhanced ultrasonography with Sonazoid (R) appears to improve the characterization of canine focal and multifocal hepatic lesions.
  • Masahiro Yamasaki, Kensuke Nakamura, Norihisa Tamura, Shiang-Jyi Hwang, Muneyoshi Yoshikawa, Noboru Sasaki, Hiroshi Ohta, Osamu Yamato, Yoshimitsu Maede, Mitsuyoshi Takiguchi
    JOURNAL OF PARASITOLOGY 95 6 1532 - 1538 2009年12月 [査読有り][通常論文]
     
    Valinomycin and salinomycin-Na, 2 ionophorous antibiotics, exhibited in vitro antibabesial activities against Babesia gibsoni that infected normal canine erythrocytes containing low potassium (LK) and high sodium concentrations, i.e., LK erythrocytes, which completely lack Na,K-ATPase activity. The level of parasitemia of B. gibsoni was significantly decreased when the parasites were incubated in culture medium containing either 10(-1) ng/ml valinomycin or 10(2) ng/ml salinomycin-Na for 24 hr. Four-hour incubation in the culture medium containing 5 mu g/ml salinomycin-Na led to the destruction of most parasites. In contrast, when the parasites infected canine erythrocytes containing high potassium (HK) and low sodium concentrations, i.e., HK erythrocytes, the in vitro antibabesial activities of both ionophorous antibiotics seemed to be weakened, apparently due to the protection by the host cells. Therefore, differential influences of ionophorous antibiotics on LK and HK erythrocytes were observed. In LK erythrocytes, the intracellular concentrations of potassium, sodium, and adenosine triphosphate (ATP) were not modified, and hemolysis was not observed after incubation in the medium containing each ionophorous antibiotic. These results suggested that these ionophorous antibiotics did not affect cells without Na,K-ATPase, and directly affected B. gibsoni. In HK erythrocytes, the ionophorous antibiotics increased the intracellular sodium concentration, and decreased the intracellular potassium and ATP concentrations, causing obvious hemolysis. Additionally, the decrease of the intracellular ATP concentration and the hemolysis in HK erythrocytes caused by valinomycin disappeared when the activity of Na,K-ATPase was inhibited by ouabain. These results indicate that modification of the intracellular cation concentrations by the ionophorous antibiotics led to the activation of Na,K-ATPase and increased consumption of intracellular ATP, and that the depletion of intracellular ATP resulted in hemolysis in HK erythrocytes. Moreover, the antibabesial activity of valinomycin disappeared when B. gibsoni in LK erythrocytes were incubated in culture media containing high potassium concentrations. This showed that the intracellular cation concentration in the parasites was not modified in those media and would remain the same.
  • OHTA H, TAKAGI S, MURAKAMI M, SASAKI N, YOSHIKAWA M, NAKAMURA K, HWANG SJ, YAMASAKI M, TAKIGUCHI M
    The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science 71 11 1533 - 1535 2009年11月 [査読有り][通常論文]
  • Kensuke Nakamura, Noboru Sasaki, Muneyoshi Yoshikawa, Hiroshi Ohta, Shiang-Jyi Hwang, Takahiro Mimura, Masahiro Yamasaki, Mitsuyoshi Takiguchi
    VETERINARY RADIOLOGY & ULTRASOUND 50 1 104 - 108 2009年01月 [査読有り][通常論文]
     
    Contrast-enhanced ultrasonography has an important role in the detection of tumors in humans. The second-generation contrast agent Sonazoid has the ability of real-time contrast imaging along with parenchymal imaging. The purposes of this study were to determine the effect and duration of Sonazoid on the changes in gray-scale enhancement of canine spleen and to establish an appropriate protocol for contrast-enhanced ultrasonography of canine spleen. Six healthy beagles were injected with an intravenous bolus of Sonazoid. In the spleen parenchyma, the enhancement was maintained up to 30 min after injection. Moreover, for 5-22 s after injection, gray-scale enhancement of splenic arteries afforded arterial imaging. Perfusion of the kidney may be investigated from 3.6 s to 3.5 min after injection of Sonazoid. These results suggest that Sonazoid is applicable to canine spleen parenchymal imaging and that the optimal time for the parenchymal imaging is 7-30 min after injection. The findings of this quantitative study should prove useful in the evaluation of diffuse or focal splenic and renal diseases in dogs.
  • Masahiro Yamasaki, Shiang-Jyi Hwang, Hiroshi Ohta, Osamu Yamato, Yoshimitsu Maede, Mitsuyoshi Takiguchi
    JAPANESE JOURNAL OF VETERINARY RESEARCH 55 4 129 - 136 2008年02月 [査読有り][通常論文]
     
    In the present study, we employed flow cytometry to evaluate the level of parasitemia of Babesia gibsoni infecting canine erythrocytes in vivo and in vitro by using fluorescent nucleic acid staining. Peripheral blood samples from a R gibsoni-infected dog and cultured B. gibsoni parasitizing in canine erythrocytes were stained with a membrane-permeable fluorescent nucleic acid stain, SYTO16. In this study, we utilized normal canine erythrocytes (LK erythrocytes) and canine erythrocytes containing high concentrations of potassium, reduced glutathione, and some free amino acids (HK erythrocytes) as host cells for culture. Parasitized cells in vivo were discriminated completely from unparasitized cells and a correlation (r = 0.998) between the percentage of SYTO16-positive cells and parasitemia in vivo was observed. On the other hand, erythrocytes in vitro could not be divided clearly into parasitized and unparasitized cells. However, when LK erythrocytes were used as host cells, the percentage of SYTO16-positive cells was almost the same as, and was well correlated (r = 0.932) with, the level of parasitemia. When HK erythrocytes were used as host cells, the percentage of SYTO16-positive cells was almost half of, but was correlated (r = 0.982) with, the level of parasitemia. Therefore, we attempted to observe the changes in the percentage of parasitized cells after treatment with antiprotozoal drug or mitochondria. inhibitors by using flow cytometry. The changes in the percentage of SYTO16-positive cells corresponded well with the changes of the level of parasitemia when the parasites in HK erythrocytes were cultured with each compound. The present results suggest that flow cytometric detection using SYTO16 is a rapid and reliable method for monitoring parasitemia both in vivo and in vitro.
  • Konno A, Takiguchi M, Takada K, Usami T, Azumi K, Kubota H, Inaba M, Saegusa J, Kon Y
    Immunogenetics 59 11 853 - 859 2007年11月 [査読有り][通常論文]
     
    Sjogren's syndrome (SS) is caused by an autoimmune sialodacryoadenitis, and up to 5% of patients with SS develop malignant B cell growth. The IQI mouse is a spontaneous model of primary SS in which B cells are the dominant cellular subpopulation among mononuclear infiltrates in sialitis lesions. Understanding the genetic control of aberrant B cell growth in IQI mice may help elucidate the genetic mechanisms involved in B-lineage hyperplasia leading to malignant transformation in human SS. B cell-dominant infiltration in the submandibular glands of 6-month-old IQI and C57BL/6 (B6) mice and their F1 and F2 progenies was quantified as B-lymphocytic sialitis score, and a genome-wide scan of 179 (IQI x B6) F2 females was performed to identify a quantitative trait locus (QTL) controlling this phenotype. A QTL significantly associated with variance in B-lymphocytic sialitis score was mapped to the D6Mit138 marker (position of 0.68cM) on proximal chromosome 6, with a logarithm of odds score of 4.3 (p=0.00005). This QTL, named autoimmune sialitis in IQI mice, associated locus 1 (Asq1), colocalized with Islet cell autoantigen 1 (Ica1), which encodes a target protein of the immune processes that define the pathogenesis of primary SS in humans and in the nonobese diabetic mouse model.
  • Ohta H, Adachi H, Takiguchi M, Inaba M
    The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science 68 5 453 - 463 2006年05月 [査読有り][通常論文]
  • Asanuma T, Kawahara T, Inanami O, Nakao M, Nakaya K, Ito A, Takiguchi M, Hashimoto A, Kuwabara M
    The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science 68 1 15 - 20 2006年01月 [査読有り][通常論文]
  • Takada K, Takiguchi M, Inaba M
    The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science 67 9 955 - 957 2005年09月 [査読有り][通常論文]
  • K Takada, M Takiguchi, A Konno, A Inaba
    JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY 280 5 3982 - 3988 2005年02月 [査読有り][通常論文]
     
    We have recently characterized IQI/Jic mice as a model for Sjogren's syndrome (SS), a chronic autoimmune disease in humans. In SS, local lymphocytic infiltrations into salivary and lacrimal glands frequently develop to the involvement of systemic exocrine and nonexocrine organs, and the mechanism for progression of this disease remains obscure. Herein, we report identification of an autoantigen shared by various target organs in IQI/Jic mice. Polypeptides identified based on immunorecognition by autoantibodies in sera from IQI/ Jic mice affected with autoimmune disease (> 12 weeks of age) were tissue kallikrein (Klk)-1 and -13 and were cross-reactive to the autoantibodies. Interestingly, Klk-13, but not Klk-1, caused a proliferative response of splenic T cells from IQI/Jic mice from the age of 4 weeks onward. In addition, remarkably enhanced expression of Klk-13 was observed in the salivary glands of the mice in accordance with the development of inflammatory lesions. These results indicate that Klk-13 acts as an autoantigen and may increase T cells responsive to organs commonly expressing Klk-13, playing a pivotal role in the etiology of progression of disease in IQI/Jic mice. Our findings provide insights into the contributions of autoantigens shared by multiple organs in the progress of SS from an organ-specific to a systemic disorder.
  • Takiguchi M, Inaba M
    The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science 67 1 57 - 61 2005年01月 [査読有り][通常論文]
  • T Asanuma, Y Matsumoto, M Takiguchi, O Inanami, M Nakao, K Nakaya, A Ito, A Hashimoto, M Kuwabara
    COMPARATIVE MEDICINE 53 6 649 - 656 2003年12月 [査読有り][通常論文]
     
    The early stage of experimentally induced secondary cerebral alveolar echinococcosis (AE) in rats was investigated by use of magnetic resonance imaging (MRI) and immunoblot (western blot) analyses. Thirty-six female Wistar rats (6 to 8 weeks old) were injected intracranially with a 10% homogenate of echinococcal larval tissues in which the concentrations of microvesicles and protoscolices were estimated to be 3.8 and 1.5 x 10(4)/ml, respectively. To observe the fine structure of the rat brain, MRI was performed under a high magnetic field of 7.05 T. Histologic examination also was performed. The T2-weighted MR images revealed a hyperintense region in the cerebral cortex at two weeks after injection of the homogenate. At three weeks after injection, this region was found to have cysts on the basis of results of histologic examination. Signal-void regions corresponding to hyperplasia and the subsequent calcification of the cuticle layer at six and 13 weeks after injection, respectively, were observed in T2-weighted and proton density MR images. On the other hand, at nine weeks after injection, AE was discernible by use of western blot analysis of sera with antibodies of two epitopes (Em18 and Em16) of E. multilocularis. Using this secondary cerebral AE animal model, it was concluded that the MRI method was suitable for early detection of secondary cerebral AE.
  • Konno A, Takada K, Saegusa J, Takiguchi M
    Autoimmunity 36 4 247 - 254 2003年06月 [査読有り][通常論文]
     
    Subpopulations of infiltrating lymphocytes, professional antigen-presenting cells (APCs), and Th1/Th2 cytokines that could initiate an autoimmune sialodacryoadenitis were studied in the IQI/Jic mouse model of primary Sjogren's syndrome. Although lymphocytic infiltrations were first seen in submandibular glands (SMGs) of females and in lacrimal glands (LGs) of males at 8 weeks of age, clusters of MHC class II+, GD11c+, B7-2+ dendritic cells (DCs) were already localized in these tissues at 4 weeks. At 8 weeks, the infiltrating lymphocytes consisted of almost equal numbers of B cells and CD4+ T cells. In the inflammatory foci, MHC class II+, CD11c+, B7-2+ DCs formed network-like structures. Duct cells in the lesions showed immunoreactivities for MHC class II and ALCAM (a costimulatory adhesion molecule). IL-12 and IFN-γ transcripts were detected by RT-PCR in SMGs of females and in LGs of males at 8-12 weeks. These results suggest that the clustered DCs might play an important role in the initiation of the adenitis, and further suggest that the DCs and epithelial cells may participate in the activation of CD4+ T cells. It is also likely that Th1 cytokines mediate the functional interactions between the APCs and CD4+ T cells in the early lesions.
  • M Mochizuki, M Hashimoto, T Hajima, M Takiguchi, A Hashimoto, Y Une, F Roerink, T Ohshima, CR Parrish, LE Carmichael
    JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY 40 11 3993 - 3998 2002年11月 [査読有り][通常論文]
     
    Minute virus of canines (MVC), also known as canine parvovirus type 1, was initially believed to be a nonpathogenic agent, since it was first isolated from canine fecal specimens in the late 1960s. However, subsequent pathological as well as epidemiological studies suggested that MVC is a pathogen of neonatal puppies and is widely distributed among domestic dogs in the United States. The virus also has been shown to cause fetal deaths. Nevertheless, the virus was not detected in dogs outside the United States until recently, presumably because of a lack of widespread availability of the only susceptible canine cell line, WRCC/3873D, used for MVC isolation. We examined 470 clinical specimens from 346 dogs by PCR and detected MVC-specific gene fragments from four diseased puppies (positive rate, 1.2%). Viruses were recovered from three PCR-positive rectal specimens by using WRCC/3873D and MDCK cells. The isolates possessed antigenic and genomic properties similar to those of the U.S. reference strain GA3 and were identified as MVC. In addition, seroepidemiological evidence that 5.0% of dogs possessed anti-MVC antibodies also indicated the presence of MVC infection among dogs in Japan. From this study and several recent European reports describing MVC field cases, it is evident that MVC is distributed among domestic dogs worldwide.

その他活動・業績

受賞

  • 2004年 日本小動物獣医学会北海道獣医師会長賞
  • 1999年 平成11年度日本小動物獣医学会(北海道)獣医師会長賞
  • 1999年 日本獣医学会大会長賞 獣医学奨励賞
  • 1998年 日本獣医学会大会長賞 獣医学奨励賞
  • 1997年 平成9年度日本小動物獣医学会(北海道)地区学会長賞

共同研究・競争的資金等の研究課題

  • 文部科学省:科学研究費補助金(基盤研究(B))
    研究期間 : 2014年 -2016年 
    代表者 : 滝口 満喜
  • 文部科学省:科学研究費補助金(挑戦的萌芽研究)
    研究期間 : 2014年 -2015年 
    代表者 : 滝口 満喜
  • 文部科学省:科学研究費補助金(基盤研究(C))
    研究期間 : 2012年 -2014年 
    代表者 : 山崎 真大, 大田 寛, 滝口 満喜
     
    犬に感染する赤血球内寄生原虫であるBabesia gibsoniのheat shock protein 90 (hsp90)について、平成25年度は以下の研究を行った。平成24年度には、組み替えhsp90蛋白質の作成のためにプラスミドを作成したが、これを大腸菌内に取り込ませ、大腸菌を用いた組み替えBabesia gibsoni hsp90 (Bghsp90)の発現を実施し、組み替えBghsp90蛋白質の作成に成功した。大腸菌の大量培養を実施することでこれを大量に発現させ、組み替え蛋白質に結合させたHisタグを利用して組み替えBghsp90蛋白質を精製した。さらに、組み替えBghsp90蛋白質をウサギに免疫し、ウサギの体内でこの蛋白質に対する抗血清を作成、さらに抗血清から組み替えBghsp90蛋白質を用いてアフィニティー精製を行ってウサギ抗組み替えBghsp90ポリクローナル抗体を作成した。この抗体がB. gibsoniのhsp90に特異的に結合することを確認した後に、これを用いてウェスタンブロッティングおよび免疫染色を行い、B. gibsoniの持つBghsp90蛋白質を検出、定量することに成功した。そこで、これらの技術を用いて、B. gibsoniの野生株、ならびに抗原虫薬であるジミナゼン製剤に耐性を持つ耐性株のhsp90量を比較し、耐性株ではhsp90発現量が減少していることを明らかにした。この結果は、昨年実施したリアルタイムPCR法を用いた遺伝子発現量の定量を行った実験とよく相関したことから、B. gibsoniのジミナゼン耐性株ではBghsp90の発現量が低下していることが明らかになった。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(基盤研究(C))
    研究期間 : 2011年 -2013年 
    代表者 : 滝口 満喜, 山崎 真大, 大田 寛
     
    本研究の目的は、伴侶動物における超音波検査による客観的病態診断の確立に向けた基盤を形成し、その臨床応用の進展を検討することである。まず、超音波造影剤ソナゾイドを用いた造影超音波検査の臨床応用の適用拡大を目的として、未だに診断が困難な膵炎に着目し、正常犬の膵臓の灌流状態に関する基礎的知見を得た。次いで、実験的に作出したセルレイン誘発性急性膵炎モデルにおける造影超音波検査所見を解析して、膵臓の血流変化に着目した急性膵炎の新しい診断基準を確立することを目指した。その結果、超音波造影剤ソナゾイドのボーラス投与(0.01ml/kg)では膵臓の至適観察時間が16秒と短かったため、ソナゾイドを0.05ml/kgで持続点滴することで観察時間を150秒に大幅に延長させる造影検査法を確立した(J Vet Med Sci, 75:1601-1607, 2013) 。また、セルレイン誘発浮腫性膵炎では、正常時に比べて膵実質のエコー輝度のピークまでの到達時間が短縮し、最高輝度が上昇することが明らかとなった(J Vet Intern Med, 28:496-503, 2014) 。これまでソナゾイドを用いた犬の膵臓の造影超音波検査に関する報告は皆無であり、本研究成果によって、犬の膵臓の造影超音波検査法が確立され、実験的に作出した浮腫性膵炎における膵臓の灌流状態の変化の特徴が明らかになったことは、現在進行中の膵炎の臨床例での解析に向けてその礎を築くことができた。臨床例での解析結果も実験膵炎と同様の結果が得られ、本年6月のアメリカ獣医内科学会で発表する予定である。加えて、左心房機能に着目した心エコー図検査による新たな心機能評価法の確立を目指し、正常犬の左心房面積の時相による変化を解析して正常値を確立するとともに、本手法の再現性を明らかにした(Am J Vet Res, 74:864-869)。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(挑戦的萌芽研究)
    研究期間 : 2011年 -2012年 
    代表者 : 園山 慶, 坪田 敏男, 滝口 満喜
     
    冬眠動物における腸内細菌の制御と腸粘膜バリアについて解析した。シリアンハムスターの冬眠個体では小腸管腔内の分泌抗体濃度が高く、感染防御に貢献している可能性が考えられた。実際、冬眠ハムスターでは腸間膜リンパ節への細菌の移行は認められなかった。また免疫組織におけるリンパ球プロファイルの解析の結果、冬眠期においても消化管粘膜における感染防御機能および免疫制御機能が維持されていると推察された。さらに、冬眠ハムスターの小腸粘膜上皮における細胞更新が著しく遅滞しており、それにより細胞寿命の延長にともなう細胞老化が生じていることが推察された。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(挑戦的萌芽研究)
    研究期間 : 2009年 -2010年 
    代表者 : 稲波 修, 滝口 満喜, 山盛 徹
     
    本研究では、p34^-サイクリンB1によるリン酸化部位である34番目のスレオニン(T)をアラニン(A)へ置換したT34A変異サバイビンのN末端に膜透過性ペプチドTAT配列を付加した融合蛋白質を作成し、腫瘍治療におけるTATペプチドによる蛋白質導入技術の有効性と、T34A変異サバイビンのcolon26マウス移植固形腫瘍モデルへの局所投与と放射線照射の併用による抗腫瘍効果について検討した。TATペプチドを付加したサバイビン蛋白質は、腫瘍組織への直接投与で、短時間に腫瘍細胞内へ導入された。X線2Gyの単独照射は、有意な腫瘍の増殖遅延を示さなかった。また、TAT融合T34A変異サバイビンの腫瘍細胞への単独投与も、有意な増殖遅延を示さなかった。一方、X線2GyとTAT融合T34A変異サバイビンの併用は顕著な増殖遅延を示した。組織学的な検索によりX線2GyとTAT融合T34A変異サバイビンの併用による抗腫瘍効果はアポトーシスの誘導によるものであることが示された。さらに、併用により腫瘍組織中の増殖細胞数の減少が観察されたことより、アポトーシス誘導は増殖細胞に特異的に起こることが示唆された。細胞周期関連蛋白質の検出から放射線照射によるG2/M期停止が示唆された。これらの結果から、TAT融合T34A変異サバイビンとX線2Gyの併用による抗腫瘍効果はX線照射で生じる細胞周期チェックポイントに関連したT34A変異サバイビンによるアポトーシス誘導の増強であると考えられた。以上の結果から、TATペプチドによる蛋白質導入技術が腫瘍治療において有効であり、T34A変異サバイビンの投与は腫瘍の放射線治療において、放射線による抗腫瘍作用を増強することが明らかにされた。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(基盤研究(C))
    研究期間 : 2006年 -2008年 
    代表者 : 今野 明弘, 滝口 満喜, 滝口 満善
     
    シェーグレン症候群(Sjogren's syndrome ; SS)モデルIQIマウスにおけるB細胞優勢の下顎腺炎(B細胞性下顎腺炎)を遺伝学的に解析した。その結果、B細胞性下顎腺炎の量的形質遺伝子座(QTL)は少なくとも3個有り、単独で効果を発揮する主要QTL(autoimmune sialitis in IQImice, associated locus 1 ; Asq1)が第6染色体前端に、Asq1の効果を増強するエピスタシスQTLが第3染色体後方(Asq2)に、また、逆にAsq1の効果を抑制する抵抗性遺伝子座が第1染色体後方(Asq3)に位置することを明らかになった。Asq1の1LOD区間内に位置するIca1に注目し、そのcDNA塩基配列を対照C57BL/6(B6)と比較した結果、IQI-B6間で6個の一塩基多型があり、2個のアミノ酸多型が生じていた。また、ウエスタンブロット法では、IQエマウスの血清中に抗Ica1自己抗体の存在を示すバンドカミ検出された。以上の結果より、IQIマウスにおいて、Ica1に対するB細胞自己免疫が成立していることが明らかになり、原因として、1ca1の塩基多型の可能性が挙げられた。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(基盤研究(C))
    研究期間 : 2005年 -2006年 
    代表者 : 滝口 満喜, 谷山 弘行, 今野 明弘
     
    高次生体における免疫システムは、外来抗原に対して排除応答を示すが自己抗原に対しては応答しない。この抗原特異的に不応答を示すトレランスは免疫系の重要な特徴で、自己抗原に対するトレランスの破綻は、免疫系による生体自己組織への攻撃と破壊すなわち自己免疫疾患をもたらす。申請者らは、代表的な自己免疫疾患であるシェーグレン症候群(SS)のモデルマウスであるIQI/JicマウスではSSに特徴的な涙腺炎や唾液腺炎などに加え、加齢に伴い膵臓、腎臓、肺などに病変が拡大することを示すとともに、その原因となる自己抗原が臓器特異的なカリクレイン(Klk)13であることをつきとめた。さらに、その発症における末梢性トレランスの関与を調べる目的で、生後3日目に胸腺を摘出して末梢性トレランスを担う制御性T細胞を除外したところ、唾液腺の病変に変化が見られなかったことから、本マウスのSS様病変の形成は末梢性トレランスの破綻によるものではないことを示した。また本マウスではマイトージェン刺激に対するIL-2の産生が顕著に低下しており、これがIL-2遺伝子発現の低下に起因することを確認した。IL-2はin vivoにおいて自己抗原に対する免疫寛容の維持に重要な役割を果たしていることが知られており、これらの結果からT細胞活性化に伴うIL-2の産生低下が本マウスにおける自己寛容の破綻を引き起こし、自己免疫疾患の発症に直接関与している可能性が考えられた。本研究の結果をまとめると、IQI/JicマウスではT細胞の活性化に伴うIL-2産生不全が制御性T細胞とは異なる自己寛容機構を破綻させ、制御性T細胞に依存しない自己寛容の破綻がKlk-13を含む自己抗原に対する持続的な自己反応性T細胞の活性化を引き起こし、唾液腺から他の標的臓器への炎症波及に関与して全身病態の形成に重要な役割を果たすと考えられた。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(基盤研究(C))
    研究期間 : 2004年 -2004年 
    代表者 : 稲葉 睦, 小川 博之, 国枝 哲夫, 鈴木 勝士, 北川 均, 滝口 満喜
     
    1)学術雑誌等の調査により、過去40年間に国内外で報告された動物の遺伝性疾患、ならびに動物のゲノム解析について、その内容と現在の研究動向を検討した。その概要は、獣医学教科書である「獣医内科学」等に記載のほか、獣医臨床遺伝研究会(平成17年3月)、獣医学会学術集会シンポジウム(平成17年4月)、ならびにHP(平成17年5月開設予定)にて報告する。2)総括班、調整班が4回の討議を行い、上記を含め以下の合意に達した。◆対象とする疾患:特に国内で問題となっている、あるいは特徴的な疾患で、その解析が、産業動物の損耗防止や分子育種につながる牛・豚の疾患、人間社会との共存や福祉の向上に資する犬・猫の疾患、生命科学や基礎医学の基礎理論構築、医療への応用に発展し得る動物疾患。◆研究の展開:(1)特定の単一遺伝子疾患の原因遺伝子異常の解析、ならびに発症の分子機構とそれに基づく分子の生理機能の解明。(2)多因子疾患臨床症例の詳細な病態分類と原因となる分子・遺伝子異常の探索。◆研究組織:特定領域研究の創設に際しては、臨床知見の集積を含めた研究内容の特性に鑑みて5年間程度の研究展開を目指す。総括班、調整班のもとに上記(1)と(2)の研究展開の基盤となる2〜3の計画研究班を設置して重点的に基礎研究を実施するほか、2年間の公募研究をそれぞれ20件程度ずつ採用する。2)下記の研究集会、公開シンポジウムを開催し、動物遺伝性疾患概念の周知と研究者-臨床獣医師間交流等を図った。◆「近未来の小動物医療-分子医学の潮流-」平成16年9月(札幌)Dr.U.Giger (Univ.Pennsylvania)ら講師4名、参加者約200名。◆「臨床遺伝研究会・農水事業・科研費ジョイントフォーラム」平成17年3月(天童)講演者延べ25名、参加者約80名。これらをもとに、特定領域研究等の具体化を進める。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(萌芽研究)
    研究期間 : 2003年 -2004年 
    代表者 : 滝口 満喜, 高桑 雄一, 田島 誉士, 稲葉 睦
     
    本研究は、上皮や実質組織の破壊や低形成をともなう多彩な動物疾患の臨床知見の集積と分子病態解析の成果から派生したアイディアに基づくものである。本計画は、"細胞間接合の遺伝的異常と疾患"という新しい観点から、従来、遺伝性素因の存在を疑われながら病因のとらえどころがなかった組織破壊を伴う疾患や臓器低形成の分子機構を解明することを将来目標としている。本萌芽研究では、上記仮説実証の第一歩として、タイトジャンクション(TJ)に分布するCL分子ファミリーに焦点を絞り、まず正常組織における分子群の臓器、組織分布を明らかにし、次いで腎、肝、消化管、皮膚の組織破壊、あるいは低形成を呈する臨床例におけるCL分子の異常を検証することを目的とした。クローディン(CL)分子ファミリーは現在までにヒト、マウスでいずれもCL-1〜CL-18までの18分子種が知られている。代表者らは、これまで牛CL-16に関する解析を行ってきたが、本研究計画では小動物(犬と猫)を対象とするため、まずこれら18種のCLを各々同定するためのツールとして特異抗体を作製することから着手した。犬、猫、個々のCL分子にそれぞれ対応する抗体を作製するのは煩雑であり、また交差性が期待されるため、まず犬CLsに対する抗体を作出、必要に応じて抗猫CLs抗体を作製することとした。抗原として用いる各CL分子C末端ペプチド(C末端の細胞質ドメイン30-40アミノ酸残基)を調製するために、各CL分子のcDNAをRACE法で単離し、GST-融合タンパク質ベクターにクローン化した。cDNA単離に利用する臓器、あるいはプライマーはヒトでの知見に基づいた。GST-融合タンパク質として得た各分子から必要なC末端ペプチドを精製し、ウサギに免疫して、アフィニティー精製によって特異抗体を得た。次いで、イムノブロッティング、ならびに正常組織を用いた蛍光抗体法で反応性と特異性を検定した。臨床例を用いた検討では、様々な疾患でCL分子の局在や発現量に変化が認められたが、現時点では疾患特異的に変動する分子の特定には至らず、今後、さらなる解析が必要である。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(基盤研究(B))
    研究期間 : 2002年 -2004年 
    代表者 : 廉澤 剛, 日下 雅実, 笠岡 達彦, 落合 謙爾, 滝口 満喜, 大泉 巌雄, 日下 雅美
     
    悪性腫瘍が自然発生した犬に、血管新生阻害剤TNP-470とサリドマイド、および分化誘導剤OCTを投与し、これらの薬剤の副作用をおもに調べ、さらに可能な範囲で抗腫瘍効果について調べた。TNP-470は、1回あたり12.5〜223mg/m^2の量で、皮下あるいは静脈内に週1〜3回の割合で投与した。この研究薬は47症例に使用し、副作用と考えられる徴候として、ふらつきあるいは震えが9症例に認められ、次いでけいれん発作が4症例に、出血、食欲低下および嘔吐がそれぞれ1症例に認められた。サリドマイドは、1回あたり5.0〜20mg/kgの量で毎日経口投与した。この研究薬は、23症例に投与され、副作用と考えられる徴候として、ふらつき、沈鬱あるいは便の軟化が6症例に認められた。OCTは、1回あたり0.03〜0.12μg/kgの量で毎日経口投与した。この研究薬は、31症例に投与されたが、2週以上にわたり投与された21症例中7症例に高Ca血症が認められた。高Ca血症は休薬によって1週以内に正常に復した。いずれの薬剤においても、副作用と血液検査の変化に重篤なものはなかった。抗腫瘍効果に関しては、比較対照がないため腫瘍の成長速度や遠隔転移率を抑制しているかを明らかにすることは難しかったが、いくつかの症例で原発巣あるいは転移巣に縮小が認められた。また、高率に転移が生じる骨肉腫などの症例においては、長期にわたって転移が生じない症例も認められた。以上のことから、今回用いた血管新生阻害剤と分化誘導剤は、従来の抗癌剤と比較して重篤な副作用は極めて少なく、また腫瘍が縮小する症例を認めたことから、腫瘍休眠療法を目指す治療薬としてさらに検討する価値が大きいと思われた。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(萌芽研究)
    研究期間 : 2002年 -2003年 
    代表者 : 稲葉 睦, 高桑 雄一, 滝口 満喜
     
    本研究の目的は、牛グライコフォリンC(GP-C)の発現、遺伝子型-表現型連関について従来得た以下の仮説を検証し、S85によるポストゴルジ膜移行、あるいはERレトリーバル制御の分子機構を解明することを目的とする。<仮説1>S85のリン酸化等の翻訳後修飾がポストゴルジ膜移行を決定づける未知のシグナルとして機能している。あるいは、<仮説2>S85を含む周辺配列が未知の膜移行認識シグナルとなっている。仮説1との相乗作用もあり得る。1.仮説1を検証するために、GST-fused GP-C(C末端細胞質ドメイン)を調製し、これを基質とするProtein kinaseを解析した。その結果、Casein kinase I (CKI)がGP-CのC-末端細胞質ドメインをリン酸化することが判明した。CKIは、遺伝子多型であるS85、N85のGP-Cの両者をリン酸化することから、S85以外のSer/Thr残基もリン酸化されることが推定された。2.COS細胞、K562細胞におけるGP-C発現系を構築し、それらのリン酸化動態と細胞膜への移行を解析した。これらの細胞ではGP-Cのリン酸化が観察されたが、少なくともCKI阻害剤存在下でのリン酸化の程度は対照と、あるいはGP-CS85とN85とで相違なく、また細胞膜移行の程度にも顕著な差は認められなかった。3.翻訳後修飾としてO-GlcNAc付加を推定し、その検証を行ったが、O-GlcNAc存在は検出されなかった。4.仮説2を検証するためにS85を中心にC末端細胞質ドメインのアミノ酸残基を欠く変異体を作製し、培養細胞に導入してその膜移行を解析したところ、むしろにC末端領域を欠く変異体の膜移行が低下することが判明した。これら変異体は、ERに留まり分解除去を受けた。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(基盤研究(B))
    研究期間 : 2002年 -2003年 
    代表者 : 稲葉 睦, 滝口 満喜, 稲波 修, 前出 吉光, 山本 雅之, 高桑 雄一, 斉藤 昌之
     
    本研究は、赤芽球系細胞における赤血球膜骨格組み込みの"ユニット工法仮説"実証を目的とする。骨髄赤芽球系細胞、赤芽球系培養細胞を用い、遺伝子導入とタンパク質の生化学的・形態学的解析で以下の成果を得た。●赤芽球系培養細胞K562を用いて、膜骨格と相互作用する主要膜タンパク質、バンド3、グライコフォリンC、アンキリン、プロテイン4.1、ならびにそれらの変異体の安定発現系を構築し、細胞内局在と赤芽球分化誘導時の挙動や細胞分化・増殖に及ぼす影響を検討した。膜内在性であるバンド3とグライコフォリンCはともにER/Golgiを経て細胞膜に移行した。これらと膜骨格を連結すると考えられるアンキリンとプロテイン4.1も同様にERとGolgiに局在が認められ、これは赤芽球系分化誘導後にも変化しなかった。また、内因性のアンキリンやプロテイン4.1、さらにスペクトリンも主にER/Golgiに分布が認められた。したがって、膜骨格組み込みは赤芽球系細胞の細胞膜ではなく、ERで生じる現象であることが明らかになった。●同様の解析で、K562細胞におけるバンド3分子の恒常的発現により細胞増殖速度が約70%に低下すること、誘導剤による赤芽球系分化速度も低下する現象が見出された。しかし、誘導可能な赤芽球までのステージでは、細胞骨格タンパク質の局在や細胞形態に対する影響は認められなかった。●骨髄赤芽球系前駆細胞ではスペクトリン等の膜骨格タンパク質の合成とER/Golgiと思われる膜画分への移行がまず生じ、次いでバンド3等の合成と細胞膜での発現が観察された。膜骨格タンパク質の分布は脱核前後で急激に変化した。以上のように、本研究からは、膜骨格タンパク質の組み込みが細胞内小器官の膜上で既に生じることが明らかになった。ただし、その細胞膜への移行がいわゆる小胞輸送による"ユニット"としてか否かの検証には、新たな手段を講じる必要がある。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(基盤研究(C))
    研究期間 : 2000年 -2001年 
    代表者 : 稲波 修, 滝口 満喜, 松田 彰, 桑原 幹典
     
    本研究は、アポトーシスによる細胞死を効率的に引き起こすことを目指したヌクレオシド系増感剤を開発し、獣医領域で問題となるネコ白血病、イヌリンパ腫などの治療のための制がん剤の開発を目的とする。モデル細胞としてヒト胃癌細胞MKN-45細胞とMOLT-4細胞の制がん剤による細胞死の機構を検討した。制がん剤としては1-(3-C-ethynyl-beta-D-ribo-pentofuranosyl)cytosine(Ecyd)と2'-chrolo-deoxyadenosine(Cl-dAde)を化学合成し、それぞれ検討した。その結果、両細胞ともそれぞれの制がん剤でカスパーゼファミリーの活性化を伴うアポトーシスを効率よく引き起こすことが明らかとなった。そのメカニズムには細胞によって差があり、MKN-45細胞についてはp53依存性のアポトーシスであり、MOLT-4の場合はp53非依存性、Fas活性化依存性のアポトーシスであることが明らかとなった。MKN-45細胞の場合は、蛋白合成に非依存性のカスパーゼ3依存性のアポトーシスを、MOLT-4細胞の場合は、アポトーシス誘導に蛋白質合成を必要とし、FASの活性化、カスパーゼ8を活性化し、カスパーゼ3に依存するアポトーシスを引き起こすことが明らかとなった。この結果は、細胞の種類に依存してアポトーシスを引き起こすシグナル経路の違いを意味している。また、単独では細胞死を起こさない量のEcydで処理した細胞は、放射線照射によって、効率よくネクローシスをアポトーシスに変換できることも明らかとなった。そのメカニズムとして放射線誘発G2期停止のECydによる解除作用が重要であり、G2期解除に伴ってアポトーシスが誘導されることが明かとなった。動物癌細胞への応用という点では、イヌリンパ腫由来CL細胞で、あるいはネコ白血病由来末梢リンパ球でもこれらの薬剤は有用であることが確かめられた。以上の結果は放射線や制癌剤による獣医臨床応用において重要な知見である。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(奨励研究(A))
    研究期間 : 1999年 -2000年 
    代表者 : 滝口 満喜
     
    本研究の目的は、MRL/lprマウスにおけるCD28/CTLA4-B7補助シグナル非依存性の肺病変について、遺伝背景の異なるマウスを用いることで病変形成に関わる原因遺伝子を探索すること、さらに、肺病変発症機序を解明するために、免疫組織化学的および臨床病理学的に詳細に解析して、病変に関わるサイトカインを同定し、抗サイトカイン抗体の投与実験によってその関わりを証明することである。まず、MRL/lprに加えて、遺伝背景の異なるC57BL6/lprおよびC3H/He/lprマウスにもCTLA4IgGを生後24時間以内から1回100μg、週3回腹腔内に投与し、20週齢で肺の病理組織学的検索を行った。その結果、MRL/lprではCTLA4IgG投与の有無に関わらず強い肺病変が認められた。C57BL6/lprではCTLA4IgG投与により肺病変が有意に抑制され、C3H/He/lprでは対照と同程度の軽度の単核球浸潤が認められた。以上のことから、CD28/CTLA4-B7補助シグナル非依存性に生じる肺病変は、MRL遺伝背景とともにlpr遺伝子つまり、Fas分子の異常によって誘導されることが示唆された。次に、MRL/lprマウスの肺病変発症機序の解明を目的として、MRL/lprマウスの肺組織から単核球を分離し、フローサイトメトリーによる解析を行った。表面抗原の解析から、CTLA4IgG投与によってT細胞の活性化は抑制されたが、マクロファージの活性化は抑制されないことが判明した。また、細胞内サイトカインの解析から、マクロファージからのインターフェロンガンマの産生が抑制されないことが明らかとなった。以上の事から、MRL/lprマウスにおけるCD28/CTLA4-B7補助シグナル非依存性に生じる肺病変の形成には、マクロファージから産生されるインターフェロンガンマが関わっていることが示唆された。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(基盤研究(C))
    研究期間 : 1997年 -1998年 
    代表者 : 安田 準, 滝口 満喜
     
    獣医臨床における自動分析機器使用を前提とした生化学検査の再評価項目として、血清アルカリフォスファターゼ(ALP)アイソザイムとアデノシンデアミナーゼ(ADA)について検討し、犬や乳牛の肝臓や腫瘍疾患における病態診断の精度が向上した。犬の血清ALPアイソザイム分画をレバミゾール活性阻害法によりコルチコステロイド誘発性アイソザイム(CALP)、レクチン沈殿法により骨性アイソザイム(BALP)を定量することにより、肝性アイソザイム(LALP)も計算で求めて、自動分析機器によるALPアイソザイム分画定量法を確立した。ステロイド長期投与犬におけるLALPとCALPの活性変動と肝臓の組織病理学的変化との関係では、肝細胞の空胞変性が軽度の場合はLALP、重度の場合にはLALPとCALPの活性上昇の関与が明らかとなった。健康乳牛の血清ADA平均値は5.4IU/lであった。また肉眼的肝臓病変を認めた乳牛の肝臓片と血清とを採取し、肝組織所見とADA値との関連性について検討した。肝組織学的所見を炎症性細胞浸潤の程度で分類し血清ADA活性値を比較したところ、炎症性細胞浸潤の程度が重度である個体ほど高ADA活性を示した。乳牛ではADA特有の病態変動が観察され、肝臓病変の質的な診断意義が示唆された。健康犬の血中ADA活性の平均値は血清で4.46IU/l、血漿で4.99IU/lであり有意差は認められなかったが、検体の保存条件による変動が大きく、犬の血中ADAは他の動物に較べて非常に不安定であることが示唆された。腫瘍性疾患の血漿ADA活性値はリンパ腫、白血病、肝腫瘍、髄膜腫などの症例で治療開始前のADA活性に上昇が認められ、化学療法開始後は低下する傾向を示した。1年以上寛解が得られているリンパ腫、肺転移腫瘍、腹腔内腫瘍、肥満細胞腫などでは正常範囲内であり、ADAはリンパ系腫瘍の治療経過を観察する上で、病態の指標となりうることが示唆された。
  • 自己免疫疾患の分子機構
    研究期間 : 1998年
  • Molecular Mechanism of Autoimmune disease
    研究期間 : 1998年
  • 文部科学省:科学研究費補助金(奨励研究(A))
    研究期間 : 1995年 -1995年 
    代表者 : 滝口 満喜
     
    本研究の目的は、外科的に作出した慢性腎不全の猫に対する摂取蛋白量の影響を光学および電子顕微鏡を用いて組織学的に検索するとともに、慢性腎不全の進展因子として注目されている各種サイトカインや成長因子の関わりを検証することであった。慢性腎不全猫の作出に当たっては、右腎摘出に加え左腎動脈を部分結紮する腎亜全摘モデルの作出を試みたが、高度の手術手技を要することに加えて術後の状態が不安定であったことから、猫に与えるストレスが過大すぎると判断し、腎毒性を有する薬物(ピューロマイシン・アミノヌクレオシド)を投与することで腎障害の誘発を試みた。このピューロマイシン・アミノヌクレオシドはラットに特異的に腎障害を引き起こすことが知られているが、猫での報告はない。そのため、投与量および投与間隔を変えて実験を行う必要があった。その結果、ピューロマイシン・アミノヌクレオシドを猫に投与することによって蛋白尿をきたし、一部の糸球体に硬化病変が誘発されることが示唆された。また、電子顕微鏡によって糸球体上皮細胞足突起の癒合が観察された。血清生化学的にはBUNおよびクレアチニン値に上昇が認められた。尿中酵素ではNAGに変化が認められ、尿中サイトカインではIL-6が病変の進行に伴い増加する傾向が伺えた。以上のことからピューロマイシン・アミノヌクレオシドは猫に腎障害をもたらすことが示唆された。このモデルにおける病変の進展に及ぼす摂取蛋白量の影響については、現在、実験を継続中である。
  • 文部科学省:科学研究費補助金(一般研究(B))
    研究期間 : 1994年 -1995年 
    代表者 : 橋本 晃, 滝口 満善, 安田 準
     
    本研究課題の実施計画に基づいて行った2年間で得られた成績は以下に要約できる。1.超音波内視鏡(EUS)の臨床的応用:健康なビ-グル犬を用い、正常消化管および腹部各臓器の抽出方法およびEUS画像の集積を行った。EUSは特に消化管壁、胆嚢および膵臓の抽出に優れていた。セルレイン誘発性の実験的膵炎および人工的に胃壁に作出した血腫や嚢胞のEUSの成績から、膵臓疾患や消化管壁の局在性病変の診断にEUSの有用性が大きいことが明らかにされた。カラードプラ法の併用により、さらに診断精度および病変の質的変化の理解に役立つ情報が得られることが示唆された。以上の成績から、EUSは小動物臨床における有用性が高く、今後のさらなる進展が強く示唆された。2.超音波(US)ガイド下穿刺法の応用:犬のステロイド誘発性肝障害、猫の実験的脂肪肝やピューロマイシン投与による腎障害、さらには前立腺液採取のための二重バルーンカテーテル法の応用に関する研究で、それぞれの標的臓器の経時的な病理組織学的検索にUSガイド下穿刺法による生検を行った成績から、USガイド下穿刺法は小動物の種々臓器の生検に有用であり、応用性の進展が期待できると思われた。3.実験動物へのUSの応用:ウサギを用いたセファロリジン誘発性腎障害の腎病変のUS検査および猫条虫感染ラット肝臓の寄生虫性嚢胞の経時的変化のUS検査で得られた成績から、US検査は実験動物を用いる種々の研究において、新しい解析手技としての有用性、応用性が高いことが明らかにされた。4.小動物における腫瘍症例の画像診断への応用:犬および猫の各種腫瘍にUS診断を行い、多くの画像情報を集積した。またカラードプラ法の併用やUSガイド下穿刺法の併用によって腫瘍の確定診断や腫瘍の質的性状など診断精度の向上に資する成果も得られた。本研究によって得られた成果は、今後の獣医画像診断学の新たな展開に役立つ情報になるであろう。
  • 小動物の超音波診断
    研究期間 : 1993年
  • 小動物自然発生疾病の画像診断
    研究期間 : 1993年
  • Small Animal Dignostic Ultrasound
    研究期間 : 1993年
  • Small animal Diagnostic Imaging
    研究期間 : 1993年
  • 自己免疫の分子機構
  • 自然発生動物疾病の画像診断
  • Molecular pathogenesis of autoimmune diseases
  • Diagnostic imaging of spontanous animal diseases

教育活動情報

主要な担当授業

  • 獣医科学特別研究
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 博士後期課程
    開講学部 : 獣医学研究科
  • 内科学総論
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
    キーワード : 内科学、身体検査、診断、説明と同意
  • 獣医科学特論演習
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 博士後期課程
    開講学部 : 獣医学研究科
  • 内科学実習
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
    キーワード : 獣医内科学, 診断法,処置法,予防法,治療法
  • 先端獣医科学特論A 獣医内科学特論
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 博士後期課程
    開講学部 : 獣医学研究科
  • コミュニケーション論演習
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
    キーワード : 獣医療、調査研究、コミュニケーション、インフォームド・コンセント
  • 先端獣医科学特論A 国際獣医科学特論:臨床獣医学
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 博士後期課程
    開講学部 : 獣医学研究科
  • 応用内科学
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
    キーワード : 臨床遺伝学、栄養学、栄養管理、行動学、問題行動、行動治療
  • 獣医科学特別研究
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 博士後期課程
    開講学部 : 獣医学院
  • 内科学各論
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
    キーワード : 内科疾患、病態生理、臨床徴候、診断と治療
  • 獣医科学特論演習
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 博士後期課程
    開講学部 : 獣医学院
  • 伴侶動物夜間・救急獣医療実習
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
    キーワード : 夜間診療、救急処置
  • 獣医科学基礎科目 臨床疾病学特論
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 博士後期課程
    開講学部 : 獣医学院
  • 伴侶動物獣医療実習
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
    キーワード : 伴侶動物、内科、外科、検査、診断、治療
  • 先端獣医科学科目 獣医内科学特論
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 博士後期課程
    開講学部 : 獣医学院
  • 放射線獣医療・画像診断学
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
    キーワード : 画像診断 X線 超音波 CT MRI 核医学 造影検査 放射線防護
  • 総合専門臨床特論
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 博士後期課程
    開講学部 : 獣医学院
  • 放射線獣医療・画像診断学実習
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
    キーワード : 画像診断 X線 超音波 CT 造影検査 放射線防護
  • 伴侶動物管理学演習
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
  • 獣医臨床総合実習
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
  • 獣医専門科診療実習
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
  • 伴侶動物獣医療実習
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
  • 伴侶動物夜間・救急獣医療実習
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
  • 研究・臨床セミナー
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部
  • アドバンスト演習
    開講年度 : 2018年
    課程区分 : 学士課程
    開講学部 : 獣医学部

大学運営

学内役職歴

  • 2014年4月1日 - 2016年3月31日 大学院獣医学研究科附属動物病院長
  • 2016年4月1日 - 2018年3月31日 大学院獣医学研究院附属動物病院長
  • 2017年4月1日 - 2019年3月31日 大学院獣医学研究院副研究院長
  • 2018年4月1日 - 2020年3月31日 大学院獣医学研究院附属動物病院長
  • 2019年4月1日 - 2021年3月31日 教育研究評議会評議員
  • 2019年4月1日 - 2021年3月31日 大学院獣医学研究院副研究院長

委員歴

  • 2003年   日本小動物獣医学会   理事   日本小動物獣医学会
  • 2002年   日本獣医画像診断学会   理事   日本獣医画像診断学会


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