研究者情報

マスター

アカウント（マスター）

• 氏名

  安田　元昭(ヤスダ　モトアキ), ヤスダ　モトアキ

所属（マスター）

• 歯学研究院　口腔医学部門　口腔病態学分野

所属（マスター）

• 歯学研究院　口腔医学部門　口腔病態学分野

独自項目

syllabus

• 2021, 口腔感染制御学, Control of Oral infection, 博士後期課程, 歯学院, 微生物、自然免疫、受容体、Toll-like receptor、インフラマソーム
• 2021, 歯学研究概論, Research Basics in Dental Sciences, 博士後期課程, 歯学院, 歯学研究，基本的研究技法，基礎知識
• 2021, 口腔感染制御学研究, Studies on Control of Oral Infection, 博士後期課程, 歯学院, 腸内細菌, 口腔細菌, ウイルス, 免疫, 感染
• 2021, 口腔生物学と医学, Oral Biology and Medicine, 博士後期課程, 歯学院, feeding behavior, vomiting, conditioned taste aversion (CTA), nausea, GLP-1, bacteriology, immunity, lipoprotein, salivary gland, oncogene, oral cancer, orofacial pain, tumor virus, dental materials, cementum, HIV, matrix cell biology
• 2021, 分子生物学的解析技法, Basic Technique of Cellular and Molecular Biology, 博士後期課程, 歯学院, 分子生物学、ＰＣＲ
• 2021, 分子生物学的解析技法, Basic Technique of Cellular and Molecular Biology, 博士後期課程, 歯学院, 分子生物学、DNA、プラスミド、制限酵素
• 2021, 口腔分子免疫学, Oral Molecular Immunology, 博士後期課程, 歯学院, DNAウイルス
• 2021, 口腔分子免疫学研究, Oral Molecular Immunology, 博士後期課程, 歯学院, アデノウイルス，自然免疫
• 2021, 関連臨床医学, 学士課程, 歯学部, 関連臨床医学、耳鼻咽喉科学、精神医学、臨床心理学、眼科、皮膚科、産婦人科
• 2021, 全人教育演習, 学士課程, 歯学部, 人間性、少人数ディスカッション
• 2021, 歯科学概論Ⅱ, Introduction to Dentistry Ⅱ, 学士課程, 歯学部, 歯科学、歯科医学
• 2021, 微生物学・口腔微生物学Ⅰ, 学士課程, 歯学部
• 2021, 健康と社会, Health and Society, 学士課程, 全学教育, 健康長寿　口腔科学　味覚　咀嚼　脳　摂食　嚥下　口腔がん　歯科インプラント　歯　歯周組織　加齢　むし歯　歯周病　老化　歯科材料　口腔細菌　義歯　喫煙
• 2021, 英語演習, English Seminar, 学士課程, 全学教育, 分子生物学、遺伝子工学、英語論文
• 2021, 微生物学・口腔微生物学実習, 学士課程, 歯学部, 口腔細菌、グラム染色
• 2021, 微生物学・口腔微生物学Ⅱ, 学士課程, 歯学部

researchmap

プロフィール情報

学位

• 歯学博士（北海道大学）

プロフィール情報

• 姓

  安田, ヤスダ

• 名

  元昭, モトアキ

• ID各種

  200901082577304496

業績リスト

研究キーワード

• ウイルス学   分子生物学   molecular virology   molecular biology   

研究分野

• ライフサイエンス / ウイルス学
• ライフサイエンス / 分子生物学

経歴

• 2002年 - 北海道大学大学院歯学研究科口腔分子微生物学教室 助教授
• 2002年 - Associate Professor

論文

• Adenovirus infection controls processing bodies to stabilize AU-rich element-containing mRNA.

  Takeshi Kuroshima, Aya Yanagawa Matsuda, Elora Hossain, Motoaki Yasuda, Tetsuya Kitamura, Yoshimasa Kitagawa, Fumihiro Higashino

  Virology 573 124 - 130 2022年08月 

  In the adenovirus-infected cells, virus mRNAs are selectively exported to the cytoplasm by virus early gene products to facilitate virus replication. We previously showed AU-rich elements (AREs) containing mRNAs are exported to the cytoplasm and stabilized in infected cells. Here, we analyzed ribonucleoprotein (RNP) granules in the cytoplasm that are involved in mRNA degradation to elucidate the mechanism of ARE-mRNA stabilization in adenovirus infected cells. Our findings showed that processing bodies (PBs) aggregate, then almost all PBs are translocated to aggresomes formed by adenoviral gene products during the late phase of infection. Furthermore, E4orf3 was required for the PBs translocation, and the same domains of E4orf3-mutants required to change the form of promyelocytic leukemia bodies were also needed for PBs translocation. Luciferase activity showed that these domains were critical for miRNA- and ARE-mediated mRNA decay. These findings suggest that adenovirus changes the behavior of PBs to prevent ARE-mRNA downregulation.
• Mammaglobin 1 mediates progression of trastuzumab-resistant breast cancer cells through regulation of cyclins and NF-κB.

  Ratih Kusumastuti, Yuji Kumagai, Seiichiro Ishihara, Atsushi Enomoto, Takashi Murakami, Motoaki Yasuda, Hisashi Haga

  FEBS open bio 12 10 1797 - 1813 2022年07月29日 

  Overexpression of human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) in various cancers is correlated with poor patient survival. Trastuzumab, a recombinant humanized monoclonal antibody against HER2, has been considered to be a first-line therapy for HER2-positive breast cancer patients, but its usefulness is limited by the development of resistance. In this study, we established resistant cells by long-term treatment with trastuzumab. These cells showed higher proliferation, invasion, and migration abilities than the wild-type cells. Mammaglobin 1 (MGB1), cyclin D1, E1, A2, and phosphorylated NF-κB (p-p65) were upregulated in resistant cells. These proteins regulate cell proliferation, migration, and invasion of resistant cells. Depletion of MGB1 decreased cyclin and p-p65 expression. Cyclin D1 and A2, but not E1 expression, were affected by p-p65 downregulation. In summary, our results indicate that MGB1 expression is increased in breast cancer cells that have gained resistance to trastuzumab, and suggest that MGB1 promotes aggressiveness through cyclin and NF-κB regulation.
• Advantages of Using Paclitaxel in Combination with Oncolytic Adenovirus Utilizing RNA Destabilization Mechanism.

  Elora Hossain, Umma Habiba, Aya Yanagawa-Matsuda, Arefin Alam, Ishraque Ahmed, Mohammad Towfik Alam, Motoaki Yasuda, Fumihiro Higashino

  Cancers 12 5 2020年05月12日 

  Oncolytic virotherapy is a novel approach to cancer therapy. Ad-fosARE is a conditionally replicative adenovirus engineered by inserting AU-rich elements (ARE) in the 3'-untranslated region of the E1A gene. In this study, we examined the oncolytic activity of Ad-fosARE and used it in a synergistic combination with the chemotherapeutic agent paclitaxel (PTX) for treating cancer cells. The expression of E1A was high in cancer cells due to stabilized E1A-ARE mRNA. As a result, the efficiency of its replication and cytolytic activity in cancer cells was higher than in normal cells. PTX treatment increased the cytoplasmic HuR relocalization in cancer cells, enhanced viral replication through elevated E1A expression, and upregulated CAR (Coxsackie-adenovirus receptor) required for viral uptake. Furthermore, PTX altered the instability of microtubules by acetylation and detyrosination, which is essential for viral internalization and trafficking to the nucleus. These results indicate that PTX can provide multiple advantages to the efficacy of Ad-fosARE both in vitro and in vivo, and provides a basis for designing novel clinical trials. Thus, this virus has a lot of benefits that are not found in other oncolytic viruses. The virus also has the potential for treating PXT-resistant cancers.
• Conditionally Replicative Adenovirus Controlled by the Stabilization System of AU-Rich Elements Containing mRNA.

  Yohei Mikawa, Mohammad Towfik Alam, Elora Hossain, Aya Yanagawa-Matsuda, Tetsuya Kitamura, Motoaki Yasuda, Umma Habiba, Ishraque Ahmed, Yoshimasa Kitagawa, Masanobu Shindoh, Fumihiro Higashino

  Cancers 12 5 2020年05月11日 

  AU-rich elements (AREs) are RNA elements that enhance the rapid decay of mRNAs, including those of genes required for cell growth and proliferation. HuR, a member of the embryonic lethal abnormal vision (ELAV) family of RNA-binding proteins, is involved in the stabilization of ARE-mRNA. The level of HuR in the cytoplasm is up-regulated in most cancer cells, resulting in the stabilization of ARE-mRNA. We developed the adenoviruses AdARET and AdAREF, which include the ARE of TNF-α and c-fos genes in the 3'-untranslated regions of the E1A gene, respectively. The expression of the E1A protein was higher in cancer cells than in normal cells, and virus production and cytolytic activities were also higher in many types of cancer cells. The inhibition of ARE-mRNA stabilization resulted in a reduction in viral replication, demonstrating that the stabilization system was required for production of the virus. The growth of human tumors that formed in nude mice was inhibited by an intratumoral injection of AdARET and AdAREF. These results indicate that these viruses have potential as oncolytic adenoviruses in the vast majority of cancers in which ARE-mRNA is stabilized.
• The neural ELAVL protein HuB enhances endogenous proto-oncogene activation.

  Tomoyuki Hatanaka, Fumihiro Higashino, Kanchu Tei, Motoaki Yasuda

  Biochemical and biophysical research communications 517 2 330 - 337 2019年09月17日 

  The cytoplasmic distribution of the HuR/ELAVL1 (embryonic lethal abnormal vision 1) protein is recognized as an important prognostic factor of malignant tumors. However, the previous study suggests that exogenous over-expression of HuR is not sufficient for nuclear export. Conversely, the predominantly cytosolic distribution of neuron-specific human ELAV members, including HuB/ELAVL2, HuC/ELAVL3, and HuD/ELAVL4, has been reported. In the present study, we demonstrated the expression of HuB in several types of cancer cells, but expression of HuC and HuD was not observed. In addition, our results indicated that HuR and HuB formed a complex in the cytosolic fraction of cancer cells via the RRM3 region. Ectopic expression of HuB was capable of initiating the cytosolic translocation of HuR from the nucleus to the cytosol. Furthermore, HuB-transduced cancer cells displayed significant nuclear export of HuR, with quantitative PCR experiments revealing the simultaneous upregulation of HIF-1α, c-Fos, c-MYC, and Ets2 basal mRNA expression. Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)-stimulated HuB-transduced cells demonstrated significantly enhanced activation of endogenous c-Fos and CREB dependent cascades. Finally, co-transfection of HuB with the E1 region of type 5 human adenovirus significantly enhanced E1 transformation activities but that of HuR with the E1 region did not. Collectively, our findings suggest that the neural Hu family protein HuB plays a major role in the activation of memory-related proto-oncogenes.
• Oncolytic potential of an E4-deficient adenovirus that can recognize the stabilization of AU-rich element containing mRNA in cancer cells.

  Aya Yanagawa-Matsuda, Yohei Mikawa, Umma Habiba, Tetsuya Kitamura, Motoaki Yasuda, Mohammad Towfik-Alam, Yoshimasa Kitagawa, Kazuyuki Minowa, Masanobu Shindoh, Fumihiro Higashino

  Oncology reports 41 2 954 - 960 2019年02月 

  AU-rich elements (AREs) are RNA elements that enhance the rapid decay of mRNA. The fate of ARE-mRNA is controlled by ARE-binding proteins. HuR, a member of the embryonic lethal abnormal vision (ELAV) family of RNA-binding proteins, is involved in the export and stabilization of ARE-mRNA. In the vast majority of cancer cells, HuR constitutively relocates to the cytoplasm, resulting in the stabilization of ARE-mRNA. Previously, we described that the adenovirus gene product, E4orf6, which is necessary for virus replication, participates in ARE-mRNA export and stabilization. In the present study, we showed the oncolytic potential of E4orf6-deleted adenovirus dl355, which is expected to be replicated selectively in cancer cells. Virus production and cytolytic activity of dl355 were higher in cancer cells than in normal cells. HuR-depletion downregulated dl355 replication, demonstrating that ARE-mRNA stabilization is required for the production of this virus. Tumor growth was inhibited in nude mice by an intratumoral injection of dl355. Furthermore, dl355 had a stronger oncolytic effect than E1B55k-deleted adenovirus. These results indicate that dl355 has potential as an oncolytic adenovirus for a large number of cancers where ARE-mRNA is stabilized.
• Adenovirus infection induces HuR relocalization to facilitate virus replication.

  Jumond P Jehung, Tetsuya Kitamura, Aya Yanagawa-Matsuda, Takeshi Kuroshima, Alam Towfik, Motoaki Yasuda, Hidehiko Sano, Yoshimasa Kitagawa, Kazuyuki Minowa, Masanobu Shindoh, Fumihiro Higashino

  Biochemical and biophysical research communications 495 2 1795 - 1800 2018年01月08日 

  HuR is an RNA-binding protein of the embryonic lethal abnormal vision (ELAV) family, which binds to the AU-rich element (ARE) in the 3'-untranslated region (UTR) of certain mRNAs and is involved in the nucleo-cytoplasmic export and stabilization of ARE-mRNAs. The cytoplasmic relocalization of ARE-mRNAs with several proteins such as HuR and pp32 increases in cells transformed by the adenovirus oncogene product E4orf6. Additionally, these ARE-mRNAs were stabilized and acquired the potential to transform cells. Although, the relocalization of HuR and the stabilization of ARE-mRNAs are crucial for cell transformation, evidence regarding the relationship of HuR and ARE-mRNAs with adenovirus replication is lacking. In this report, we demonstrate that adenovirus infection induces the relocation of HuR to the cytoplasm of host cells. Analysis using the luciferase-ARE fusion gene and the tetracycline (tet)-off system revealed that the process of stabilizing ARE-mRNAs is activated in adenovirus-infected cells. Heat shock treatment or knockdown-mediated depletion of HuR reduced adenovirus production. Furthermore, expression of ARE-including viral IVa2 mRNA, decreased in HuR-depleted infected cells. These results indicate that HuR plays an important role in adenovirus replication, at least in part, by up-regulating IVa2 mRNA expression and that ARE-mRNA stabilization is required for both transformation and virus replication.
• Role of ATF5 in the invasive potential of diverse human cancer cell lines

  Akihiro Nukuda, Hiroki Endoh, Motoaki Yasuda, Takeomi Mizutani, Kazushige Kawabata, Hisashi Haga

  BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS 474 3 509 - 514 2016年06月 [査読有り][通常論文]
   

  Activating transcription factor 5 (ATF5) is a member of the ATF/CAMP response element-binding protein family. Our research group recently revealed that ATF5 expression increases the invasiveness of human lung carcinoma cells. However, the effects of ATF5 on the invasive potential of other cancer cells lines remain unclear. Therefore, in this study, we investigated the role of ATF5 in the invasive activity of diverse human cancer cell lines. Invasiveness was assessed using Matrigel invasion assays. ATF5 knockdown resulted in decreased invasiveness in seven of eight cancer cell lines tested. These results suggest that ATF5 promotes invasiveness in several cancer cell lines. Furthermore, the roles of ATF5 in the invasiveness were evaluated in three-dimensional (3D) culture conditions. In 3D collagen gel, HT-1080 and MDA-MB-231 cells exhibited high invasiveness, with spindle morphology and high invasion speed. In both cell lines, knockdown of ATF5 resulted in rounded morphology and decreased invasion speed. Next, we showed that ATF5 induced integrin-alpha 2 and integrin-beta 1 expression and that the depletion of integrin-alpha 2 or integrin-beta 1 resulted in round morphology and decreased invasion speed. Our results suggest that ATF5 promotes invasion by inducing the expression of integrin-alpha 2 and integrin-beta 1 in several human cancer cell lines. (C) 2016 Elsevier Inc. All rights reserved.
• Substrate stiffness regulates temporary NF-κB activation via actomyosin contractions.

  Ishihara S, Yasuda M, Harada I, Mizutani T, Kawabata K, Haga H

  Experimental cell research 319 19 2916 - 2927 2013年11月15日 [査読有り][通常論文]
   

  Physical properties of the extracellular matrix (ECM) can control cellular phenotypes via mechanotransduction, which is the process of translation of mechanical stresses into biochemical signals. While current research is clarifying the relationship between mechanotransduction and cytoskeleton or adhesion complexes, the contribution of transcription factors to mechanotransduction is not well understood. The results of this study revealed that the transcription factor NF-κB, a major regulator for immunoreaction and cancer progression, is responsive to substrate stiffness. NF-κB activation was temporarily induced in H1299 lung adenocarcinoma cells grown on a stiff substrate but not in cells grown on a soft substrate. Although the activation of NF-κB was independent of the activity of integrin β1, an ECM-binding protein, the activation was dependent on actomyosin contractions induced by phosphorylation of myosin regulatory light chain (MRLC). Additionally, the inhibition of MRLC phosphorylation by Rho kinase inhibitor Y27632 reduced the activity of NF-κB. We also observed substrate-specific morphology of the cells, with cells grown on the soft substrate appearing more rounded and cells grown on the stiff substrate appearing more spread out. Inhibiting NF-κB activation caused a reversal of these morphologies on both substrates. These results suggest that substrate stiffness regulates NF-κB activity via actomyosin contractions, resulting in morphological changes.
• High Prevalence of Multiple Human Papillomavirus Infection in Japanese Patients with Invasive Uterine Cervical Cancer

  Hidemichi Watari, Rie Michimata, Motoaki Yasuda, Akihiro Ishizu, Utano Tomaru, Ying Xiong, Mohamed K. Hassan, Noriaki Sakuragi

  PATHOBIOLOGY 78 4 220 - 226 2011年 [査読有り][通常論文]
   

  Objective: Multiple human papillomavirus (HPV) infection of the uterine cervix has been suggested as a risk factor for persistent HPV infection, resulting in the development of invasive cervical cancer. The aim of this study was to reveal the actual state of multiple HPV infection in Japanese patients with invasive cervical cancer. Methods: Sixty fresh-frozen invasive cervical cancer tissues were examined for genotyping of HPV. The presence of HPV genotypes was determined with an HPV-DNA array, which can discriminate 25 different HPV genotypes with high sensitivity and specificity. Results: Among 60 samples, 59 (96.7%) were positive for HPV. The three common genotypes were HPV-16 (83.3%), HPV-18 (45.0%) and HPV-52 (28.3%). Multiple HPV infection was observed in 47 of 60 samples (78.3%), among which 42 were infected with more than one high-risk genotype (70.0%). Multiple high-risk HPV infection was significantly more prevalent in patients below 40 years old (14/15, 93.3%) than in patients 40 years of age and over (28/45, 62.2%). Conclusion: The HPV-DNA array is the preferred method to detect HPV genotypes. Multiple HPV infection in Japanese patients with invasive cervical cancer seemed to be more frequent than reported in the literature. Copyright (C) 2011 S. Karger AG, Basel
• Relationship between structures and biological activities of mycoplasmal diacylated lipopeptides and their recognition by toll-like receptors 2 and 6

  T Okusawa, M Fujita, JI Nakamura, T Into, M Yasuda, A Yoshimura, Y Hara, A Hasebe, DT Golenbock, M Morita, Y Kuroki, T Ogawa, KI Shibata

  INFECTION AND IMMUNITY 72 3 1657 - 1665 2004年03月 [査読無し][通常論文]
   

  The lipopeptide FSL-1 [S-(2,3-bispalmitoyloxypropyl)-Cys-Gly-Asp-Pro-Lys-His-Pro-Lys-Ser-Phe, Pam(2)CG DPKHPKSF] synthesized on the basis of the N-terminal structure of a Mycoplasma salivarium lipoprotein capable of activating normal human gingival fibroblasts to induce the cell surface expression of ICAM-1 revealed an activity to induce production of monocyte chemoattractant protein 1, interleukin-6 (IL-6), and IL-8. FSL-1 also activated macrophages to produce tumor necrosis factor alpha as the Mycoplasmafermentans-derived lipopeptide MALP-2 (Pam(2)CGNNDESNISFKEK), a potent macrophage-activating lipopeptide, did. The level of the activity of FSL-1 was higher than that of MALP-2. This result suggests that the difference in the amino acid sequence of the peptide portion affects the activity because the framework structure other than the amino acid sequence of the former is the same as that of the latter. To determine minimal structural requirements for the activity of FSL-1, the diacylglyceryl Cys and the peptide portions were examined for this activity. Both portions did not reveal the activity. A single amino acid substitution from Phe to Arg and a fatty acid substitution from palmitic acid to stearic acid drastically reduced the activity. Similar results were obtained in measuring the NF-kappaB reporter activity of FSL-1 to human embryonic kidney 293 cells transfected with Toll-like receptor 2 and 6, together with a NF-kappaB-dependent luciferase reporter plasmid. These results suggest that both the diacylglyceryl and the peptide portions of FSL-1 are indispensable for the expression of biological activities and for the recognition by Toll-like receptors 2 and 6 and that the recognition of FSL-1 by Toll-like receptors 2 and 6 appears to be hydrophobic.
• Involvement of leucine residues at positions 107, 112, and 115 in a leucine-rich repeat motif of human Toll-like receptor 2 in the recognition of diacylated lipoproteins and lipopeptides and Staphylococcus aureus peptidoglycans.

  Mari Fujita, Takeshi Into, Motoaki Yasuda, Tsugumi Okusawa, Sumiko Hamahira, Yoshio Kuroki, Akiko Eto, Toshiki Nisizawa, Manabu Morita, Ken-ichiro Shibata

  Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) 171 7 3675 - 83 2003年10月01日 

  S-(2,3-bispalmitoyloxypropyl)Cys-Gly-Asp-Pro-Lys-His-Pro-Lys-Ser-Phe (FSL-1) derived from Mycoplasma salivarium stimulated NF-kappaB reporter activity in human embryonic kidney 293 (HEK293) cells transfected with Toll-like receptor 2 (TLR2) or cotransfected with TLR2 and TLR6, but not in HEK293 cells transfected with TLR6, in a dose-dependent manner. The activity was significantly higher in HEK293 cells transfected with both TLR2 and TLR6 than in HEK293 cells transfected with only TLR2. The deletion mutant TLR2(DeltaS40-I64) (a TLR2 mutant with a deletion of the region of Ser(40) to Ile(64)) failed to activate NF-kappaB in response to FSL-1. The deletion mutant TLR2(DeltaC30-S39) induced NF-kappaB reporter activity, but the level of activity was significantly reduced compared with that induced by wild-type TLR2. A TLR2 point mutant with a substitution of Glu(178) to Ala (TLR2(E178A)), TLR2(E180A), TLR2(E190A), and TLR2(L132E) induced NF-kappaB activation when stimulated with FSL-1, M. salivarium lipoproteins, and Staphylococcus aureus peptidoglycans, but TLR2(L107E), TLR2(L112E) (a TLR2 point mutant with a substitution of Leu(112) to Glu), and TLR2(L115E) failed to induce NF-kappaB activation, suggesting that these residues are essential for their signaling. Flow cytometric analysis demonstrated that TLR2(L115E), TLR2(L112E), and TLR2(DeltaS40-I64) were expressed on the cell surface of the transfectants as wild-type TLR2 and TLR2(E190A) were. In addition, these mutants, except for TLR2(E180A), functioned as dominant negative form of TLR2. This study strongly suggested that the extracellular region of Ser(40)-Ile(64) and leucine residues at positions 107, 112, and 115 in a leucine-rich repeat motif of TLR2 are involved in the recognition of mycoplasmal diacylated lipoproteins and lipopeptides and in the recognition of S. aureus peptidoglycans.
• Nuclear export of adenovirus E4orf6 protein is necessary for its ability to antagonize apoptotic activity of BH3-only proteins

  M Aoyagi, F Higashino, M Yasuda, A Takahashi, Y Sawada, Y Totsuka, T Kohgo, H Sano, M Kobayashi, M Shindoh

  ONCOGENE 22 44 6919 - 6927 2003年10月 [査読有り][通常論文]
   

  The adenovirus E4orf6 is a viral oncoprotein known to cooperate with the E1A gene product in transforming primary murine cells. It has been shown to inhibit the apoptotic activities of p53 and p73 through direct binding to these proteins. Here, we demonstrate that the adenovirus E4orf6 protein inhibits apoptosis mediated by BNIP3 and Bik, which are BH3-only proteins of the Bcl-2 family. This activity was not mediated by p53 and p73 because E4orf6 had the same effect on the apoptosis in Saos-2 cells that do not express p53-related genes. It was also ascertained that E4orf6 could change the mitochondrial localization of BNIP3 and Bik. A mutant lacking the nuclear export signal of E4orf6 failed to inhibit apoptosis and to translocate BNIP3 protein from the mitochondria. Moreover, it was also established that E4orf6 was able to interact with BNIP3 and Bik. In BNIP3 protein, the region required for the interaction included the transmembrane domain, which is required for the localization of BNIP3 to the mitochondria. These results suggest that E4orf6 is exported from the nucleus to the cytoplasm, enabling it to interact with BH3-only proteins, eventually leading to the inhibition of apoptotic activity.
• アデノウイルスE1B19Kは塩化コバルトで惹起されるアポトーシスを抑制する

  山崎 安佐子, 安田 元昭, 進藤 正信, 向後 隆男, 福島 和昭

  北海道歯学雑誌 23 2 123 - 133 2002年12月15日 [査読無し][通常論文]
  
• アデノウイルスのがん遺伝子産物E4orf6によるBNIP3のアポトーシス活性の抑制

  青柳 麻里子, 東野 史裕, 安田 元昭, 向後 隆男, 佐野 英彦, 進藤 正信

  歯科基礎医学会雑誌 44 1 40 - 47 歯科基礎医学会 2002年02月20日 [査読無し][通常論文]
  
• Extracellular ATP regulates cell death of lymphocytes and monocytes induced by membrane-bound lipoproteins of Mycoplasma fermentans and Mycoplasma salivarium.

  Takeshi Into, Kazutaka Okada, Nobuo Inoue, Motoaki Yasuda, Ken-ichiro Shibata

  Microbiology and immunology 46 10 667 - 75 2002年 

  The cytotoxicities of lipoproteins of Mycoplasma fermentans and Mycoplasma salivarium to a lymphocytic cell line, MOLT-4, and a monocytic cell line, HL-60, was upregulated by ATP added extracellularly in a dose-dependent manner. These lipoproteins induced ATP release and plasma membrane permeability increase in these cell lines. In addition, periodate-oxidized ATP, an antagonist for P2X purinergic receptors, suppressed the cytotoxicity of the lipoproteins, suggesting the possibility that P2X receptors for ATP play crucial roles in the cytotoxicity. Activation of caspase-3 induced by the lipoproteins, which was assessed by the cleavage of the synthetic substrate DEVD-pNA and the endogenous substrate poly(ADP-ribose) polymerase, was also upregulated and downregulated by extracellular ATP and periodate-oxidized ATP, respectively. On the basis of these results, this study suggests that mycoplasmal lipoproteins induce the permeability increase in lymphocytes and monocytes, by which ATP is released, and the ATP regulates the cytotoxicities of the lipoproteins to the cells, possibly by interaction with ATP receptors such as P2X purinergic receptors.
• Involvement of Rb protein expression and phosphorylation in progression of oral carcinomas

  Yoshiaki Deyama, Toshiaki Ara, Motoaki Yasuda, Sadaaki Takeyama, Yoshitaka Yoshimura, Noriyuki Sakakibara, Kanchu Tei, Yasunori Totsuka, Kuniaki Suzuki

  Oral Therapeutics and Pharmacology 21 2 59 - 67 2002年 [査読有り][通常論文]
  
• 悪性黒色腫におけるetsがん遺伝子群転写因子E1AFの発現

  秦 浩信, 大廣 洋一, 東野 史裕, 安田 元昭, 戸塚 靖則, 山下 利春, 吉田 幸一, 田口 和典, 高田 尚幸, 藤堂 省

  日本癌学会総会記事 60回 472 - 472 日本癌学会 2001年09月
• Pretreatment apoptotic scores do not predict response to radiation therapy in oropharyngeal squamous cell carcinoma

  K Tsuchiya, H Shirato, T Nishioka, A Yamazaki, S Hashimoto, K Kagei, K Oomori, M Yasuda, M Shindo, K Miyasaka

  ORAL ONCOLOGY 37 2 159 - 163 2001年02月 [査読有り][通常論文]
   

  The prognostic value of tumor apoptosis was studied in patients with oropharyngeal squamous cell carcinoma treated with radical radiotherapy. Forty-eight patients with oropharyngeal squamous cell carcinoma who received radical radiotherapy between 1990 and 1995 were enrolled in the study. The radiation treatment for all patients involved the administration of 65 Gy in 26 fractions over a 6.5-week period. The apoptotic index (AI; the apoptotic cell count per 1000 tumor cells) was distributed from 0 to 10 with a median at 2 and a mode of 1. There was a significant linear correlation between the AI and mitotic index (MI) (r = 0.393, 95% confidence interval: 0.129-0.605). The cause-specific 5-year survival for patients with AI greater than the median was 46% and for the counterpart was 41%. There was no difference in cause-specific survival between AI/MI greater than the median (50%) and AI/MI smaller than the median (36%). The number of patients was too small to draw definite conclusions, but the AI and the AI/MI before treatment were not shown to have a prognostic value for oropharyngeal squamous cell carcinoma in our study. The primary sites and treatment methods may influence the prognostic value of AI even for the same histological types. (C) 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved.
• Functional Dissection of BH3 Only Protein BNIP3

  Yasuda Motoaki, Yamazaki Katsuhisa, Hamahira Sumiko, Kawasaki Takao, Nakamura Motoyasu, Shindoh Masanobu

  Tumor research : experimental and clinical 36 23 - 28 札幌医科大学 2001年 

  BNIP3 is a pro-apoptotic protein, which contains BH3 and trans-membrane domains. Previous studies demonstrated an association between ceBNIP3, C. elegans homologue of BNIP3, and ced-3. It seemed likely that the interaction between ceBNIP3 and ced-3 was an alternative cascade of caspase activation in C. elegans, however the detailed mechanism of this interaction is yet to be elucidated. We constructed several deletion mutants of BNIP3 and investigated their biological functions. As we expected, the trans-membrane domain of BNIP3 was not required for the association between BNIP3 and ced-3, however trans-membrane deletion mutant could not initiate the apoptotic cascade. Immunofluorescence study demonstrated that wild type BNIP3 and ced-3 co-localized on mitochondria, but trans-membrane deletion mutant did not. These results suggest that the recruitment of ced-3/caspase onto the mitochondrial membrane is essential for BNIP3 initiated apoptosis.
• 口腔扁平上皮癌の遺伝子異常

  進藤正信, 東野史裕, 安田元昭, 向後隆男

  病理と臨床 19 252 - 259 2001年 [査読無し][招待有り]
  
• BAG-1 expression correlates highly with the malignant potential in early lesions (T1 and T2) of oral squamous cell carcinoma

  M Shindoh, M Adachi, F Higashino, M Yasuda, K Hida, T Nishioka, M Ono, S Takayama, JC Reed, K Imai, Y Totsuka, T Kohgo

  ORAL ONCOLOGY 36 5 444 - 449 2000年09月 [査読有り][通常論文]
   

  BAG-1 is a Bcl-2-binding: protein that functions as an anti-apoptotic molecule. III this report We show a possible correlation between BAG-1 expression levels and the probability of oral squamous cell carcinoma (SCC) progression. We investigated BAG-1 expression levels in 22 patients diagnosed with early lesions (T1 and T2) of oral SCCs using immunohistochemistry and western blotting. High steady-state levels of BAG-1 were detected in 13 out of 29 cases (59%). High BAG-1 expression was observed more frequently in cases with nodal metastasis (89%) than in those without nodal metastasis (38%) (P < 0.03), suggesting that BAG-I expression levels may correlate with the pathological stage of oral SCCs. Furthermore, BAG-I expression levels correlated with the WHO grade, i.e. 45% in grade-I cases as opposed to 72% in grade-II cases (P < 0.02). These data suggest that an analysis of BAG-I expression may be useful in establishing a prognosis for patients with oral SCCs, and especially in predicting the metastatic potential of SSCs. (C) 2000 Elsevier Science Ltd. All rights reserved.
• [The cellular target proteins of adenovirus gene products].

  Higashino F, Yasuda M, Shindoh M

  Tanpakushitsu kakusan koso. Protein, nucleic acid, enzyme 45 1350 - 1357 8 2000年06月 [査読無し][招待有り]
  
• Hepatocyte growth factor upregulates E1AF that induces oral squamous cell carcinoma cell invasion by activating matrix metalloproteinase genes

  M Hanzawa, M Shindoh, F Higashino, M Yasuda, N Inoue, K Hida, M Ono, T Kohgo, M Nakamura, K Notani, H Fukuda, Y Totsuka, K Yoshida, K Fujinaga

  CARCINOGENESIS 21 6 1079 - 1085 2000年06月 [査読有り][通常論文]
   

  Hepatocyte growth factor (HGF) is thought to play a role in cell motility and invasion. Matrix metalloproteinases (MMPs) have been implicated in invasion and metastasis of tumor cells. We have previously reported that the Ets-oncogene family transcription factor E1AF positively regulates transcription of MMP genes in transient expression assays and that overexpression of the E1AF gene confers an invasive phenotype on breast cancer cells. Here we examined the effect of HGF on E1AF and MMP gene expression in terms of the invasive potential of the oral squamous cell carcinoma cell line HSC3. HGF stimulated expression of the E1AF gene. The levels of MMP-1, -3 and -9 mRNAs increased in cells treated with HGF and correlated with E1AF upregulation, In contrast, no obvious upregulation of MMP-1 and -9 mRNA was observed in ASE1AFHSC3 cells transfected with the antisense E1AF expression vector into parental HSC3 cells. The wild-type MMP-9 gene promoter was activated by endogenous E1AF in HSC3 cells, and chloramphenicol acetyltransferase (CAT) activities increased when HGF was added to transfected cells. On the other hand, CAT activity was reduced to almost two-thirds of the wild-type activity when HSC3 cells were transfected with a CAT reporter plasmid driven by a mutant MMP-9 promoter lacking the Ets-binding site, and induction of CAT activity was not observed upon addition of HGF. Analysis of organotypic raft cultures revealed that HSC3 cells invaded and degraded collagen gel actively upon addition of HGF. These results suggest that HGF induces expression of the Ets-related E1AF transcription factor gene whose product in turn activates MMP genes and leads to oral cancer cell invasion.
• Functional identification of the apoptosis effector BH3 domain in cellular protein BNIP1.

  M Yasuda, G Chinnadurai

  Oncogene 19 19 2363 - 7 2000年05月04日 

  BCL-2 family proteins play a central role in apoptosis regulation in mammals and in C. elegans. Mammalian cellular and viral anti-apoptosis proteins such as BCL-2 and E1B-19K interact with several cellular proteins. Some of these interacting proteins promote apoptosis and belong to the BCL-2 family. Certain BCL-2 family proapoptotic proteins such as BAX and BAK share extensive sequence homology with BCL-2. In contrast, certain pro-apoptotic proteins such as BIK and BID share a single death effector domain, BH3, with other BCL-2 family proteins. By mutational analysis, we show that one of the cellular proteins, BNIP1 (previously Nip-1), that interacts with BCL-2 family anti-apoptosis proteins is a 'BH3 alone' pro-apoptotic protein. Transient transfection of BNIP1 induces a moderate level of apoptosis. Deletions of the N-terminal 32 amino acid region and the C-terminal trans-membrane domain did not significantly affect pro-apoptotic activity. In contrast, deletions encompassing a region containing a motif similar to the BH3-domain abrogated the apoptotic activity. Substitution of BNIP1 BH3 domain for the corresponding sequence in BAX efficiently restored the apoptotic activity of BAX, establishing the functional identity of the BH3 domain of BNIP1. The N-terminal deletions of BNIP1 (that retain the BH3 domain) enhanced the level of interaction with BCL-XL. Mutants containing the BH3 deletions were still able to heterodimerize with BCL-XL while mutants lacking both the N-terminal region and the BH3 domain were unable to heterodimerize, suggesting that BNIP1 may bind to BCL-XL via two different binding motifs.
• Induction of transformation and p53-dependent apoptosis by adenovirus type 5 E4orf6/7 cDNA.

  S Yamano, T Tokino, M Yasuda, M Kaneuchi, M Takahashi, Y Niitsu, K Fujinaga, T Yamashita

  Journal of virology 73 12 10095 - 103 1999年12月 

  Adenovirus (Ad) E4orf6/7, one of the early gene products of human Ads, forms a stable complex with the cellular transcription factor E2F to activate transcription from the Ad E2 promoter. E2F cDNAs have growth-promoting and apoptosis-inducing activities when overexpressed in cells. We cloned Ad5 E4orf6/7 cDNA in both simian virus 40- and human cytomegalovirus-based expression vectors to examine its transforming and apoptotic activities. The cloned E4orf6/7 collaborated with a retinoblastoma protein (RB)-nonbinding and therefore E2F-nonreleasing mutant of Ad5 E1A (dl922/947) to morphologically transform primary rat cells, suggesting that E2F is an important cellular protein functioning downstream of E1A for transformation. In a G418 colony formation assay, E4orf6/7 was shown to suppress growth of untransformed rat cells. Moreover, a recombinant Ad expressing Ad5 E4orf6/7 induced apoptosis in rat cells when coinfected with wild-type p53-expressing Ad. Mutational analysis of E4orf6/7 revealed that both of the domains required for growth inhibition and transformation by E4orf6/7 lay in the C-terminal region, which is essential for transactivation from the upstream sequence of an E2a promoter containing E2F-binding sites. However, the smallest mutant of E4orf6/7, encoding the C-terminal 59 amino acids, failed to complement the RB-nonbinding dl922/947 mutant despite showing growth inhibition and E2F transactivation activities. Thus, it is suggested that a subregion of E4orf6/7 which is required for growth inhibition and transformation in collaboration with dl922/947 overlaps the transactivation domain of E4orf6/7.
• BNIP3alpha: a human homolog of mitochondrial proapoptotic protein BNIP3.

  M Yasuda, J W Han, C A Dionne, J M Boyd, G Chinnadurai

  Cancer research 59 3 533 - 7 1999年02月01日 

  Apoptosis is regulated by interaction of viral and cellular BCL-2 family antiapoptotic proteins with various pro-apoptotic proteins, several of which are also members of the BCL-2 family. Cellular protein BNIP3 is a BCL-2 family proapoptotic protein that interacts with viral antiapoptosis proteins such as adenoviruses E1B-19K and EBV-BHRF1 and cellular antiapoptosis proteins such as BCL-2 and BCL-xL. Database searches indicate that the human genome encodes an open reading frame for a protein, BNIP3alpha, that shares substantial homology with BNIP3. The BNIP3alpha open reading frame encodes a protein of 219 amino acids that contains a conserved BH3 domain and a COOH-terminal trans-membrane domain, characteristic of several BCL-2 family proapoptotic proteins. BNIP3alpha interacts with viral antiapoptosis protein E1B-19K and cellular antiapoptosis proteins BCL-2 and BCL-xL. Overexpression of BNIP3alpha in transfected cells results in apoptosis and suppresses the antiapoptosis activity of E1B-19K and BCL-xL. Like BNIP3, BNIP3alpha seems to be predominantly localized in mitochondria. These results suggest that BNIP3alpha is a structural and functional homologue of BNIP3. BNIP3 and BNIP3alpha seem to be the first examples of homologues among the various human proapoptotic proteins. Northern blot analysis reveals that BNIP3alpha is expressed ubiquitously in most human tissues. In contrast, BNIP3 is expressed well in several human tissues and less abundantly in certain tissues such as placenta and lung. These results suggest that although BNIP3 and BNIP3alpha may promote apoptosis simultaneously in most human tissues, BNIP3alpha may play a more universal role.
• Regulation of apoptosis by a Caenorhabditis elegans BNIP3 homolog.

  M Yasuda, C D'Sa-Eipper, X L Gong, G Chinnadurai

  Oncogene 17 19 2525 - 30 1998年11月12日 

  We have identified a C. elegans protein, ceBNIP3, homologous to the human BCL-2/EIB-19K interacting BCL-2 family pro-apoptotic protein BNIP3. In transiently transfected mammalian cells, ceBNIP3 complexes with CED-9, the worm homolog of BCL-2. CeBNIP3 also efficiently heterodimerizes with the cell death protease proCED-3 by direct binding via the prodomain. Transfection of ceBNIP3 and CED-3 results in enhanced proteolytic processing of the CED-3 zymogen and in cooperative induction of apoptosis. Coexpression of CED-9 suppresses the cooperative cell death induced by ceBNIP3 and CED-3. In cells coexpressing CED-9, ceBNIP3 and CED-3, all three proteins exist as a ternary complex suggesting that CED-9 may suppress cooperative apoptosis induced by CED-3 and ceBNIP3 by simultaneous complex formation with CED-3 and ceBNIP3. Our results suggest that ceBNIP3 may be a novel component of the C. elegans apoptosis paradigm and may initiate apoptosis by recruiting CED-3 to mitochondria and other cytoplasmic membranes.
• Adenovirus E1B-19K/BCL-2 interacting protein BNIP3 contains a BH3 domain and a mitochondrial targeting sequence.

  M Yasuda, P Theodorakis, T Subramanian, G Chinnadurai

  The Journal of biological chemistry 273 20 12415 - 21 1998年05月15日 

  Adenovirus E1B-19K and BCL-2 anti-apoptosis proteins interact with certain BCL-2 family pro-apoptotic proteins. A conserved domain, BH3, present in these proteins is essential for their pro-apoptotic activity and for heterodimerization with anti-apoptosis proteins. Cellular protein BNIP3 (previously NIP3) interacts with E1B-19K, BCL-2, BCL-xL, and EBV-BHRF1. BNIP3 contains a motif similar to the BH3 domain. Deletion of the BH3-like motif in BNIP3 abrogates its ability to heterodimerize with E1B-19K and BCL-xL. Substitution of the BH3 domain of BNIP3 for the corresponding sequences of BAX functionally restores the pro-apoptotic and protein heterodimerization activities of BAX. BNIP3 exhibits a delayed cell death activity that is partially relieved by deletion of the BH3 domain. BNIP3 suppresses the anti-apoptosis activity of BCL-xL in a BH3-dependent manner. BNIP3 contains a C-terminal trans-membrane (TM) domain similar to other BCL-2 family proteins and BNIP1 (previously NIP1). The TM domains of BNIP3 and BNIP1 can functionally substitute for the TM domain of a BCL-2 family member EBV-BHRF1. The BNIP3 TM domain exclusively targets the heterologous green fluorescent protein (GFP) to mitochondria. These results suggest that BNIP3 is a member of the BH3-contaning BCL-2 family of pro-apoptotic proteins and functions in mitochondria.
• Antisense E1AF transfection restrains oral cancer invasion by reducing matrix metalloproteinase activities

  K Hida, M Shindoh, M Yasuda, M Hanzawa, K Funaoka, T Kohgo, A Amemiya, Y Totsuka, K Yoshida, K Fujinaga

  AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY 150 6 2125 - 2132 1997年06月 [査読有り][通常論文]
   

  E1AF is a newly identified human ets-family transcription factor We have reported that E1AF can up-regulate transcription of matrix metalloproteinase (MMP) genes and confers invasive phenotype on human cancer cells. HSC3 is an oral squamous-cell-carcinoma-derived cell line, and it manifests high levels of E1AF and MMP-1 and -9 gene expression that are associated with invasive potential, We reconstructed an E1AF antisense expression vector, transfected HSC3 cells with the vector, and obtained HSC3AS cells that express E1AF antisense RNA, HSC3AS showed decreasing mRNA and protein levels of MMP-1, -3, and -9, Moreover, HSC3AS showed lower invasive potential in vitro three-dimensional raft culture and in vivo implantation into nude mice. These results imply that transfection of antisense E1AF inhibits tumor invasion by down-regulating MMP genes.
• 口腔扁平上皮癌における術前照射の効果の検討

  細川 洋一郎, 金子 昌幸, 安田 元昭, 金子 正範, 半沢 元章, 中村 太保, 進藤 正信, 向後 隆男, 雨宮 璋, 野谷 健一, 福田 博, 戸塚 靖則

  日本口腔科学会雜誌 46 1 65 - 71 1997年01月10日 [査読無し][通常論文]
  
• Correlated expression of matrix metalloproteinases and ets-family transcription factor E1A-F in invasive oral-squamous-cell-carcinoma-derived cell lines

  Shindoh M, Higashino F, Kaya M, Yasuda M, Funaoka K, Hanzawa M, Hida K, Kohgo T, Amemiya A, Yoshida K, Fujinaga K

  Am. J. Pathol. 148 693 - 700 1996年 [査読有り][通常論文]
  
• DETECTION OF HUMAN PAPILLOMAVIRUS DNA-SEQUENCES IN ORAL SQUAMOUS-CELL CARCINOMAS AND THEIR RELATION TO P53 AND PROLIFERATING CELL NUCLEAR ANTIGEN EXPRESSION

  M SHINDOH, CHIBA, I, M YASUDA, T SAITO, K FUNAOKA, T KOHGO, A AMEMIYA, Y SAWADA, K FUJINAGA

  CANCER 76 9 1513 - 1521 1995年11月 [査読有り][通常論文]
   

  Background. The etiology of oral squamous cell carcinoma (SCC) is still obscure. Since human papillomavirus (HPV) DNAs are associated with carcinoma of the uterine cervix, carcinomas of the oral cavity were investigated to ascertain if these viruses are present in squamous carcinomas of this anatomic site. Methods. Seventy-seven oral mucosal SCCs were examined for the presence of HPV DNAs by polymerase chain reaction and dot blot hybridization. Immunohistochemical detection of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and p53 was performed and single strand conformation polymorphism analysis for p53 was undertaken. In situ hybridization detection of HPV-16 DNA also was performed. Results. Human papillomavirus-16 DNA was detected in 23 cases of oral SCC and both HPV-16 and HPV-18 DNA were detected in one case of tongue SCC. Humin papillomavirus DNAs were detected of 11 of 33 tongue, 4 of 15 gingival, 2 of 4 palate, 2 of 5 buccal mucosa, 3 of 7 maxillary sinus, and 2 of 11 the floor of the mouth SCCs. None were detected in SCCs of the retromolar region (0/ 2). Immunohistochemical examination for p53 was performed in 26 cases of oral SCC and the accumulation of p53 protein was observed in 6 cases (i.e., in 4 of 17 HPV DNA-negative cases and in 2 of 9 HPV DNA-positive cases). Single strand conformation polymorphism analysis confirmed gene mutations in all 6 cases. Human papillomavirus-18 DNA was predominantly identified in cancer cells that showed a morphologic resemblance to basal cells and its hybridized signal in keratinized cells was reduced by in situ hybridization detection. Immunohistochemical detection of PCNA revealed its cooccurrence with HPV-16 DNA in cancer cells. Conclusions. These results suggest that HPV-16 DNA sequences may have the capability to maintain the proliferative state of epithelial cells, and may contribute to the production of malignant phenotypes.
• シェルを用いた放射線治療計画用ＣＴシステム画像とＭＲＩの重ね合わせの試み

  細川 洋一郎, 箕輪 和行, 澤村 強, 阿部 悟, 安田 元昭, 金子 正範, 大森 桂一, 中村 太保, 渡辺 良晴, 鎌田 正

  歯科放射線 35 3 177 - 181 特定非営利活動法人 日本歯科放射線学会 1995年
• Detection of Human Papillomavirus (HPV) DNA Sequences in Normal Oral Scrapes Using the Nested PCR.

  Shindoh Masanobu, Fujinaga Yukako, Yasuda Motoaki, Ishikawa Makoto, Kohgo Takao, Amemiya Akira, Sawada Yukiharu, Fujinaga Kei

  Tumor Research 29 39 - 47 Sapporo Medical University 1994年 

  We investigated the prevalence rate of HPV DNAs in normal mucosa in the oral region. The nested PCR method was utilized to detect target DNA sequences using HPV E6/E7 consensus primer pairs. Of 56 patients examined, HPV 6 and HPV 16 DNA sequences were detected in a 46-year-old male and a 35-year-old female, respectively. These results suggest that HPVs are uncom-mon in normal oral epithelium, and that we should carry out careful follow-up in HPV DNA-positive cases.
• 口腔扁平上皮癌におけるヒトパピロ―マウイルス (HPV) DNAの関与．

  進藤正信, 安田元昭, 雨宮 璋, 澤田幸治, 藤永

  北海道頭頚部腫瘍 13 5 - 8 1992年 [査読有り][通常論文]
  
• 口腔粘膜メラニン色素沈着症より発症したと思われる悪性黒色腫の１例

  野谷 健一, 山崎 裕, 水越 孝典, 戸塚 靖則, 福田 博, 進藤 正信, 安田 元昭, 飯塚 正, 雨宮 璋

  日本口腔外科学会雑誌 35 9 2335 - 2342 Japanese Society of Oral and Maxillofacial Surgeons 1989年 

  Sixty-four-year-old male complained of the diffuse brown pigmentation of labial gingiva (3-3). The pathological diagnosis of biopsy specimen was melanosis.
  A black tuberous solid mass was found in the same site 20 months later during the follow up period. As malignant melanoma was suspected, the extirpation (partial maxillectomy) of the tumor and postoperative adjuvant immunochemotherapy (DAV, OK-432) were done.
  Six months later, metastasis was found in cervical lymph nodes. Radical neck dissection (RND) was performed and nodal involvements were pathologically recognized.
  Two years after RND, he died of pneumonia. Neither primary recurrence nor distant metastasis were observed.
• 口腔癌に対する下顎骨辺縁切除術について

  戸塚 靖則, 臼井 康裕, 鄭 漢忠, 安田 元昭, ウイ ヘンリーG, 蒲原 義信, 野谷 健一, 福田 博, 進藤 正信, 飯塚 正, 向後 隆男, 雨宮 璋

  日本口腔外科学会雑誌 34 5 907 - 919 Japanese Society of Oral and Maxillofacial Surgeons 1988年 [査読有り][通常論文]
   

  This study was undertaken to determine the indication and value of marginal resection of the mandible as a method of treatment for squamous cell carcinoma of the floor of the mouth. Eighteen patients whose primary tumors were treated by utilizing marginal resection at the Department of Oral Surgery of Hokkaido University from 1977 to 1986, were studied clinically and histopathologically. Another ten patients who had undergone resection of the primary tumor by other surgical methods during the same period, were also studied histopathologically.
  Local recurrence was observed in one case and the 5 year survival rate was 71. 3%. The histopathological study revealed that the cortical bone was eroded or destroyed by tumor tissues in more than half of the cases where the primary tumor had been diagnosed to have gingival invasion, mandibular adhesion or mandibular invasion. Tumor invasion into the periodontal ligament and bone marrow was also found in some cases. However, bone erosion and tumor invasion were limited within a small area, and tumor tissues did not invade beyound the extent which was anticipated before the surgery. These results suggest that some of the squamous cell carcinoma of the floor of the mouth can be removed by marginal resection of the mandible, even if the tumor invades the gingiva, the periosteum and mandible. On the other hand, in cases where the primary tumor had been diagnosed as not having gingival invasion nor mandibular adhesion, varied amounts of fibrous tissues were observed between the tumor tissues and the mandible. This suggests that squamous cell carcinoma of the floor of the mouth can be removed without resecting the mandible, if normal tissue is interposed the tumor and the mandible clinically. However, in some cases, particularly where the lesion was accompanied with infection and/or pain, it might be difficult to ascertain if the tumor had invaded the mandible or not. Therefore, it is recommended that squamous cell carcinoma of the floor of the mouth be removed by utilizing marginal resection of the mandible, if mandibular invasion is doubtful.

MISC

• Activating transcription factor 5 promotes cancer cell invasion through transcriptional activation of integrins

  A. Nukuda, H. Endoh, S. Ishihara, M. Yasuda, T. Mizutani, K. Kawabata, H. Haga MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL 26 2015年 [査読無し][通常論文]
  
• Activating transcription factor 5 enhances radioresistance and malignancy in cancer cells

  Seiichiro Ishihara, Seiichiro Ishihara, Motoaki Yasuda, Akihiro Ishizu, Masayori Ishikawa, Hiroki Shirato, Hisashi Haga, Hisashi Haga Oncotarget 6 (7) 4602 -4614 2015年01月01日 [査読無し][通常論文]
   

  Radiotherapy is effective for treating various types of tumors. However, some cancer cells survive after irradiation and repopulate tumors with highly malignant phenotypes that correlate with poor prognosis. It is not known how cancer cells survive and generate malignant tumors after irradiation. Here, we show that activating transcription factor 5 (ATF5) promotes radioresistance and malignancy in cancer cells after irradiation. In the G1-S phase of the cell cycle, cancer cells express high levels of ATF5, which promotes cell cycle progression and thereby increases radioresistance. Furthermore, ATF5 increases malignant phenotypes, such as cell growth and invasiveness, in cancer cells in vitro and in vivo. We have identified a new mechanism for the regeneration of highly malignant tumors after irradiation and shown that ATF5 plays a key role in the process.
• Involvement of UTR-dependent gene expression in the maintenance of cancer stem cell like phenotypes

  Motoaki Yasuda, Tomoyuki Hatanaka, Hiroki Shirato, Takeshi Nishioka Oncology Letters 10 (5) 3171 -3176 2015年01月01日 [査読無し][通常論文]
   

  © Spandidos Publications 2015. All rights reserved. The present study demonstrated the acquisition of additional malignant characteristics in irradiated mouse fibrosarcoma cells compared with the parent cells. Several reporter assays indicated that hypoxia-inducible factor (HIF)-1α, activator protein-1 and Ets-dependent transcription were activated in irradiated cells. The cis-elements in the 5'-untranslated region (UTR) of these transcription factors plays a major role in their expression in surviving irradiated cancer cells. By contrast, there were no evident differences between the 3'-UTR-dependent repression demonstrated by parent cells and irradiated cells. A small population of parental fibrosarcoma cells was also found to exhibit the same enhanced 5'-UTR-dependent HIF-1α expression as that demonstrated by irradiated cells. These observations may indicate that high-dose X-ray irradiation affects the majority of proliferating cancer cells, but not the cancer stem cells (CSCs), and an increased CSC population may explain the progressive phenotypes of the irradiated cells. It appears likely that the transcription factors that maintain stemness are regulated by the same 5'-UTR-dependent mechanism.
• Lung cancer cells after irradiation indicate viability and malignancy dependent on activating transcription factor 5.

  S. Ishihara, M. Yasuda, A. Ishizu, H. Haga MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL 25 2014年12月 [査読無し][通常論文]
  
• X-Ray Irradiation Induces Mitophagy and Cancer Metabolic Reprogramming

  T. Nishioka, H. Shirato, M. Yasuda INTERNATIONAL JOURNAL OF RADIATION ONCOLOGY BIOLOGY PHYSICS 90 S778 -S778 2014年09月 [査読無し][通常論文]
  
• Cell type-specific reciprocal regulation of HIF1A gene expression is dependent on 5′- and 3′-UTRs

  Motoaki Yasuda, Tomoyuki Hatanaka, Hiroki Shirato, Takeshi Nishioka Biochemical and Biophysical Research Communications 447 (4) 638 -643 2014年05月16日 [査読無し][通常論文]
   

  In the present study, we demonstrated the reciprocal regulation of hypoxia-inducible factor 1 alpha (HIF1A) gene expression via untranslated region-(UTR) dependent mechanisms. A 151 nucleotide sequence found in the HIF1A 5′-UTR is sufficient for significant translational up-regulation. On the other hand, the 3′-UTR of HIF1A has been implicated in mRNA degradation. In the non-metastatic breast cancer cell line MCF7, the 3′-UTR-dependent down-regulatory machinery predominates over the 5′-UTR-dependent up-regulation of HIF1A. However, 5′-UTR-dependent up-regulation is dominant among metastatic cell lines (MDA-MB453, U87MG). It is therefore likely that the predominance of 5′-UTR-dependent translational enhancement of HIF1A is critical for the malignant phenotype of cancer cells. PTBP-1, but not HuR, is a candidate RNA binding protein for the translational control of HIF1A. © 2014 Elsevier Inc. All rights reserved.
• Lung Cancer Cells That Survive Ionizing Radiation Show Increased Integrin α2β1- and EGFR-Dependent Invasiveness

  Xue Li, Seiichiro Ishihara, Motoaki Yasuda, Takeshi Nishioka, Takeomi Mizutani, Masayori Ishikawa, Kazushige Kawabata, Hiroki Shirato, Hisashi Haga PLoS ONE 8 (8) e70905 2013年08月08日 [査読無し][通常論文]
   

  Ionizing radiation (IR)-enhanced tumor invasiveness is emerging as a contributor to the limited benefit of radiotherapy; however, its mechanism is still unclear. We previously showed that subcloned lung adenocarcinoma A549 cells (P cells), which survived 10 Gy IR (IR cells), acquired high invasiveness in vitro. Here, we tried to identify the mechanism by which IR cells increase their invasiveness by examining altered gene expression and signaling pathways in IR cells compared with those in P cells. To simulate the microenvironment in vivo, cells were embedded in a three-dimensional (3D) collagen type I gel, in which the IR cells were elongated, while the P cells were spherical. The integrin expression pattern was surveyed, and expression levels of the integrin α2 and β1 subunits were significantly elevated in IR cells. Knockdown of α2 expression or functional blockade of integrin α2β1 resulted in a round morphology of IR cells, and abrogated their invasion in the collagen matrix, suggesting the molecule's essential role in cell spread and invasion in 3D collagen. Epidermal growth factor receptor (EGFR) also presented enhanced expression and activation in IR cells. Treatment with EGFR tyrosine kinase inhibitor, PD168393, decreased the ratio of elongated cells and cell invasiveness. Signaling molecules, including extracellular signal-regulated kinase-1/2 (Erk1/2) and Akt, exhibited higher activation in IR cells. Inhibition of Akt activation by treating with phosphoinositide 3-kinase (PI3K) inhibitor LY294002 decreased IR cell invasion, whereas inhibition of Erk1/2 activation by mitogen-activated protein kinase kinase (MEK) inhibitor U0126 did not. Our results show that integrin α2β1 and EGFR cooperatively promote higher invasiveness of IR-survived lung cancer cells, mediated in part by the PI3K/Akt signaling pathway, and might serve as alternative targets in combination with radiotherapy. © 2013 Li et al.
• Irradiation-tolerant lung cancer cells acquire invasive ability dependent on dephosphorylation of the myosin regulatory light chain

  Seiichiro Ishihara, Motoaki Yasuda, Takeshi Nishioka, Takeomi Mizutani, Kazushige Kawabata, Hiroki Shirato, Hisashi Haga FEBS Letters 587 (6) 732 -736 2013年03月18日 [査読無し][通常論文]
   

  Radiotherapy is one of the major treatment modalities for malignancies. However, cells surviving irradiation often display high levels of invasiveness. This study shows that irradiation-tolerant lung adenocarcinoma demonstrates high invasive capability depending on dephosphorylation of the myosin regulatory light chain (MRLC). In a collagen gel overlay condition, low-invasive subclones of lung adenocarcinoma (A549P-3) showed a round morphology and diphosphorylation of MRLC. In contrast, irradiation-tolerant A549P-3 cells (A549P-3IR) displayed high invasiveness and a lower level of MRLC diphosphorylation. In addition, inhibition of MRLC phosphatase activity decreased the invasive activity. These findings suggest that A549P-3IR cells acquire high invasiveness through MRLC dephosphorylation. © 2013 Federation of European Biochemical Societies. Published by Elsevier B.V. All rights reserved.
• 放射線により誘発されるがん細胞の再増殖 : 移植可能なマウス肉腫細胞を用いた実験から類推されるメカニズム

  西岡 健, 安田 元昭, 武島 嗣英, 芳賀 永, 宮井 優介, 柴田 健一郎, 山崎 理衣, 白土 博樹, 手塚 正博, 伊達 広行 北海道醫學雜誌 = Acta medica Hokkaidonensia 87 (4) 192 -192 2012年08月01日
• EGFR and Integrin alpha 2 beta 1 Dependent Invasiveness of Lung Adenocarcinoma Cells that Survived 10 Gy Ionizing Radiation.

  X. Li, S. Ishihara, M. Yasuda, T. Mizutani, K. Kawabata, T. Nishioka, H. Haga MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL 23 2012年 [査読無し][通常論文]
  
• Viral-mediated stabilization of AU-rich element containing mRNA contributes to cell transformation.

  T Kuroshima, M Aoyagi, M Yasuda, T Kitamura, J P Jehung, M Ishikawa, Y Kitagawa, Y Totsuka, M Shindoh, F Higashino Oncogene 30 (26) 2912 -20 2011年06月30日 [査読無し][通常論文]
   

  E4orf6 is one of the oncogene products of adenovirus, and it also has an important role for transportation of cellular and viral messenger RNA (mRNA) during the late phase of virus infection. We previously revealed that E4orf6 controls the fate of AU-rich element (ARE) containing mRNA by perturbing the chromosome maintenance region 1-dependent export mechanism. Here, we show that E4orf6 stabilizes ARE-mRNA through the region required for its oncogenic activity and ubiquitin E3 ligase assembly. Cells that failed to stabilize ARE-mRNA after HuR knockdown were unable to produce colonies in soft agar, even when E4orf6 was expressed. Furthermore, the stabilized ARE-mRNA induced the transformation of rodent immortalized cells. These findings indicate that stabilized ARE-mRNA is necessary, if not all, for the oncogenic activity of E4orf6 and has the potential to transform cells, at least under a certain condition. Oncogene (2011) 30, 2912-2920; doi:10.1038/onc.2011.14; published online 14 February 2011
• Substrate stiffness regulates NF-kB expression and activity in cancer cells

  S. Ishihara, M. Yasuda, T. Mizutani, K. Kawabata, H. Haga MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL 22 2011年 [査読無し][通常論文]
  
• Radiation-induced Cancer Cell Repopulation: A Possible Mechanism Implied by Experiments Using Transplantable Mouse-derived Sarcoma Cell Line

  Takeshi Nishioka, Motoaki Yasuda, Tsuguhide Takeshima, Hisashi Haga, Yusuke Miyai, Ken-ichiro Shibata, Rie Yamazaki, Hiroki Shirato, Masahiro Teduka, Hiroyuki Date CELL STRUCTURE AND FUNCTION 36 (1) 13 -20 2011年 [査読無し][通常論文]
   

  Purpose: Treatment with any cytotoxic agent can trigger surviving cells in a tumor to divide faster than before. This phenomenon is widely recognized as "repopulation". To better clarify the mechanism, gene expression profiling and pathological experiments were performed. Materials and Methods: A mouse fibrosarcoma cell line, QRsP, was used. Cells were irradiated with 10 Gy. Colony assay and cloning were performed. Six clones were established. cDNA analysis was performed on the clone that showed the largest number of colonies on the 2nd 10 Gy irradiation. Mouse transplantation experiment was then carried out. Results: cDNA analysis showed that cyclin-dependent kinase inhibitors, p16 and p57 were down-regulated; 14.8- and 12.0-fold, respectively for the tolerant clone. Matrix metalloproteinase 3 and 13 were up-regulated; 22.5- and 25.8-fold, respectively. Transplantation ratio was 100% (5/5) for the tolerant clone whereas it was 40% (2/5) for the parent. Under light microscope, the mean mitotic cell number was 4.0+/-3.9 for the parent, and 12.8+/-3.4 for the tolerant clone (p < 0.01, Student's t-test). Conclusions: This study implies that repopulation is not a temporary reaction to irradiation. It is caused probably by "clonal" gene-expression changes, though it remains unknown whether the changes are attributable to tolerant cell selection or to gene mutation/modification.
• アデノウイルス感染は宿主細胞のStress granulesとP‐Bodiesに特異的な変化をもたらす

  黒嶋雄志, 安田元昭, 北村哲也, 石川誠, 北川善政, 進藤正信, 東野史裕 生化学 83回・33回 ROMBUNNO.2P-0664 -0664 2010年12月 [査読無し][通常論文]
  
• Integrin beta 1-dependent invasive migration of irradiation-tolerant human lung adenocarcinoma cells in 3D collagen matrix

  Seiichiro Ishihara, Hisashi Haga, Motoaki Yasuda, Takeomi Mizutani, Kazushige Kawabata, Hiroki Shirato, Takeshi Nishioka BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS 396 (3) 651 -655 2010年06月 [査読無し][通常論文]
   

  Radiotherapy is one of the effective therapies used for treating various malignant tumors. However, the emergence of tolerant cells after irradiation remains problematic due to their high metastatic ability, sometimes indicative of poor prognosis. In this study, we showed that subcloned human lung adenocarcinoma cells (A549P-3) that are irradiation-tolerant indicate high invasive activity in vitro, and exhibit an integrin beta 1 activity-dependent migratory pattern. In collagen gel overlay assay, majority of the A549P-3 cells displayed round morphology and low migration activity, whereas a considerable number of A549P-3IR cells surviving irradiation displayed a spindle morphology and high migration rate. Blocking integrin beta 1 activity reduced the migration rate of A549P-3IR cells and altered the cell morphology allowing them to assume a round shape. These results suggest that the A549P-3 cells surviving irradiation acquire a highly invasive integrin beta 1-dependent phenotype, and integrin beta 1 might be a potentially effective therapeutic target in combination with radiotherapy. (C) 2010 Elsevier Inc. All rights reserved.
• Matrix Metalloproteinase's Are Up-regulated in Sub-clones That Survived 10Gy Irradiation: A Possible Role of Hypoxic-inducible Factor-alpha (HIF1a)

  T. Nishioka, K. Tsutsumi, T. Takeshima, H. Shirato, M. Yasuda INTERNATIONAL JOURNAL OF RADIATION ONCOLOGY BIOLOGY PHYSICS 78 (3) S631 -S631 2010年 [査読無し][通常論文]
  
• Cell Motility and Invasion of Surviving Tumor Cells after 10 Gy Irradiation

  K. Tsutsumi, M. Tsuda, N. Yazawa, H. Nakamura, M. Yasuda, R. Yamazaki, H. Shirato, H. Kawaguchi, Y. Ohba, T. Nishioka INTERNATIONAL JOURNAL OF RADIATION ONCOLOGY BIOLOGY PHYSICS 75 (3) S538 -S539 2009年 [査読無し][通常論文]
  
• Increased Invasiveness and Non-spheroid Morphology Change of Human Lung Adenocarcinoma Cells That Survived 10 Gy Irradiation

  T. Nishioka, S. Ishihara, Y. Miyai, T. Mizutani, K. Kawabata, H. Shirato, R. Yamazaki, M. Yasuda, H. Haga, K. Kawabata INTERNATIONAL JOURNAL OF RADIATION ONCOLOGY BIOLOGY PHYSICS 75 (3) S540 -S540 2009年 [査読無し][通常論文]
  
• Value of fluorodeoxyglucose positron emission tomography before radiotherapy for head and neck cancer: does the standardized uptake value predict treatment outcome?

  SUZUKI Keishiro, NISHIOKA Takeshi, HOMMA Akihiro, TSUCHIYA Kazuhiko, YASUDA Motoaki, AOYAMA Hidefumi, ONIMARU Rikiya, TAMAKI Nagara, SHIRATO Hiroki Jpn J Radiol. 27 (6) 237 -242 2009年 [査読無し][通常論文]
  
• Novel function of transcription factor ATF5: blockade of p53-dependent apoptosis induced by ionizing irradiation.

  Takeshi Nishioka, Yusuke Miyai, Hisashi Haga, Kazushige Kawabata, Hiroki Shirato, Akihiro Homma, Kenichiro Shibata, Motoaki Yasuda Cell structure and function 34 (1) 17 -22 2009年 [査読無し][通常論文]
   

  Purpose: To find a new molecule that affects p53-dependent radiosensitivity.Methods and Materials: A mouse sarcoma cell line, QRsP(p53+/+), was used. From this cell line, we established a radiosensitive clone and a radioresistant one. Colony assay, p53 gene transfer, a luciferase assay for p53 and p21, animal transplantation experiment, and DNA array analyses were performed.Results: Microarray showed marked reduction of a transcription factor, ATF5, both in vitro and in vivo for the radiosensitive clone. Interestingly, flow cytometric analysis demonstrated marked apoptosis for the radiosensitive clone by p53 cloned adenovirus infection. Luciferase reporter assay revealed that ATF5 suppressed the transactivational activity of p53 and p63. By ATF5 gene transfer, the radiosensitive clone regained resistance to both ionizing-radiation and Ad-p53 infection-induced cell death. Surprisingly, time-lapse cell migration observation revealed greater cell motility for ATF5-transfected radiosensitive clone.Conclusions: It seems likely that ATF5 is a potent repressor of p53 and elevated expression of ATF5 in a tumor may relate to enhanced malignant phenotypes, such as radioresistance or greater cell motility.
• Increased Motility and Invasiveness in Tumor Cells That Survive 10 Gy Irradiation

  Kaori Tsutsumi, Masumi Tsuda, Natsuka Yazawa, Hirotaka Nakamura, Seiichiro Ishihara, Hisashi Haga, Motoaki Yasuda, Rie Yamazaki, Hiroki Shirato, Hideaki Kawaguchi, Takeshi Nishioka, Yusuke Ohba CELL STRUCTURE AND FUNCTION 34 (2) 89 -96 2009年 [査読無し][通常論文]
   

  Radiotherapy is an important noninvasive treatment for many types of cancer. However, it has been reported that the proliferative, invasive, and metastatic capacities of tumor cells can be increased in the repopulated tumors that survive radiotherapy. We have previously established a radiation-surviving cell model for the human non-small cell lung cancer cell line H1299 by harvesting relic cells 14 days after irradiation (IR cells). Here, we report that cell invasion, cell migration, and cell adhesion are enhanced in these surviving cancer cells. The mRNA expression levels of matrix metalloproteinases (MMPs), including mmp1, mmp2, and mmp9, were upregulated in IR cells compared with parental cells. A gelatin zymogram, wound healing assay, and invasion assay showed increased MMP activity, cell motility, and invasiveness in IR cells, respectively. Moreover, IR cells adhered more tightly to collagen-coated dishes than parental cells. Consistently, paxillin, phosphorylated FAK, integrin beta 1, and vinculin were strongly localized at focal adhesions in IR cells, as visualized by immunofluorescence. In this report, we identify molecules responsible for the malignant properties of tumor cells that survive irradiation. These molecules may be important therapeutic targets for the control of repopulated tumors after radiotherapy.
• Novel function of transcription factor ATF5: Blockade of p53-dependent apoptosis induced by irradiation

  T. Nishioka, M. Yasuda, H. Haga, R. Yamazaki, K. Tsutsumi, H. Shirato INTERNATIONAL JOURNAL OF RADIATION ONCOLOGY BIOLOGY PHYSICS 72 (1) S43 -S43 2008年 [査読無し][通常論文]
  
• Resveratrol modulates phagocytosis of bacteria through an NF-kappa B-dependent gene program

  Mitsuhiro Iyori, Hideo Kataoka, Haque Mohammad Shamsul, Kazuto Kiura, Motoaki Yasuda, Takashi Nakata, Akira Hasebe, Ken-ichiro Shibata ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY 52 (1) 121 -127 2008年01月 [査読無し][通常論文]
   

  Many studies have shown that the pharmacological effects of resveratrol, a phytoalexin polyphenolic compound, include protective effects against cancer and inflammation as well as enhancement of stress resistance. In this study, we examined whether resveratrol affected the phagocytosis of bacteria by macrophages and the activation of the transcription factor NF-kappa B after stimulation with or without the ligand FSL-1 for Toll-like receptor 2 (TLR2). Phagocytosis of Escherichia coli and of Staphylococcus aureus by THP-1 cells and RAW264.7 cells was inhibited by resveratrol in a dose-dependent manner regardless of stimulation with FSL-1. The NF-kappa B activity in HEK293 cells stably expressing TLR2 was also inhibited by resveratrol after stimulation with FSL-1. Resveratrol also inhibited both the translocation of p65 of NF-kappa B into nuclei in the transfectant and tumor necrosis factor alpha production by THP-1 cells or RAW264.7 cells. It has recently been reported that TLR-mediated signaling pathways lead to the upregulation of mRNAs of phagocytic receptors, including scavenger receptors and C-type lectin receptors. This study also demonstrated that FSL-1 induced the upregulation of mRNAs of phagocytic receptors such as macrophage scavenger receptor-1, CD36, DC-SIGN, and Dectin-1 and that the FSL-1-induced upregulation of their mRNAs was inhibited by resveratrol. In addition, it was found that the expression of DC-SIGN in HEK293 cells stably expressing DC-SIGN was reduced by resveratrol and that the phagocytic activity was significantly inhibited by resveratrol. Thus, this study suggests that resveratrol inhibited bacterial phagocytosis by macrophages by downregulating the expression of phagocytic receptors and NF-kappa B activity.
• The diacylated lipopeptide FSL-1 enhances phagocytosis of bacteria by macrophages through a Toll-like receptor 2-mediated signalling pathway

  Masako Mae, Mitsuhiro Iyori, Motoaki Yasuda, Haque Mohammad Shamsul, Hideo Kataoka, Kazuto Kiura, Akira Hasebe, Yasunori Totsuka, Ken-ichiro Shibata FEMS IMMUNOLOGY AND MEDICAL MICROBIOLOGY 49 (3) 398 -409 2007年04月 [査読無し][通常論文]
   

  A significant amount of evidence has been accumulated to show that Toll-like receptors (TLRs) function as sensors for microbial invasion. However, little is known about how signalling triggered by TLRs leads to the phagocytosis of pathogens. This study was designed to determine whether stimulation of TLR2 mainly with the lipopeptide FSL-1 plays a role in the phagocytosis of pathogens by macrophages. FSL-1 enhanced the phagocytosis of Escherichia coli to a markedly greater extent than it did that of Staphylococcus aureus, but did not enhance the phagocytosis of latex beads. FSL-1 stimulation resulted in enhanced phagocytosis of bacteria by macrophages from TLR2(+/+) mice but not by those from TLR2(-/-) mice. Chinese hamster ovary cells stably expressing TLR2 failed to phagocytose these bacteria, but the cells expressing CD14 did. FSL-1 induced upregulation of the expression of phagocytic receptors, including MSR1, CD36, DC-SIGN and Dectin-1 in THP-1 cells. Human embryonic kidney 293 cells transfected with DC-SIGN and MSR1 phagocytosed these bacteria. These results suggest that the FSL-1-induced enhancement of phagocytosis of bacteria by macrophages may be explained partly by the upregulation of scavenger receptors and the C-type lectins through TLR2-mediated signalling pathways, and that TLR2 by itself does not function as a phagocytic receptor.
• DC-SIGNは Toll-like receptor の補助レセプターとして機能する

  柴田 健一郎, 片岡 嗣雄, 伊従 光洋, 木浦 和人, 長谷部 晃, 安田 元昭, 中田 貴 日本細菌学雑誌 62 (1) 159 -159 2007年02月25日
• E2Fを介した自然免疫応答抑制機構

  安田 元昭, 伊従 光洋, 木浦 和人, 長谷部 晃, 片岡 嗣雄, 柴田 健一郎 日本細菌学雑誌 62 (1) 159 -159 2007年02月25日
• Three-dimensional tumor cell movement in collagen gel: mesenchymal-to-amoeboid transition in a sub-clone that survived 10 Gy irradiation

  T. Nishioka, H. Haga, Y. Miyai, M. Yasuda, K. Tsutsumi, R. Yamazaki, H. Shirato, K. Kawabata INTERNATIONAL JOURNAL OF RADIATION ONCOLOGY BIOLOGY PHYSICS 69 (3) S148 -S148 2007年 [査読無し][通常論文]
  
• Matrixmetalloproteinases: up-regulated in subclones that survived 10-Gy irradiation.

  NISHIOKA Takeshi, YASUDA Motoaki, TSUTSUMI Kaori, HAGA Hisashi, SHIRATO Hiroki Radiat Med 25 (8) 430 -431 2007年 [査読無し][通常論文]
  
• CD14 directly binds to triacylated lipopeptides and facilitates recognition of the lipopeptides by the receptor complex of Toll-like receptors 2 and 1 without binding to the complex

  Takashi Nakata, Motoaki Yasuda, Mari Fujita, Hideo Kataoka, Kazuto Kiura, Hidehiko Sano, Kenichiro Shibata CELLULAR MICROBIOLOGY 8 (12) 1899 -1909 2006年12月 [査読無し][通常論文]
   

  It has demonstrated that the recognition of triacylated lipopeptides by Toll-like receptor (TLR) 2 requires TLR1 as a coreceptor. In the NF-kappa B reporter assay system in which human embryonic kidney 293 cells were transfected with TLR2 and TLR1 together with an NF-kappa B luciferase reporter gene, S-(2,3-bispalmitoyloxy-propyl)N-palmitoyl-Cys-Lys-Lys-Lys-Lys (Pam(3)CSK(4)) and Pam(3)CSSNA were recognized by TLR2/TLR1, but the recognition level was unexpectedly very low. However, cotransfection of CD14 drastically enhanced the recognition of triacylated lipopeptides by TLR2/TLR1. The CD14-induced enhancement did not occur without cotransfection of TLR1. Both CD14(dS39-A48), a mutant with deletion of the part of possible N-terminal ligand-binding pocket, and anti-CD14 monoclonal antibody reduced the CD14-induced enhancement. Transfection of a TIR domain-deficient mutant of TLR2 (TLR2(dE772-S784)) or TLR1 (TLR1(dQ636-K779)) completely abrogated the CD14-induced enhancement. Soluble recombinant CD14 added extracellularly enhanced the recognition of Pam(3)CSSNA by TLR2/TLR1. Immunoprecipitation analysis demonstrated that CD14 was not associated with TLR2 but that TLR1 was associated with TLR2. In addition, surface plasmon resonance-based assay demonstrated that CD14 binds to Pam(3)CSK(4) at a dissociation constant of 5.7 mu M. This study suggests that CD14 directly binds to triacylated lipopeptides and facilitates recognition of the lipopeptides by the TLR2/TLR1 complex without binding to the receptor complex.
• The diacylated lipopeptide FSL-1 induces TLR2-mediated Th2 responses

  Kazuto Kiura, Hideo Kataoka, Motoaki Yasuda, Nobuo Inoue, Ken-ichiro Shibata FEMS IMMUNOLOGY AND MEDICAL MICROBIOLOGY 48 (1) 44 -55 2006年10月 [査読無し][通常論文]
   

  The diacylated lipopeptide FSL-1 enhanced the generation of IgG antibodies in TLR2(+/+) mice, but not in TLR2(-/-) mice, when administered together with hen egg lysozyme as an antigen. Escherichia coli lipopolysaccharide enhanced the generation of antigen-specific antibodies in both TLR2(-/-) and TLR2(+/+) mice. In TLR2(+/+) mice, the level of enhancement due to FSL-1 was similar to that caused by lipopolysaccharide. Analysis of the IgG antibodies subclass demonstrated that the level of Th2-type IgG1 antibodies was higher than that of Th1-type IgG2a antibodies. Both FSL-1 and lipopolysaccharide induced production of IL-10 and IL-6 by splenocytes from TLR2(+/+) mice. Lipopolysaccharide also induced production of these cytokines by splenocytes from TLR2(-/-) mice, but FSL-1 did not. Neither FSL-1 nor lipopolysaccharide induced IL-12p70 production by splenocytes from either type of mice. FSL-1 upregulated B7.2 expression in B220(+) cells from TLR2(+/+) mice but not those from TLR2(-/-) mice, whereas lipopolysaccharide upregulated B7.2 expression in B220(+) cells from both types of mice. FSL-1 and, to a lesser extent, lipopolysaccharide activated mitogen-activated protein kinases in splenocytes. FSL-1 and, to a lesser extent, lipopolysaccharide induced the expression of c-Fos, which is known to be involved in Th2-type responses, in splenocytes. Thus, this study demonstrated that FSL-1 possessed TLR2-mediated Th2-type responses in vivo.
• Roles of N-linked glycans in the recognition of microbial lipopeptides and lipoproteins by TLR2

  Hideo Kataoka, Motoaki Yasuda, Mitsuhiro Iyori, Kazuto Kiura, Mitsuo Narita, Takashi Nalkatal, Ken-ichiro Shibata CELLULAR MICROBIOLOGY 8 (7) 1199 -1209 2006年07月 [査読無し][通常論文]
   

  Details of roles of carbohydrates attached to Toll-like receptors (TLRs) in the recognition of pathogen-associated molecular patterns and in the formation of the functional receptor complex still remain unknown. This study was designed to determine whether the glycans linked at Asn114, Asn199, Asn414 and Asn442 residues of TLR2 ectodomain were involved in the recognition of diacylated lipopeptide and lipoprotein. Single and multiple mutants were transfected into human embryonic kidney (HEK) 293 cells together with a NF-kappa B luciferase reporter plasmid. All of these mutants were expressed on the surface. SDS-PAGE of the transfectants demonstrated that these mutants migrated lower than wild-type TLR2 and their molecular masses decreased as the number of mutated Asn residues increased. TLIZ12(N114A), TLR2(N199A) and TLR2(N414A) as well as wild-type TLR2 induced NF-kappa B activation when stimulated with these ligands, whereas TLR2(N442A) failed to induce NF-kappa B activation. All of triple and quadruple mutants failed to induce NF-kappa B activation, but were associated with both wildtype TLR2 and TLR6 in the transfectants. TLR2(N114A,N199A) TLR2(N114A,N414A) and, to a lesser extent, TLR2(N114A,N442A), in which two N-linked glycans are speculated to be exposed to the concave surface of TLR2 solenoid, not only induce NF-kappa B activation but also are associated with wild-type TLR2 and TLR6. These results suggest that the glycan at Asn442 and at least two N-linked glycans speculated to be exposed to the concave surface of TLR2 solenoid are involved in the recognition of ligands by TLR2 and/or in formation or maturation of a functional TLR2 receptor complex.
• The synthetic analogue of mycoplasmal lipoprotein FSL-1 induces dendritic cell maturation through Toll-like receptor 2

  K Kiura, H Kataoka, T Nakata, T Into, M Yasuda, S Akira, N Inoue, K Shibata FEMS IMMUNOLOGY AND MEDICAL MICROBIOLOGY 46 (1) 78 -84 2006年02月 [査読無し][通常論文]
   

  Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-differentiated bone marrow-derived dendritic cells were stimulated with the synthetic lipopeptide S-(2,3-bispalmitoyloxypropyl)-CGDPKHSPKSF (FSL-1) or the Escherichia coli lipopolysaccharide. FSL-1 induced the production of TNF-alpha and IL-12 by C57BL/6-derived bone marrow-derived dendritic cells but not by bone marrow-derived dendritic cells from Toll-like receptor 2-deficient (TLR2(-/-)) mice. Lipopolysaccharide induced the production of TNF-alpha and IL-12 by bone marrow-derived dendritic cells derived from either type of mice. FSL-1 did not induce production of IL-10 by bone marrow-derived dendritic cells from either type of mice, whereas lipopolysaccharide induced small amounts of IL-10 by bone marrow-derived dendritic cells from both types of mice. The upregulation by FSL-1 of the expression of CD80, CD86 and the MHC class II molecule IA(b) was dose- and time-dependent on the surfaces of C57BL/6-derived bone marrow-derived dendritic cells but not on the surface of TLR2(-/-)-derived bone marrow-derived dendritic cells. Lipopolysaccharide upregulated the expression of these molecules on the surfaces of bone marrow-derived dendritic cells from both types of mice. The expression of CD11c on the surfaces of C57BL/6-derived bone marrow-derived dendritic cells was upregulated by stimulation with both FSL-1 and lipopolysaccharide up to 12 h; thereafter, the expression was downregulated. The results suggest that FSL-1 can accelerate maturation of bone marrow-derived dendritic cells and this FSL-1 activity is mediated by TLR2.
• Reduced transactivation activity of p53 and repressed CDK inhibitor expression observed in subclones that survived 10Gy irradiation: Possible mechanisms of "radiation induced cancer cell repopulation"

  T. Nishioka, M. Yasuda, H. Shirato INTERNATIONAL JOURNAL OF RADIATION ONCOLOGY BIOLOGY PHYSICS 66 (3) S586 -S587 2006年 [査読無し][通常論文]
  
• X-ray irradiation altered chemosensitivity of a p53-null non-small cell lung cancer cell line

  Kaori Tsutsumi, Motoaki Yasuda, Takeshi Nishioka CELL STRUCTURE AND FUNCTION 31 (2) 47 -52 2006年 [査読無し][通常論文]
   

  Radiotherapy is an effective approach to treating many types of cancer. Recent progress in radiotherapy technology, such as intensity-modulated radiation therapy (IMRT) and three-dimensional (3D) radiotherapy, allow precise energy transfer to the tumor, which has improved local control rates. However, the emergence of tolerant cells during or after radiotherapy remains problematic. In the present study, we first established a cell population from H1299, the p53-null non-small cell lung cancer cell line, by 10 Gy irradiation using 6 MV X-rays. The radio- and chemosensitivity of this cell population (referred to as H1299-IR) was determined using colony formation analyses and MTS assays. Compared with the parental cell line, the radiosensitivity of H1299-IR was apparently the same. H1299 and H1299-IR were both more radio tolerant than the A549 cell line. However, H1299-IR became significantly more sensitive to cisplatin, an antitumor agent. After exposure to 25 mu g/ml cisplatin for 2 h, parental cells steadily grew during the MTS assay, whereas the sensitivity of H1299-IR cells doubled both at 24 and 48 h. Microarray analysis of over 30,000 H1299-IR genes (Agilent Technology) revealed that 12 and 15 genes were up- (> 2.0) and down- (< 2.0) regulated, respectively. Rad51d (homologous recombination repair protein) gene was down-regulated 2.8-fold, whereas matrix metalloproteinase 1 (collagenase-1) gene was up-regulated 4.4-fold. These results indicated that some p53-null non-small cell lung cancers could be successfully treated when X-ray radiotherapy was administered with subsequent or concurrent cisplatin chemotherapy.
• Activation of Human Monocytes and Mouse Splenocytes by Single-Walled Carbon Nanotubes

  Kazuto Kiura, Yoshinori Sato, Motoaki Yasuda, Bunshi Fugetsu, Fumio Watari, Kazuyuki Tohji, Ken-ichiro Shibata JOURNAL OF BIOMEDICAL NANOTECHNOLOGY 1 (3) 359 -364 2005年09月 [査読無し][通常論文]
   

  This study was designed to investigate biological toxicities of single-walled carbon nanotubes (SWCNTs) and hat-stacked carbon nanofibers (H-CNFs) that possess different specific surface areas and graphene structures. These materials activated both human monocytic and mouse spleen cells to produce TNF-alpha, although the activity was significantly lower than those of microbial lipopeptide and lipopolysaccharide. The activity of the nanotubes was found to be higher than that of the nanofibers. Thus, these materials are recognized as non-self antigens that can stimulate the immune response.
• 口腔粘膜からのヒトパピローマウイルス検出

  安田 元昭, 柴田 健一郎 北海道歯学雑誌 26 (1) 49 -50 2005年06月15日
• Hamahira S., Nakamura M., Khan M.H., Choudhury A.R., Shibata K., Yasuda M. "Comprehensive detection of human papilomavirus in buccal cancer collected in Bangladesh", Dentistry in Japan 41:19-24 (2005)*

  2005年 [査読無し][通常論文]
  
• Into T., Kiura K., Yasuda M., Kataoka H., Inoue N., Hasebe A., Takeda K., Akira S., and Shibata KI. "Stimulation of human Toll-like receptor(TLR2) and TLR6 with membrane lipoproteins of Mycoplasma fermentans induces apoptotic cell death after NF-kappa ・・・

  T Into, K Kiura, M Yasuda, H Kataoka, N Inoue, A Hasebe, K Takeda, S Akira, K Shibata CELLULAR MICROBIOLOGY 6 (2) 187 -199 2004年02月 [査読無し][通常論文]
   

  Into T., Kiura K., Yasuda M., Kataoka H., Inoue N., Hasebe A., Takeda K., Akira S., and Shibata KI. "Stimulation of human Toll-like receptor(TLR2) and TLR6 with membrane lipoproteins of Mycoplasma fermentans induces apoptotic cell death after NF-kappa B activation." Cell. Microbiol., 6(2):187-199, 2004*
• DNA array法による子宮頚部細胞診検体中ヒトパピローマウイルスの検出

  渡利英道, 山本律, 水上尚典, 安田元昭, 柴田健一郎, 白田勝利, 西村訓弘, 白川洋三, 藤田博正 日本産科婦人科学会東北連合地方部会誌 (51) 2004年
• 1-33.DNA array法による子宮頚部擦過細胞診検体中ヒトパピローマウイルスの検出(第3群 子宮頸部悪性腫瘍3)(一般演題)

  渡利 英道, 安田 元昭, 白田 勝利, 西村 訓弘, 藤田 博正, 柴田 健一郎, 藤堂 幸治, 山本 律, 水上 尚典, 櫻木 範明 日本産科婦人科學會雜誌 56 (2) 345 -345 2004年
• Okusawa T., Fujita M., Nakamura JI., Into T., Yasuda M., Yoshimura A., Hara Y., Hasebe A., Golenbock D.T., Morita M., Kuroki Y., Ogawa T., and Shibata KI."Relationship between structures and biological activities of mycoplasmal diacylated lipopeptides ・・・

  2004年 [査読無し][通常論文]
   

  Okusawa T., Fujita M., Nakamura JI., Into T., Yasuda M., Yoshimura A., Hara Y., Hasebe A., Golenbock D.T., Morita M., Kuroki Y., Ogawa T., and Shibata KI."Relationship between structures and biological activities of mycoplasmal diacylated lipopeptides and their recognition by toll-like receptors 2 and 6." Infect Immun, 72(3):1657-1665, 2004*
• Toll-like receptor 2の107,112ならびに115番目のロイシンはリポペプチドならびにペプチドグリカンの認識に関与する

  藤田 真理, 森田 学, 引頭 毅, 片岡 嗣雄, 安田 元昭, 柴田 健一郎 日本免疫学会総会・学術集会記録 33 121 -121 2003年11月 [査読無し][通常論文]
  
• Mycoplasma fermentansの細胞膜リポタンパク質はToll-like receptor(TLR)2ならびにTLR6を介してMyD88とFADDに依存的なアポトーシスを誘導する

  引頭 毅, 木浦 和人, 安田 元昭, 藤田 真理, 片岡 嗣雄, 柴田 健一郎 日本免疫学会総会・学術集会記録 33 123 -123 2003年11月 [査読無し][通常論文]
  
• マイコプラズマの細胞膜リポタンパク質がToll様受容体(TLR)2ならびにTLR6を介して誘導するアポトーシスの解析

  引頭 毅, 木浦 和人, 安田 元昭, 柴田 健一郎 日本マイコプラズマ学会雑誌 (30) 69 -71 2003年10月 [査読無し][通常論文]
   

  マイコプラズマの細胞膜リポタンパク質(LPfer)の誘導する細胞死において,ヒトToll-like receptor(TLR) 2ならびにTLR 6,更にその下流分子の関与について検討した.LPferはヒトTLR 2遺伝子を導入したHEK293細胞では濃度依存的に細胞死を誘導し,TLR 2とTLR 6を共に発現した細胞ではTLR 2単独の場合よりも強い細胞死誘導活性を示した.LpferがTLR 2/6を介して誘導する細胞死はドミナントネガティブ型myeloid differentiation factor 88(MyD88),ドミナントネガティブ型Fas-associated death domain protein(FADD)遺伝子導入により顕著に抑制された.Lpferの細胞死誘導活性にはTLR 2の存在が必須であり,TLR 2とTLR 6両者の存在下でより強いこと,LpferはTLR 2/6によって確認された後,MyD88やFADDを介したシグナル経路を経て細胞死を誘導することが示唆された
• Toll様受容体2におけるリポペプチドならびにペプチドグリカンの認識部位について

  藤田 真理, 森田 学, 引頭 毅, 片岡 嗣雄, 濱平 須美子, 安田 元昭, 柴田 健一郎 歯科基礎医学会雑誌 45 (5) 273 -273 2003年09月01日 [査読無し][通常論文]
  
• 口腔マイコプラズマ由来のリポタンパク質のアジュバント活性について

  木浦 和人, 黒岩 理暢, 引頭 毅, 安田 元昭, 井上 農夫男, 柴田 健一郎 歯科基礎医学会雑誌 45 (5) 273 -273 2003年09月01日
• DNAアレイ法を用いたヒトパピローマウイルスの網羅的検出法

  安田元昭, 白田勝利, 西村訓弘, 岩沢晶彦, 渡利英道, 桜木範明, 柴田健一郎 日本癌学会総会記事 62nd 290 -290 2003年08月25日 [査読無し][通常論文]
  
• Overexpression of osteopontin-enhanced adhesive activity of osteoblast-like cell.

  A. Yokoyama, M. Yasuda, K. Yamazaki, T. Kawasaki, F. Higashino, M. Shindoh, T. Kohgo, A. Yamamoto, T. Hanawa JOURNAL OF DENTAL RESEARCH 82 B140 -B140 2003年06月 [査読無し][通常論文]
  
• ジアシルリポペプチドとToll-like receptor 2との相互作用

  藤田 真理, 森田 学, 奥沢 亜美, 引頭 毅, 安田 元昭, 柴田 健一郎 日本細菌学雑誌 58 (1) 294 -294 2003年02月 [査読無し][通常論文]
  
• Fujita M, Into T, Yasuda M, Okusawa T, Hamahira S, Kuroki Y, Eto A, Nisizawa T, Morita M, Shibata K.:"Involvement of leucine residues at positions 107, 112, and 115 in a leucine-rich repeat motif of human toll-like receptor 2 in the recognition of diac・・・

  2003年 [査読無し][通常論文]
   

  Fujita M, Into T, Yasuda M, Okusawa T, Hamahira S, Kuroki Y, Eto A, Nisizawa T, Morita M, Shibata K.:"Involvement of leucine residues at positions 107, 112, and 115 in a leucine-rich repeat motif of human toll-like receptor 2 in the recognition of diacylated lipoproteins and lipopeptides and Staphylococcus aureus peptidoglycans." J Immunol,171(7):3675-83(2003)*
• Aoyagi M, Higashino F, Yasuda M, Takahashi A, Sawada Y, Totsuka Y, Kohgo T, Sano H, Kobayashi M, Shindoh M. :"Nuclear export of adenovirus E4orf6 protein is necessary for its ability to antagonize apoptotic activity of BH3-only proteins." Oncogene, 22(・・・

  2003年 [査読無し][通常論文]
   

  Aoyagi M, Higashino F, Yasuda M, Takahashi A, Sawada Y, Totsuka Y, Kohgo T, Sano H, Kobayashi M, Shindoh M. :"Nuclear export of adenovirus E4orf6 protein is necessary for its ability to antagonize apoptotic activity of BH3-only proteins." Oncogene, 22(44):6919-6927(2003)*
• Mycoplasma fermentans 由来リポタンパク質の細胞死誘導活性における細胞外ATPとP2Xレセプターの関与について

  引頭 毅, 岡田 和隆, 長谷部 晃, 井上 農夫男, 安田 元昭, 柴田 健一郎 日本マイコプラズマ学会雑誌 = Japanese Journal of Mycoplasmology 29 68 -69 2002年11月18日
• マイコプラズマ由来リポタンパク質の細胞死誘導活性

  岡田 和隆, 濱平 須美子, 引頭 毅, 長谷部 晃, 安田 元昭, 井上 農夫男, 柴田 健一郎 歯科基礎医学会雑誌 44 (5) 386 -386 2002年09月20日
• アデノウイルスE1B19Kの抗アポトーシス活性

  濱平 須美子, 長谷部 晃, 安田 元昭, 柴田 健一郎 歯科基礎医学会雑誌 44 (5) 385 -385 2002年09月20日
• Bacteroides forsythus由来リポタンパク質の歯周病における病因的役割について

  長谷部 晃, 荒川 真一, 石倉 裕晃, 吉村 篤利, 土田 信夫, 安田 元昭, 柴田 健一郎 歯科基礎医学会雑誌 44 (5) 463 -463 2002年09月20日 [査読無し][通常論文]
  
• ヒトアデノウイルスE1B19Kはp51により誘導されるアポトーシスを阻害する

  安田 元昭, 菅原 祐一郎, 濱平 須美子, 向後 隆男, 中村 太保 北海道歯学雑誌 23 (1) 2 -9 2002年06月15日
• 放射線照射はヒト正常線維芽細胞のHGF発現レベルを上昇させる

  安田 元昭, 進藤 正信, KHAN Mahfuzul H., 向後 隆男, 中村 元康 北海道歯学雑誌 23 (1) 10 -15 2002年06月15日
• Yasuda M, Shindoh M, Khan M, Kohogo T, Nakamura M "Gamma-irradiation induced overexpression of hepatocyte growth factor in human diploid fibroblast."Hokkaido J. Dent. Sci 23(1):10-15 , 2002*

  2002年 [査読無し][通常論文]
  
• アデノウイルスベクターシステムを用いたp53およびp51による細胞死経路

  菅原 祐一郎, 安田 元昭, カン M. H., 中村 太保 歯科放射線 41 34 -34 2001年09月30日
• 唾液腺造影におにる造影剤の至適量について

  大森 桂一, 安田 元昭, 金子 正範, 澤村 強, 中村 太保, 福田 博, 畔田 貢 歯科放射線 41 97 -97 2001年09月30日
• アデノウィルスE40rf6によるBcl-2ファミリーBNIP3の機能抑制

  青柳 麻里, 東野 史裕, 安田 元昭, 佐野 英彦, 向後 隆男, 進藤 正信 歯科基礎医学会雑誌 43 (5) 638 -638 2001年08月20日
• オステオポンチンの遺伝子導入が骨芽細胞様細胞の接着能に及ぼす影響

  横山 敦郎, 安田 元昭, 山崎 克久, 谷口 奈々江, 川崎 貴生, 東野 史裕, 進藤 正信, 向後 隆男 日本補綴歯科學會雜誌 = The journal of the Japan Prosthodontic Society 45 147 -147 2001年06月01日
• Khan MH, Yasuda M, Higashino F, Haque S, Kohgo T, Nakamura M, Shindoh M. :"nm23-H1 suppresses invasion of oral squamous cell carcinoma-derived cell lines without modifying matrix metalloproteinase-2 and matrix metalloproteinase-9 expression."Am J Patho・・・

  MH Khan, M Yasuda, F Higashino, S Haque, T Kohgo, M Nakamura, M Shindoh AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY 158 (5) 1785 -1791 2001年05月 [査読無し][通常論文]
   

  Khan MH, Yasuda M, Higashino F, Haque S, Kohgo T, Nakamura M, Shindoh M. :"nm23-H1 suppresses invasion of oral squamous cell carcinoma-derived cell lines without modifying matrix metalloproteinase-2 and matrix metalloproteinase-9 expression."Am J Pathol. 158(5):1785-91 (2001)*
• Khan MH, Yasuda M, Haque S, Nakamura "M nm23-H1 Suppressed the Migration Activity of Oral Squamous Cell Carcinoma Cells Under Stimulation of Type-I and -IV Collagen. " Hokkaido J. Dent. Sci 22(2):168-177 (2001)*

  マハフジュル・ハク カン, 安田 元昭, セジュティ ハク, 中村 太保 北海道歯学雑誌 22 (2) 168 -177 2001年 [査読無し][通常論文]
  
• M. Yasuda, K. Yamazaki, S. Hamahira, T. Kawasaki、M. Nakamura, M. Shindoh "Functional Dissection of BH3 Only Protein BNIP3" Tumor Res. 36:23-28 (2001)*

  2001年 [査読無し][通常論文]
  
• 31:BNIP3 activates ced-3 induced apoptosis

  Yamazaki K, Yasuda M, Kohgo T, Shindoh M Oral medicine & pathology 5 (2) 123 -123 2000年12月20日
• アデノウイルスと細胞のクロストーク--アデノウイルスの遺伝子産物と相互作用する細胞内蛋白質

  東野 史裕, 安田 元昭, 進藤 正信 蛋白質核酸酵素 45 (8) 1350 -1357 2000年06月
• Functional identification of the apoptosis effector BH3 domain in cellular protein BNIP1.

  M Yasuda, G Chinnadurai Oncogene 19 (19) 2363 -7 2000年05月04日 [査読無し][通常論文]
   

  BCL-2 family proteins play a central role in apoptosis regulation in mammals and in C. elegans. Mammalian cellular and viral anti-apoptosis proteins such as BCL-2 and E1B-19K interact with several cellular proteins. Some of these interacting proteins promote apoptosis and belong to the BCL-2 family. Certain BCL-2 family pro-apoptotic proteins such as BAX and BAK share extensive sequence homology with BCL-2. In contrast, certain pro-apoptotic proteins such as BIK and BID share a single death effector domain, BH3, with other BCL-2 family proteins. By mutational analysis, we show that one of the cellular proteins, BNIP1 (previously Nip-1), that interacts with BCL-2 family anti-apoptosis proteins is a 'BH3 alone' pro-apoptotic protein. Transient transfection of BNIP1 induces a moderate level of apoptosis. Deletions of the N-terminal 32 amino acid region and the C-terminal trans-membrane domain did not significantly affect pro-apoptotic activity. In contrast, deletions encompassing a region containing a motif similar to the BH3-domain abrogated the apoptotic activity. Substitution of BNIP1 BH3 domain for the corresponding sequence in BAX efficiently restored the apoptotic activity of BAX, establishing the functional identity of the BH3 domain of BNIP1. The N-terminal deletions of BNIP1 (that retain the BH3 domain) enhanced the level of interaction with BCL-X(L). Mutants containing the BH3 deletions were still able to heterodimerize with BCL-X(L) while mutants lacking both the N-terminal region and the BH3 domain were unable to heterodimerize, suggesting that BNIP1 may bind to BCL-X(L) via two different binding motifs.
• Hanzawa M, Shindoh M, Higashino F, Yasuda M, Inoue N, Hida K, Ono M, Kohgo T, Nakamura M, Notani K, Fukuda H, Totsuka Y, Yoshida K, Fujinaga K."Hepatocyte growth factor upregulates E1AF that induces oral squamous cell carcinoma cellinvasion by activati・・・

  2000年 [査読無し][通常論文]
   

  Hanzawa M, Shindoh M, Higashino F, Yasuda M, Inoue N, Hida K, Ono M, Kohgo T, Nakamura M, Notani K, Fukuda H, Totsuka Y, Yoshida K, Fujinaga K."Hepatocyte growth factor upregulates E1AF that induces oral squamous cell carcinoma cellinvasion by activating matrix metalloproteinase genes." Carcinogenesis. 21(6):1079-85.(2000)*
• Shindoh M, Adachi M, Higashino F, Yasuda M, Hida K, Nishioka T, Ono M, Takayama S, Reed JC, Imai K, Totsuka Y, Kohgo T."BAG-1 expression correlates highly with the malignant potential in early lesions (T1 and T2) of oral squamous cell carcinoma."Oral O・・・

  2000年 [査読無し][通常論文]
   

  Shindoh M, Adachi M, Higashino F, Yasuda M, Hida K, Nishioka T, Ono M, Takayama S, Reed JC, Imai K, Totsuka Y, Kohgo T."BAG-1 expression correlates highly with the malignant potential in early lesions (T1 and T2) of oral squamous cell carcinoma."Oral Oncol. 36(5):444-449. (2000)*
• 頭頚部腺様嚢胞癌放射線治療症例の臨床的検討

  大森 桂一, 細川 洋一郎, 小日向 謙一, 金子 正範, 安田 元昭, 八幡 英子, 中村 太保, 渡辺 良晴 歯科放射線 39 90 -90 1999年10月01日
• BAG-1はp53非依存的に細胞の放射線感受性を変化させる

  菅原 祐一郎, 安田 元昭, カン M. H., 中村 太保 歯科放射線 39 88 -88 1999年10月01日
• BNIP3alpha: a human homolog of mitochondrial proapoptotic protein BNIP3.

  M Yasuda, J W Han, C A Dionne, J M Boyd, G Chinnadurai Cancer research 59 (3) 533 -7 1999年02月01日 [査読無し][通常論文]
   

  Apoptosis is regulated by interaction of viral and cellular BCL-2 family antiapoptotic proteins with various pro-apoptotic proteins, several of which are also members of the BCL-2 family. Cellular protein BNIP3 is a BCL-2 family proapoptotic protein that interacts with viral antiapoptosis proteins such as adenoviruses E1B-19K and EBV-BHRF1 and cellular antiapoptosis proteins such as BCL-2 and BCL-x(L). Database searches indicate that the human genome encodes an open reading frame for a protein, BNIP3 alpha, that shares substantial homology with BNIP3, The BNIP3 alpha open reading frame encodes a protein of 219 amino acids that contains a conserved BH3 domain and a COOH-terminal trans-membrane domain, characteristic of several BCL-2 family proapoptotic proteins. BNIP3a interacts with viral antiapoptosis protein E1B-19K and cellular antiapoptosis proteins BCL-2 and BCL-x(L). Overexpression of BNIP3 alpha in transfected cells results in apoptosis and suppresses the antiapoptosis activity of E1B-19K and BCL-x(L). Like BNIP3, BNIP3 alpha seems to be predominantly localized in mitochondria, These results suggest that BNIP3 alpha is a structural and functional homologue of BNIP3, BNIP3 and BNIP3 alpha seem to be the first examples of homologues among the various human proapoptotic proteins. Northern blot analysis reveals that BNIP3a is expressed ubiquitously in most human tissues. In contrast, BNIP3 is expressed well in several human tissues and less abundantly in certain tissues such as placenta and lung. These results suggest that although BNIP3 and BNIP3 alpha may promote apoptosis simultaneously in most human tissues, BNIP3 alpha may play a more universal role.
• Yamano S, Tokino T, Yasuda M, Kaneuchi M, Takahashi M, Niitsu Y, Fujinaga K, Yamashita T :"Induction of transformation and p53-dependent apoptosis by adenovirus type 5 E4orf6/7 cDNA. ", J Virol., 73(12):10095-103 (1999)*

  1999年 [査読無し][通常論文]
  
• Yasuda,M. ： "Regulation of apoptosis by a Caenorhabditis elegans BNIP3 homolog. " Oncogene 17(19):2525-2530 (1998)＊

  YASUDA M Oncogene 17 (19) 2525 -30 1998年11月12日 [査読無し][通常論文]
   

  We have identified a C. elegans protein, ceBNIP3, homologous to the human BCL-2/EIB-19K interacting BCL-2 family pro-apoptotic protein BNIP3. In transiently transfected mammalian cells, ceBNIP3 complexes with CED-9, the worm homolog of BCL-2. CeBNIP3 also efficiently heterodimerizes with the cell death protease proCED-3 by direct binding via the prodomain. Transfection of ceBNIP3 and CED-3 results in enhanced proteolytic processing of the CED-3 zymogen and in cooperative induction of apoptosis. Coexpression of CED-9 suppresses the cooperative cell death induced by ceBNIP3 and CED-3. In cells coexpressing CED-9, ceBNIP3 and CED-3, all three proteins exist as a ternary complex suggesting that CED-9 may suppress cooperative apoptosis induced by CED-3 and ceBNIP3 by simultaneous complex formation with CED-3 and ceBNIP3. Our results suggest that ceBNIP3 may be a novel component of the C. elegans apoptosis paradigm and may initiate apoptosis by recruiting CED-3 to mitochondria and other cytoplasmic membranes.
• Yasuda,M. ： "Adenovirus E1B-19k/BCL-2 Interacting Protein BNIP3 Contains a BH3 Domain and a Mitochondrial Targeting Sequence." J. Biol. Chem. 273(20),12415-124214.(1998)＊

  M Yasuda, P Theodorakis, T Subramanian, G Chinnadurai The Journal of biological chemistry 273 (20) 12415 -21 1998年05月15日 [査読無し][通常論文]
   

  Adenovirus E1B-19K and BCL-2 anti-apoptosis proteins interact with certain BCL-2 family pro-apoptotic proteins. A conserved domain, BH3, present in these proteins is essential for their pro-apoptotic activity and for heterodimerization with anti-apoptosis proteins. Cellular protein BNIP3 (previously NIP3) interacts with E1B-19K, BCL-2, BCL-x(L), and EBV-BHRF1. BNIP3 contains a motif similar to the BH3 domain. Deletion of the BH3-like motif in BNIP3 abrogates its ability to heterodimerize with E1B-19K and BCL-x(L). Substitution of the BH3 domain of BNIP3 for the corresponding sequences of BAX functionally restores the pro-apoptotic and protein heterodimerization activities of BAX. BNIP3 exhibits a delayed cell death activity that is partially relieved by deletion of the BH3 domain. BNIP3 suppresses the anti-apoptosis activity of BCL-x(L) in a BH3-dependent manner. BNIP3 contains a C-terminal trans-membrane (TM) domain similar to other BCL-8 family proteins and BNIP1 (previously NIP1). The TM domains of BNIP3 and BNIP1 can functionally substitute for the TM domain of a BCL-2 family member EBV-BHRF1. The BNIP3 TM domain exclusively targets the heterologous green fluorescent protein (GFP) to mitochondria. These results suggest that BNIP3 is a member of the BH3-contaning BCL-2 family of pro-apoptotic proteins and functions in mitochondria.
• Yasuda M, Theodorakis P, Subramanian T, Chinnadurai G. :"Adenovirus E1B-19K/BCL-2 interacting protein BNIP3 contains a BH3 domain and a mitochondrial targeting sequence." J Biol Chem. 273(20):12415-21. (1998)*

  YASUDA M. J. Biol. Chem. 273 (20) 12415 -12421 1998年 [査読無し][通常論文]
   

  Adenovirus E1B-19K and BCL-2 anti-apoptosis proteins interact with certain BCL-2 family pro-apoptotic proteins. A conserved domain, BH3, present in these proteins is essential for their pro-apoptotic activity and for heterodimerization with anti-apoptosis proteins. Cellular protein BNIP3 (previously NIP3) interacts with E1B-19K, BCL-2, BCL-xL, and EBV-BHRF1. BNIP3 contains a motif similar to the BH3 domain. Deletion of the BH3-like motif in BNIP3 abrogates its ability to heterodimerize with E1B-19K and BCL-xL. Substitution of the BH3 domain of BNIP3 for the corresponding sequences of BAX functionally restores the pro-apoptotic and protein heterodimerization activities of BAX. BNIP3 exhibits a delayed cell death activity that is partially relieved by deletion of the BH3 domain. BNIP3 suppresses the anti-apoptosis activity of BCL-xL in a BH3-dependent manner. BNIP3 contains a C-terminal trans-membrane (TM) domain similar to other BCL-2 family proteins and BNIP1 (previously NIP1). The TM domains of BNIP3 and BNIP1 can functionally substitute for the TM domain of a BCL-2 family member EBV-BHRF1. The BNIP3 TM domain exclusively targets the heterologous green fluorescent protein (GFP) to mitochondria. These results suggest that BNIP3 is a member of the BH3-contaning BCL-2 family of pro-apoptotic proteins and functions in mitochondria.
• Yasuda M, D'Sa-Eipper C, Gong XL, Chinnadurai G. :"Regulation of apoptosis by a Caenorhabditis elegans BNIP3 homolog." Oncogene. 17(19):2525-30.(1998)*

  1998年 [査読無し][通常論文]
  
• 自動注入器を用いた唾液腺造影法

  大森 桂一, 澤村 強, 小日向 謙一, 金子 正範, 安田 元昭, 中村 太保, 福田 博 歯科放射線 37 74 -74 1997年09月10日
• Reduction of radiation-induced xerostomia in nasopharyngeal carcinoma using CT simulation with laser patient marking and three-field irradiation technique

  T Nishioka, H Shirato, T Arimoto, M Kaneko, T Kitahara, K Oomori, M Yasuda, S Fukuda, Y Inuyama, K Miyasaka INTERNATIONAL JOURNAL OF RADIATION ONCOLOGY BIOLOGY PHYSICS 38 (4) 705 -712 1997年07月 [査読無し][通常論文]
   

  Purpose: Tumor control and reduction of postirradiation xerostomia in patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC) using the three-field irradiation technique based on the CT-based simulation with laser patient marking was investigated. Methods and Materials: Seventy-eight patients with NPC were consecutively treated between 1983 and 1993. In 33 patients treated before 1987, target volume was determined using a conventional x-ray simulator with a reference of CT images, and the primary site was treated by the conventional parallel-opposed two-held technique (Group I). In 45 patients treated from 1987, target volume was determined using a CT simulator slice by slice, the treatment field was projected onto the patient's skin by a laser beam projector mounted on a C-arm, and the primary site was irradiated by a three-fields (anterior and bilateral) technique (Group II). In Group II, the shape of each field was determined using a beam's eye view to reduce the dose to the bilateral parotid glands. The three-field technique reduced the dose to the superficial lobe of parotid gland to about two-thirds of the dose given by the two-field technique. Radiation-induced xerostomia was evaluated by clinical symptoms and radioisotope sialography. Results: The 5-year survival rate and disease-free survival rate were 46.6 and 31.2% in Group I, and 46.8 and 46.5% in Group II, A large variation in the volume of parotid glands were demonstrated, ranging from 9 cm(3) to 61 cm(3) among patients treated with CT simulation. Forty percent of the patients in Group II showed no or mild xerostomia, whereas all of the patients in Group I showed moderate to severe xerostomia (p < 0.01). The radioisotope sialography study showed that the mean secretion ratio by acid stimulation was improved from 3.8% in the Group I to 15.2% in the Group II (p < 0.01). Conclusions: CT simulation was useful to determine the size and shape of each field to reduce the dose to the parotid gland, of which size varies largely among individual patients. The three-field technique based on CT simulation with laser patient markings is suggested to result in superior complication-free survival in terms of salivary dysfunction than did the conventional two-field technique with x-ray simulatior for NPC. (C) 1997 Elsevier Science Inc.
• Hida K, Shindoh M, Yasuda M, Hanzawa M, Funaoka K, Kohgo T, Amemiya A, Totsuka Y, Yoshida K, Fujinaga K. :"Antisense E1AF transfection restrains oral cancer invasion by reducing matrix metalloproteinase activities."Am J Pathol. 150(6):2125-21323.(1997)*

  1997年 [査読無し][通常論文]
  
• Nishioka T, Shirato H, Arimoto T, Kaneko M, Kitahara T, Oomori K, Yasuda M, Fukuda S, Inuyama Y, Miyasaka K. "Reduction of radiation-induced xerostomia in nasopharyngeal carcinoma using CT simulation with laser patient marking and three-field irradiati・・・

  1997年 [査読無し][通常論文]
   

  Nishioka T, Shirato H, Arimoto T, Kaneko M, Kitahara T, Oomori K, Yasuda M, Fukuda S, Inuyama Y, Miyasaka K. "Reduction of radiation-induced xerostomia in nasopharyngeal carcinoma using CT simulation with laser patient marking and three-field irradiation technique." Int J Radiat Oncol Biol Phys. 38(4):705-12. (1997)*
• 頸部リンパ節の超音波診断 : リンパ節短軸の定義

  佐藤 隆文, 安田 元昭, 中村 太保 歯科放射線 36 55 -55 1996年09月01日
• 口腔扁平上皮癌細胞のCDDP感受性とその遺伝子発現変化

  山野 茂, 安田 元昭, 中村 太保 歯科放射線 36 31 -31 1996年09月01日
• 口腔扁平上皮癌細胞の浸潤能とマトリックスメタロプロテイナーゼの発現

  安田 元昭, 山野 茂, 中村 太保 歯科放射線 36 32 -32 1996年09月01日
• Chiba I, Shindoh M, Yasuda M, Yamazaki Y, Amemiya A, Sato Y, Fujinaga K, Notani K, Fukuda H.: "Mutations in the p53 gene and human papillomavirus infection as significant prognostic factors in squamous cell carcinomas of the oral cavity." Oncogene. 12・・・

  Chiba, I, M Shindoh, M Yasuda, Y Yamazaki, A Amemiya, Y Sato, K Fujinaga, K Notani, H Fukuda ONCOGENE 12 (8) 1663 -1668 1996年04月 [査読無し][通常論文]
   

  Chiba I, Shindoh M, Yasuda M, Yamazaki Y, Amemiya A, Sato Y, Fujinaga K, Notani K, Fukuda H.: "Mutations in the p53 gene and human papillomavirus infection as significant prognostic factors in squamous cell carcinomas of the oral cavity." Oncogene. 12(8): 1663-1668 (1996)*
• Detection of dna fragmentation in γ -irradiated rat tongue epithelium

  Motoaki Yasuda, Takeshi Nishioka, Hiroki Shirato, Motoyasu Nakamura Journal of JASTRO 8 (1) 63 -66 1996年01月01日 [査読無し][通常論文]
   

  Apoptosis is the predominant form of cell death and occurs under variety of physiological and pathological conditions. In the present study, we detected the apoptotic cells and S phase cells in rat tongue epithelium in both normal and irradiated conditions. After 24 hours from irradiation, cell cycle arrest was obvious and the number of apoptotic cell reached the maximum level; however there was no detectable DNA fragmentation in basal cells. © 1996, Japanese Society for Therapeutic Radiology and Oncology. All rights reserved.
• Yasuda M., et al., : "Detection of DNA Fragmentation in gamma-irradiated Rat Tongue Epitherium" J. Jpn. Soc. Ther. Radiol. Oncol. 63-66(1996)*

  1996年 [査読無し][通常論文]
  
• 形態・機能温存と放射線治療

  白土 博樹, 橋本 井子, 西岡 健, 安田 元昭 頭頚部腫瘍 21 (3) 576 -580 1995年11月01日
• 舌照射症例の酸味の認知閾値

  金子 正範, 安田 元昭, 大森 桂一, 中村 太保, 西岡 健, 北原 利博, 白土 博樹, 宮坂 和男 日本放射線腫瘍学会誌学術大会報文集 17 (1) 116 -116 1995年10月01日
• 形態・機能温存と放射線治療

  白土 博樹, 橋本 井子, 安田 元昭 頭頚部腫瘍 21 (2) 287 -287 1995年05月12日
• Simultaneous carboplatin and radiotherapy for all stages of head and neck squamous cell carcinoma

  Y. Hosokawa, T. Kamada, H. Shirato, K. Ohmori, M. Yasuda, H. Yahata, T. Nishioka, T. Kitahara, T. Arimoto, Y. Inuyama Clinical Oncology 7 (3) 168 -172 1995年 [査読無し][通常論文]
   

  The study investigated the toxicity and efficiency of the concomitant administration of radiotherapy and carboplatin to patients with head and neck carcinomas. Sixty-three patients with head and neck squamous cell carcinomas, other than nasopharyngeal cancer and Stage I (UICC) larygneal cancers, were treated by external radiotherapy and four courses of carboplatin at a dose of 100 mg/m2 per week. In two patients, only three courses were possible due to renal toxicity. In the other 61 patients, toxicities were self-limiting and no patient required interruption of carboplatin administration. No patient required discontinuation of radiotherapy because of acute toxicity. Of 61 evaluable patients, a complete response (CR) was obtained in 11.5% and a partial response (PR) in 60.7% at 40 Gy. In 41 patients treated to 65 Gy (including two patients with maxillary sinus carcinoma, who were treated by debulking surgery), CR was obtained in 76.9% and CR + PR was 100% at the end of treatment. The actuarial survival rate of the 63 patients at 2 years was 69.2%, with a median follow-up period of 24.4 months. One of 12 patients who received salvage surgery after radical radiotherapy has died due to poor wound healing after the surgery. The schedule was safe, providing a weekly check of serum samples was possible. It is likely that the rate of local control and vocal cord preservation in laryngeal tumours might improve if concurrent carboplatin is used. Careful follow-up is required to determine the long-term effect of concomitant carboplatin administration. © 1995 The Royal College of Radiologists.
• Prognostic Significance of the PCNA Labeling Index in the Radiotherapy of Oropharyngeal Carcinoma

  Takuro Arimoto, Motoaki Yasuda, Takayuki Nojima, K. Ukraperuvaluthi-Pillai, Tadashi Kamada, Hiroki Shirato, Akio Takamura The Journal of JASTRO 7 (4) 321 -329 1995年01月01日 [査読無し][通常論文]
   

  Prognostic significance of the proliferating cell nuclear antigen (PCNA; cyclin) labeling index and the DNA ploidy pattern in the radiotherapeutic treatment of the oropharyngeal carcinoma were analyzed retrospectively. Paraffin-embedded specimen of 26 patients were utilized for analysis from 77 patients who were treated by radiotherapy (RT) at Hokkaido University Hospital between 1983 and 1991. Twenty-six specimens were selected mainly because of the availability of specimen and thorough clinical information about local tumor outcome. Significance of “classical” clinical parameters, such as the size of primary tumor, stage of disease, the sub-site of the primary tumor origin, pathological subclassification, and the age of patient, was analyzed first in all the 77 patients. The predictive value of PCNA labeling index and the DNA ploidy pattern in relation to these parameters were then investigated in 26 patients to clarify the potentials of both parameters as a new prognosticator. Only the primary tumor size (T1-3 vs. T4), and the site of primary disease (primaries of the ant. faucial pillar, tonsillar fossa and the soft palate did better than the other site; base of tongue, posterior wall, and the valecullar origin) were the “classical” factors significantly influencing local tumor control (p < 0.05). PCNA labeling index had no definite correlation with these “classical” prognostic factors, but it was found to influence three-year local tumor control with the statistically significant level. In those whose PCNA labeling index were below 30%, all (15/15) were controlled locally for more than three years, whereas 6 out of 11 tumors relapsed locally when the PCNA labeling index exceeded 30% (p < 0.05). The tendency did not change even after patients were stratified by tumor size. DNA diploidy was closely related to the PCNA labeling index of less than 30%, and there was a tendency to influence the local tumor control favorably (0.05 < p < 0.1), but less significantly. © 1995, Japanese Society for Therapeutic Radiology and Oncology. All rights reserved.
• Hosokawa Y, Kamada T, Shirato H, Ohmori K, Yasuda M, Yahata H, Nishioka T, Kitahara T, Arimoto T, Inuyama Y. : "Simultaneous carboplatin and radiotherapy for all stages of head and neck squamous cell carcinoma." Clin Oncol (R Coll Radiol). 7(3):168-72.・・・

  1995年 [査読無し][通常論文]
   

  Hosokawa Y, Kamada T, Shirato H, Ohmori K, Yasuda M, Yahata H, Nishioka T, Kitahara T, Arimoto T, Inuyama Y. : "Simultaneous carboplatin and radiotherapy for all stages of head and neck squamous cell carcinoma." Clin Oncol (R Coll Radiol). 7(3):168-72.(1995)*
• Yasuda M., et al. :"Human Papillomavirus Genome in Oral Carcinoma and Their Metastatic Cervical Lymph Node Tissues" Tumor Res. 29:29-37(1994)*

  Yasuda Motoaki, Shindoh Masanobu, Kohgo Takao, Amemiya Akira, Sawada Yukiharu, Fujinaga Kei Tumor Research 29 29 -37 1994年 [査読無し][通常論文]
   

  Twenty cases of oral squamous cell carcinoma (SCC) with cervical lymph node metastasis were investigated. Both primary lesions and metastatic lymph nodes were analyzed for the involvement of human papillomavirus (HPV) DNAs utilizing the polymerase chain reaction (PCR) method and dot blot hybridization. HPV DNAs were detected in five cases. Four primary lesions contained HPV-16 DNA, and one contained both HPV-16 and HPV-18 DNAs out of 20 cases examined. No HPV DNAs were detected in metastatic lymph node tissues in cases where HPV DNAs could not be detected in primary cancer tissues. The same types of HPV DNAs as those found in primary lesions were detected in metastatic lymph nodes including those with HPV-16 and HPV-18.
• Takinami S, Kaga M, Yahata H, Kure A, Oguchi H, Yasuda M. :"Radiation-induced hypoplasia of the teeth and mandible. A case report." Oral Surg Oral Med Oral Pathol. Sep;78(3):382-4. (1994 )*

  1994年 [査読無し][通常論文]
  

所属学協会

• 北海道大学歯学会   日本分子生物学会   日本生化学会   日本細菌学会北海道支部   日本癌学会   日本ウイルス学会   

共同研究・競争的資金等の研究課題

• 口腔がんに対する腫瘍免疫を惹起できる腫瘍溶解ウイルスの開発

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(C)

  研究期間 : 2022年04月 -2025年03月 

  代表者 : 東野 史裕, 安田 元昭
• 難治性口腔がんに有効な腫瘍溶解ウイルスの開発

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(C)

  研究期間 : 2021年04月 -2024年03月 

  代表者 : 安田 元昭, 東野 史裕

   

  令和3年度は主に2つの実験を行い以下の結果を得ることができた。①ヒト5型アデノウイルスのE4領域に任意の遺伝子配列を挿入することが可能か否かを判定するために、E4領域約3500塩基対の配列のうちorf6、orf6/7領域をルシフェラーゼ遺伝子に改変したプラスミドを構築し、その発現をルシフェラーゼアッセイにて解析した。この実験により、orf6の開始コドンを保存することにより、E4orf1-orf4の転写・翻訳を損なうことなく候補遺伝子を組み込むことが可能であることが確認された。またこの転写・翻訳反応は細胞内でE1Aの発現がなくても進行することが明らかとなった。②オートファジー関連タンパク質どうしの結合性をmammalian two hybrid法にて解析した結果、BNIP1およびBNIP3に存在するLIR( LC3 interacting region)を介したLC3AおよびLC3Bとの直接的な結合を確認できた。一方、BNIP1およびBNIP3とSQSTM1/p62の結合性に関しては、BNIP1-SQSTM1/p62の組み合わせにおいてのみ有意な結合性が認められ、この結合の一部にはBH3ドメインの関与の可能性が示唆された。仮にアデノウイルスの構造タンパク質の一部（Hexon、Fiberなど）がBNIP1、BNIP3およびSQSTM1/p62と結合することによって選択的にオートファジーによる排除を受けているのであれば、E1B19Kなどのタンパク質による抗オートファジー効果は、宿主細胞のウイルス排除機構の不活化に対して大きな役割を果たしていると考えられた。
• 口腔がん幹細胞を標的とした腫瘍溶解ウイルスの作製

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(C)

  研究期間 : 2018年04月 -2021年03月 

  代表者 : 安田 元昭, 東野 史裕

   

  tripartite leader配列は後期タンパク質の優先的な翻訳に必須である。ルシフェラーゼの上流にtripartite leader配列を付与したプラスミドを導入した細胞ではコントロールプラスミドを導入した細胞に比較して10倍のルシフェラーゼ活性が認められた。これらプラスミドと同時にアデノウイルスE4 領域および一部を欠損させたミュータントを導入した結果、E4全域の共発現ではルシフェラーゼ活性は2倍以上になり、E4のうちE4 orf4がこの活性化に必須であることがわかった。E4 orf4と宿主由来OMB1の複合体は翻訳機構の調節に関与していることが予想された。
• ＲＮＡ安定化機構を応用した腫瘍溶解ウイルスの口腔がんへの応用

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(B)

  研究期間 : 2017年04月 -2020年03月 

  代表者 : 東野 史裕, 北村 哲也, 松田 彩, 安田 元昭

   

  本研究では、新たに開発した腫瘍溶解アデノウイルスAd+AUの効果を検討した。Ad+AUは正常細胞に比べてがん細胞の方が効率よく複製し、さらに細胞死が誘導された。また、Ad+AUは臨床応用されているウイルスONYX-015よりも有効な腫瘍溶解ウイルスであることが示唆できた。Ad+AUの効果を動物を用いて検討した結果、Ad+AUは担癌モデルでも腫瘍溶解効果があることを解明した。さらに、抗がん剤とAd+AUとの併用効果を検討し、パクリタキセルなどと併用した場合、Ad+AUの抗がん活性が増強した。以上の結果より、Ad+AUは有用な腫瘍溶解ウイルスであることが明かになった。
• 口腔がん幹細胞を制御する網羅的遺伝子発現調節機構の解明

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(C)

  研究期間 : 2015年04月 -2018年03月 

  代表者 : 安田 元昭, 東野 史裕

   

  HuRはARE mRNAを特異的に安定化させ、その発現が腫瘍の悪性度と相関することが報告されている。網羅的遺伝子検索の結果からHuRの活性化因子候補と考えられたHuBに注目し、口腔扁平上皮がんの分化度との関連性を検討した。低分化型口腔扁平上皮がん細胞株SASのHuB mRNA発現量は高分化型口腔扁平上皮がん細胞株HSC2に比較して圧倒的に高いことが示された。HSC2にHuBを導入したHSC2-HuBでは、HuBがHuRを核外輸送していることが確認された。また、ヌードマウスへの移植実験により、HSC2-HuBでは、親株に比較して、角化傾向が抑制されていることが明らかとなった。
• ウイルスを利用した腫瘍検出センサーの開発

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 挑戦的萌芽研究

  研究期間 : 2013年04月 -2015年03月 

  代表者 : 東野 史裕, 戸塚 靖則, 北村 哲也, 進藤 正信, 安田 元昭

   

  本研究では、我々が開発した腫瘍溶解アデノウイルス（AdΔE4）を応用して、がん細胞のみが発行し、蛍光を照射するとがんを可視化できるシステムを構築することを目的とした。当初、ウイルスのゲノム中に緑色蛍光タンパク（GFP）遺伝子を組み込んだウイルスを作成することを目的としたが、GFPの発現アデノウイルスとAdΔE4を同時に感染させる手法も効率的であることを見出し検討した。その結果、両ウイルスを感染させたがん細胞は特異的に発光し、正常細胞では発光が弱かった。これらの結果より、AdΔE4とGFP発現アデノウイルスを共感染することにより腫瘍センサーとして機能することが明らかになった。
• がん細胞は自身の生存をかけ放射線域を逃れるべく上皮間葉移行をなしうるか

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(B)

  研究期間 : 2012年04月 -2015年03月 

  代表者 : 西岡 健, 芳賀 永, 安田 元昭, 武島 嗣英

   

  今年度の実験において我々は5'UTRおよび3'UTR依存性発現調節の候補遺伝子の機能解析を行った。5'UTR結合タンパク質に関してはSRSFファミリーが有望であると考えられた。これらタンパク質はHIF-laあるいはcMYCの5'UTRを挿入したルシフェラーゼリポーターからのタンパク質発現を数倍に活性化することができた。これら候補遺伝子の発現を、マイクロアレイにて比較したところ、予想通り高転移性株では発現が高い傾向が認められた。これらの発現が遺伝子プロモーター領域の配列の違いによるものか否かを判断するため、アレイ解析に用いた細胞のゲノムDNAを出発材料にしてプロモーター領域のシークエンスを行ったところ顕著な塩基置換は認められず、メチル化などのエピジェネティックな変化の解析が今後の課題として提起された。3'UTR依存性発現調節の候補遺伝子としてELAVLファミリータンパク質の1つであるELAVL2の機能解析を行った。ELAVL1はほぼ全ての細胞において多量に発現し主に核局在を示すが、ELAVL2は主に細胞質に局在する。ELAVL2導入細胞株ではELAVL1を導入した細胞よりも、ARE mRNA由来のタンパク質発現レベルが有意に上昇していた。蛍光タンパク質タグを付与したHuRを単独で強制発現させてもELAVL1は核局在を示したが、ELAVL1とELAVL2を同時に発現させた細胞では細胞質局在するELAVL1が認められた。two-hybrid法にて、ELAVL1どうしの結合よりELAVL1-ELAVL2間のほうがより強い結合であることが示された。この結合にはELAVL2のN末端、C末端領域が必要であった。ELAVL1の核から細胞質への局在変化にはELAVL2が大きく関わっていること、ELAVL2の発現量はがん細胞の悪性度と相関することが示唆された。これまで3'UTR依存性の翻訳抑制機構を担うと報告されてきたELAVL1はむしろHIF-1αの翻訳効率を低下させることが示され、従来考えられてきた調節機構はより複雑なものであることが示唆された。
• 咬合に起因する微小動揺によるオッセオインテグレーション阻害メカニズムの解明

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 挑戦的萌芽研究

  研究期間 : 2011年04月 -2015年03月 

  代表者 : 横山 敦郎, 安田 元昭, 山本 悟, 網塚 憲生

   

  咬合に起因する微小動揺がオッセオインテグレーションに与える影響を明らかにすることを目的に、ラット上顎臼歯を抜歯後、チタンスクリューを即時埋入し、1週間後に咬合接触を付与し、咬合接触を与えないラットを対照群とし、組織化学的検索を行うとともに、マイクロアレイを用いて遺伝子発現の比較を行った。咬合接触を付与したラットにおいてはスクリュースレッド間の骨梁幅は有意に太くなり、スクレロスチン陽性骨細胞率は低下していた。遺伝子発現については、骨形成やBMP調整に関与する遺伝子が発現していた。これらの結果から、抜歯後即時埋入早期に与える適度の咬合負荷は、オッセオインテグレーションを早めることが示唆された。
• 新しい腫瘍溶解アデノウイルスの開発

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 挑戦的萌芽研究

  研究期間 : 2011年04月 -2014年03月 

  代表者 : 東野 史裕, 進藤 正信, 戸塚 靖則, 北村 哲也, 安田 元昭

   

  本研究では、腫瘍細胞で増殖し、正常細胞ではほとんど増殖しない腫瘍溶解アデノウイルスの開発を試みた。我々は、アデノウイルスの特定のタンパクを欠損したアデノウイルス（AdΔ4）が、がん細胞では増殖でき、正常細胞では増殖できないことを解明した。さらに、AdΔ4はがん細胞で強く細胞死を誘導し、ヌードマウスに作成した腫瘍にも効果を持つことがわかった。これらの結果は、AdΔ4が腫瘍溶解ウイルスとして利用できることを示している。
• 高機能化カーボンナノ物質修飾3次元スキャホールドを用いた顎骨組織の再建

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(B)

  研究期間 : 2010年 -2012年 

  代表者 : 横山 敦郎, 赤坂 司, 山本 悟, 滝田 裕子, 佐藤 義倫, 安田 元昭, 芝 清隆, 湯田坂 雅子

   

  b-FGFを共有結合させることにより高機能化した多層カーボンナノチューブおよびスタチンを空間内に担持することにより高機能化したカーボンナノホーンを開発し、動物実験にてその骨形成を検討した。高機能化したカーボンナノマテリアルを用いることにより、通常のカーボンナノマテリアルに比較してより多くの骨形成が観察された。またカーボンナノマテリアルの生体内における長期的な経過についても動物実験によりその生体適合性を確認した。
• 口腔自然免疫応答と口腔発がんのクロストーク

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(C)

  研究期間 : 2010年 -2012年 

  代表者 : 安田 元昭, 東野 史裕

   

  ヒト遺伝子発現において,3'UTR中にAUUUA配列を有するいわゆるARE-mRNAはRNAの半減期が厳密に制御されていることが知られている。我々は種々のARE-mRNAの中でHIF-1αの3'UTRが、他のc-myc,c-fosなどのARE-mRNAとは異なった制御を受けている可能性を見出した。同じ乳がん細胞株でもMCF7に比較して悪性度が高いとされるMDA-MB-453では特にHIF-1αの3'UTRを介したRNA安定化が亢進しており、これには悪性度と相関していると考えられた。また、一部の口腔がん細胞においても同様の現象が確認された。HIF-1αのmRNAが安定化し、タンパク質発現が亢進することにより血管誘導・浸潤能亢進・上皮間葉移行などの悪性化につながるシグナル伝達が正に制御されていることが示唆された。
• ビスホスホネートによる顎骨壊死発症機構に対する免疫学的アプローチ

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(C)

  研究期間 : 2009年 -2011年 

  代表者 : 出山 義昭, 戸塚 靖則, 安田 元昭, 飯塚 正, 吉村 善隆

   

  ビスホスホネートによる顎骨壊死発症機構の一端を明らかにするために、ビスホスホネートの破骨細胞やその前駆細胞であるマクロファージに対する作用について検討した。その結果、顎骨壊死発症が報告されているタイプのビスホスホネートは破骨細胞の分化ならびに骨吸収活性を強力に抑制するが、一方ではマクロファージの細胞死を誘導するとともに感染による細胞障害に対しても促進的に作用することが明らかにされた。
• 放射線照射を生き延びた癌細胞に秘められた謎:癌根絶への多角的アプローチ

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(B)

  研究期間 : 2008年 -2010年 

  代表者 : 西岡 健, 安田 元昭, 芳賀 永, 堤香 織, 酒井 正春, 本間 明宏

   

  放射線後生き残った細胞(以下IRとをす)の遺伝子発現をcDNAアレイにより調べた。マウス線維肉腫細胞のセルラインQRsPを使用し10Gyの照射を施行した。コロニーアッセイとともに6つのクローンの樹立が行われた。照射を生き延びた細胞では、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤(CKI)、p16 p57 の著明な発現低下;14.8および12.0の低下、また耐性クローン(IR)をマウスに移植したところ移植比100%がえられた。この細胞株にCD34がふくまれていることをかんがみると、がん幹細胞が放射線耐性に含まれていた可能性がある。
• カーボンナノチューブを三次元スキャホールド及び表面修飾として用いた口腔組織の再建

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(B)

  研究期間 : 2007年 -2009年 

  代表者 : 横山 敦郎, 赤坂 司, 佐藤 義倫, 山本 悟, 安田 元昭, 東野 史裕, 進藤 正信

   

  カーボンナノチューブ(CNTs)を用いた顎骨再建を目的として、本研究ではハニカム構造を持つコラーゲンスポンジ表面にCNTsをコーティングし、細胞培養用三次元スキャホールドを開発した。CNTsコーティングにより、骨芽細胞のスキャホールドへの初期接着は促進され、特にスキャホールド深部での細胞の接着、伸展に有効であることが示された。また、CNTsコーティングスキャホールドを骨内に埋入したところ、良好な骨伝導性が認められたことから顎骨再生への応用の可能性が示唆された。
• 放射線治療中に生ずる高度増殖浸潤能クローンの封じ込め

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(B)

  研究期間 : 2006年 -2007年 

  代表者 : 西岡 健, 安田 元昭, 芳賀 永, 本間 明宏, 堤 香織

   

  マウス繊維芽肉腫細胞株QR s P細胞に10Gyの放射線照射を施行し、生存したコロニーから24株をクローニングした。これらに対しさらに10Gy照射したところコロニーの出現のしかたはまちまちであり、母集団の中には放射線高感受性のものもあれば抵抗性のものもあることが判明した。このうち最も抵抗性の株(10-1IRと命名)と最も高感受性の株10-5IRについて様々な角度から相違点を見つけ出した。まず親株との間でそれぞれc DNAアレイを行った。またIR群それぞれをC57BL/6マウスに細胞移植を行ったところ造腫瘍能には変わりがないことが判明した。この腫瘍から細胞株を再び作成し親株との間で2回目のc DNAアレイを施行した。この計4回のアレイデータから、それぞれ親株と似ているもの、異なるものを抽出し、さらにそれらの遺伝子群について10-1IRと10-5IRの間で異なる遺伝子を70個検出した。このなかには転写因子であるATF5が存在した。放射線照射をmimicするためp53を強制導入して親株と10-5IRの細胞死分画をフローサイトメーターみたところ、親株で7%、10-5IRで25%と明らかに10-5IR細胞においてp53によるアポトーシスが多く見られた。次にATF5を10-5IRに強制導入しコロニーアッセイによる10Gy照射後の生存コロニー数、フローサイトメーターによるアポトーシスの文画を調べたところいずれも、放射線に対する耐性を獲得した。次にATF5とp53を共導入しp53のレポーターアッセイをおこなったところp53の転写活性が有意に低下していることが観察された。以上の結果からATF5はなんらかの機構を介してp53に対し抑制的に働く遺伝子であることが判明した。
• 口腔領域におけるウイルス感染と細菌感染のクロストーク

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(C)

  研究期間 : 2006年 -2007年 

  代表者 : 安田 元昭, 柴田 健一郎

   

  ヒトアデノウイルスの自然免疫機構による認識においてTLR2が必須であることが確認された。 TLR2を発現させた293細胞は5型アデノウイルス(dl309)およびE1領域をβ-ガラクトシダーゼに置換したリコンビナントウイルス(Ad-βgal)を効率よく認識し、細胞内でNF-kBの活性化が認められた。しかしながら、Ad-βgalでは感染16時間後にも顕著なNF-kBの活性化が認められたが、dl309ではアデノウイルス自身の感染が誘導するNF-kBの活性化は著しく抑制されていた。われわれはアデノウイルスE1領域にNF-kB抑制活性があると考え各初期タンパク質の導入を行った。E1遺伝子のうちE1Aはこのルシフェラーゼ活性をほぼ完全に抑制したが、他の初期遺伝子E1B55Kにはこのような効果は認められなかった。E1Aの削除ミュータントを用いた解析により、E1AのCR3domainはこの抑制活性には不要であること、また N末端25アミノ酸あるいはRbとの結合に必須であるCR1、CR2がこの抑制活性にとって重要であることが明らかとなった。この結果は、E1Aがp300との結合のみでなく、RBとの結合により宿主細胞のTLR2下流のシグナル伝達を阻害している可能性を示唆するものである。さらに我々は、E1AとRbの結合によって遊離するE2Fタンパク質がNF-kBと直接結合することを見出した。 TLR2は主に細菌感染を認識する自然免疫受容体であり、ヒトアデノウイルスによるTLR2依存的な宿主自然免疫応答の攪乱は宿主細胞の細菌感染認識をも抑制し、時に重篤な細菌感染症の形成に関与することが予想される。
• 口腔微生物貪食におけるToll様受容体の役割

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(B)

  研究期間 : 2005年 -2006年 

  代表者 : 柴田 健一郎, 黒木 由夫, 安田 元昭

   

  Toll-like receptor(TLR)は貧食細胞等に発現し、微生物の侵入を感知するセンサーとして注目されているが、微生物の貧食における役割については不明な点が多く残されている。本研究の目的は微生物の排除におけるTLRの役割を明らかにする事である。 ヒト単球系細胞株であるTRP-1細胞をジアシルリポペプチドFSL-1で処理した後、FITC標識E.coli(Ec)とS.aureus(Sa)を貧食させた。FSL-1刺激により、グラム陰性菌であるEcよりもグラム陽性菌であるSaの貧食が強く増強されたが、ラテックスビーズの貧食は増強されなかった。このFSL-1の貧食促進活性はp38、PI3-キナーゼ及びアクチン重合のインヒビターであるSB203580、wortmannin及びcytochalasin-D処理で減弱した。また、FSL-1刺激によりTHP-1細胞ではp38とPI3-キナーゼが活性化し、さらに細胞表面におけるTLR2の発現が増加した。TLR2^<+/+>とTLR2^<-/->マウスの腹腔浸出細胞による細菌貧食を調べたところ、FSL-1刺激により細胞内に取込まれている細菌の数が、TLR2^<+/+>では顕著に増加したが、TLR2^<-/-では増強しなかった。以上の結果から、まず、TLR2そのものが貧食受容体として機能している可能性を考えた。そこで、TLR2を安定して発現しているchinese hamster ovary(CHO)細胞を樹立し、細菌貧食を調べたが、この細胞はこれらの細菌を貧食しなかった。一方、貧食受容体として知られているCD14を発現しているCHO細胞では明らかな細菌貧食の亢進がみられた。FSL-1刺激により、TRP-1細胞ではCD36,MSR1,Dectin-1,DC-SIGN等の貧食受容体のmRNAの発現が増強された。さらに、MSR1ならびにDC-SIGNを遺伝子導入したHEK293細胞は貧食能を示した。 さらに、TLR2を発現したHEK293細胞にDC-SIGNを導入するとTLR2によるリガンド認識が増強されること、TLR2によるリガンド認識がCD14により増強されること、TLR2リガンドであるFSL-1がin vivoにおいてTh2応答を増強すること等を明らかにした。
• カーボンナノチューブをスキャホールドとして用いた顎骨再生療法の開発

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(B)

  研究期間 : 2004年 -2006年 

  代表者 : 横山 敦郎, 安田 元昭, 赤坂 司, 進藤 正信, 堀内 留美

   

  本研究においては,カーボンナノチューブ(CNTs)を用いて顎骨再生を図ることを目的とし,CNTsの生体適合性の解明,CNTsを用いた骨芽細胞培養用スキャホールドの作製と細胞培養,および骨補填材としてのCNTs固化体の生体適合性の検討を行った. CNTsをラット皮下組織に埋入し,2年間経時的に組織学的,超微細構造学的に検索した.埋入初期では,周囲に肉芽組織が観察され,一部のCNTsはマクロファージに貪食されており,2年後においては軽度の肉芽腫性炎が認められた.透過型電子顕微鏡による観察では,埋入初期においては細胞内でCNTsの強い凝集が認められたが,経時的に凝集は弱くなる傾向を示した.また,CNTsの特有なチューブ状の構造には,ほとんど変化が認められなかった.これらの結果から,CNTsの起炎性は低く,生体内で安定であることが明らかとなった. CNTsを脱イオン水に分散し,ポリカーボネート膜(PC膜)で吸引ろ過することにより,細胞培養用のスキャホールドを作製した.このスキャホールド上で骨芽細胞様細胞を培養すると,細胞の形態は扁平であり,増殖はPC膜より速く,アルカリフォスファターゼ活性も高い結果が得られた.このスキャホールドをGBR膜として,ラット頭頂骨に作製した骨欠損部に応用すると,コントロールであるPC膜に比較し,骨修復は速い傾向を示した. CNTsをプラズマ放電焼結法により作製したCNTs固化体は,骨に近似した機械的性質を有しており,皮下組織および大腿骨に埋入したところ,優れた生体適合性を示し,骨補填材としての可能性が示された. 以上の結果から,CNTsを用いた顎骨再生療法の可能性が示唆された.
• 放射線治療中の癌細胞"再増殖"に関する遺伝子蛋白発現の解明および分子画像

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 基盤研究(B)

  研究期間 : 2004年 -2005年 

  代表者 : 西岡 健, 安田 元昭, 本間 明宏, 中駄 邦博

   

  マウス肉腫細胞QRsPを用い、放射線照射により誘発されるがん細胞"再増殖(repopulation)"という現象が、放射線耐性株の出現にあることをin vitroの実験系で明らかにした。耐性株(QRsPIR)のmRNA発現を網羅的に検索したところ、親株と比較して、matrix metalloproteinase(MMP)13が26倍、MMP3が22倍、の発現上昇を認め、またCDK inhibitorであるP16およびP57がそれぞれ1/15,1/12に発現が低下をしていた。同時にクローニングした他の耐性株についても、MMP13、MMP3、P16、P57の発現はそれぞれ4.0倍、6.4倍、1/11、1/7.6とほぼ同様の結果がえられこれらの細胞株の強い増殖・浸潤能が示唆されるとともに、耐性株は元来親細胞株の中にヘテロに存在していたものがセレクションされた可能性が示唆された。さらにC57BL/6マウス(not node mouse)への移植実験によりQRsPIRが"がん幹細胞"の特徴(高い移植率と増殖能、自己再生能)を有していることが明らかになった。また、QRsPIRの腫瘍組織のarrayパターンとin vitroのデータを比較し、両者に共通する約80の遺伝子発現を認め、この中に固形癌の"がん幹細胞"のマーカー分子が潜んでいる可能性が高い。2つのヒト肺癌細胞株H1299(p53-/-)とA549(p53+/+)を用いた照射実験にても、照射に誘発された再増殖細胞は、放射線耐性となったQRsPIRに共通する遺伝子発現(MMP, integrin, rhoなど)を示し再増殖の背後に、種を越えた共通の遺伝子的背景があることが判明した。 この様に放射線照射中に出現する放射線耐性・高度増殖能をもった癌細胞に対しの戦略として癌栄養血管からの大量の抗癌剤注入と放射線治療との組み合わせが有効であることを臨床例で示した。また腫瘍の悪性度に応じた(cDNAアレイを用いた)オーダーメードの治療法の可能性を頭頚部原発悪性リンパ腫の治療の分析より示した。
• Toll様受容体による口腔微生物由来リポペプチド認識機構の解明

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 2003年 -2004年 

  代表者 : 柴田 健一郎, 黒木 由夫, 安田 元昭

   

  Toll-like receptor 2 (TLR2)は微生物由来リポタンパク質(LP)ならびにリポペプチドの認識において重要な役割を果たすことが明らかにされているが、その認識機構の詳細については不明な点が多い。本研究では、LP、リポペプチドならびにペプチドグリカン(PGN)のTLR2による認識機構について研究し、以下のことを明らかにした。 1.細菌由来トリアシルアシルリポペプチドとマイコプラズマ由来ジアシルリポペプチドのマクロファージ活性化能は後者の方が強いことがわかった。 2.マイコプラズマ由来ジアシルリポペプチドのリピドならびにペプチド部分の双方がTLR2の認識に関与している。 3.TLR2の第3番目ロイシンリッチリピート(LRR)に存在する107、112、115番目のロイシン残基はLP、FSL-1およびPGNの認識に関与している。 4.TLR2の細胞外ドメインには典型的な8個のLRRが存在するが、そのすべてにLP、FSL-1およびPGNの認識に関与するロイシン残基が少なくとも1個存在する。 5.LRRの高度に保存された領域はβ-シート構造をとっていると推測されているが、この領域以外に存在するロイシン残基のLP、FSL-1およびPGNの認識に関与する程度はβ-シート構造に存在するロイシン残基に比べて弱い。 6.TLR2ならびにTLR6を導入したHEK293細胞をLPで刺激するとアポトーシスが誘導され、本活性にはFADDならびにMyD88が関与している。
• 歯根膜再生・人工歯根膜開発を目的とした歯根膜幹細胞の分化における遺伝子発現の解明-DNAマイクロチップを用いた歯根膜幹細胞の遺伝子発現の検索-

  日本学術振興会：科学研究費助成事業 萌芽研究

  研究期間 : 2003年 -2004年 

  代表者 : 横山 敦郎, 安田 元昭

   

  本研究においては,歯根膜幹細胞の種々の細胞への分化に関する成長因子の同定および分化した細胞の遺伝子発現様式の差異を明らかにすることを目的に,以下の研究を行った. WKAウィスター系5週齢雄性ラットから,下顎切歯を抜去し,15%FBSおよび抗生剤を含むα-MEM中に静置し,2週後まで初代培養し,アウトグロースした細胞を歯根膜細胞として回収した.回収した細胞を,デキサメサゾン(Dex),アスコルビン酸(Asc),βグリセロフォスフェイト(βGP)を含む培地とこれらを含まないコントロールの培地の2種の培地で2週間培養し,骨関連タンパクであるオステオカルシンと歯根膜特有のタンパクであるXII型コラーゲンについてRT-PCRを行いmRNAの発現を検索した.XII型コラーゲンの発現は,コントロールとDexを含む培地の両者に同様に認められたが,オステオカルシンはDexを含む培地で著しく強く発現していた.この結果から,Dexで骨芽細胞に誘導される幹細胞が,採取された歯根膜細胞には含まれることが明らかとなった.この結果をもとに,Dexを含む培地,b-FGFを含む培地およびこれらを含まないコントロール培地の3種の培地で歯根膜細胞を3日培養した後,RNAを回収し,DNAマイクロチップで網羅的にmRNAの発現を解析した.その結果,mRNAの発現は,b-FGFを含む培地とコントロールの培地では,ほとんど差異が認められなかったが,Dexを含む培地とでは差異が認められた.この結果から,b-FGFは歯根膜幹細胞を分化させることなく増殖させ,またDexは,歯根膜幹細胞を骨芽細胞へ分化させることが示唆された.
• 骨芽細胞への分化で発現する遺伝子の導入細胞を用いた顎骨再生療法の開発

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 2002年 -2004年 

  代表者 : 川崎 貴生, 進藤 正信, 安田 元昭, 横山 敦郎, 山本 悟, 東野 史裕

   

  次年度である本年度は,ラット骨髄細胞のデキサメサゾンを用いた骨芽細胞への誘導およびDNAマイクロチップを用いてデキサメサゾン誘導の遺伝子発現に対する影響を経時的に検索するとともに,発現に差違が認められた遺伝子についてRT-PCRを用いて定量的に解析した. 生後8週齢のフィッシャー系雄性ラットを実験動物として用い,Maniatopolusの方法に準じて,大腿骨から骨髄細胞を採取し,初代培養後,ディッシュに付着した細胞を骨髄幹細胞として分離した.この細胞をデキサメサゾンを含む培地で誘導した場合と含まない培地を用いた場合に分け培養した.培養後2,5,14日後に細胞を回収し,RNAを抽出し,DNAマイクロチップにて遺伝子の発現を解析した.骨形成に関係するいくつかの遺伝子に発現の差違が認められ,これらについてさらにRT-PCRで経時的に,定量的に解析した.アルカリフォスファターゼについては,2,5日後については,差違が認められなかったが,7,14日後はデキサメサゾンを含まないほうが,有意に強い発現を示した.BMP2に付いては,同様に2,5日では差違が認められなかったが,7日後ではデキサメサゾンで誘導したほうが有意に強い発現を示し,14日後では同様の発現であった.同じファミリーであるBMP3は,2,5日後ではデキサメサゾンを含まないほうが強い発現を示したが,7,14日後ではデキサメサゾンて誘導したほうが,強い発現を示した.フォリスタチンは,デキサメサゾンで誘導した場合,2日後から5日後にかけて発現強度が1/2に減弱し,その後発現強度は増強した.以上の結果から,ラット骨髄細胞をデキサメサゾンで誘導した場合,5〜7日後に骨芽細胞への分化が生じている可能性が示唆された.
• 放射線照射により生じたアポトーシス細胞除去機構の検討

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 2002年 -2003年 

  代表者 : 安田 元昭, 東野 史裕, 進藤 正信

   

  1.QRSP細胞を用いた腫瘍移植 C57B/6マウス由来の線維肉腫細胞株QRSP細胞を入手し、実際にマウス背部に移植、腫瘍の定着性について解析を行った。予備実験としてC57B/6マウス10匹に対して1×10^5個のQRSP-11細胞を接種し経時的に観察した。接種後1週目から肉眼的に腫瘤の形成を認めた。腫瘤は急速な生育をみせ接種後10日前後からマウスは衰弱し始め14-20日後には腫瘍死した。組織学的には細胞質が豊富で核異型の強い腫瘍細胞が充実性に増殖していた。血管腔への浸潤も認められた。 2.放射線照射株QRSP-IR株の樹立 QRSP細胞に10Gyの放射線照射を行い、生存した細胞をクローニングし、単一細胞株を樹立した。親細胞株とQRSP-IRをそれぞれC57B/6マウス背部に1×10^4個接種したところ親株は40%の生着率であったが、QRSP-IR細胞では100%の生着率がみられた。放射線照射による細胞選択が宿主動物の細胞除去機構に対する抵抗性をもたらしたことが明らかとなった。 3.病理組織学的解析およびDNAアレイによる解析 親株および照射株の病理組織学的解析により、QRSP-IR腫瘍では明らかな分裂像の増加、局所浸潤性の亢進などがみられた。これらはサイクリンの発現量の増加、PCNAの発現増加などで説明されると考えられた。DNAアレイの解析によりQRSP-IRで発現が上昇した遺伝子は592遺伝子、減少した遺伝子は480遺伝子であった。照射細胞にて発現が減少した膜型タンパク質には、CD14やキラーセル受容体などが含まれており、これらの遺伝子発現の低下と腫瘍生着率の間に何らかの関連が予想された。Key moleculeの絞込みには、今回明らかとなった発言が低下する遺伝子のノックアウトによる解析が必要と考えられた。
• 口腔がんの予後を規定する因子の総合的解析-新しい悪性度分類の提案-

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 2002年 -2003年 

  代表者 : 進藤 正信, 大廣 洋一, 東野 史裕, 小林 正伸, 戸塚 靖則, 安田 元昭

   

  腫瘍の発生には細胞の不死化・細胞死の抑制が重要な役割を演じている。Ewing肉腫で高率に生じているEWS遺伝子とETSファミリー遺伝子の転座に着目し、EWS/ETSキメラ遺伝子産物の役割を検討したところ、EWS/ETSは細胞不死化に関与するテロメラーゼの触媒酵素hTERTを活性化したが、この際(本来転写因子だったEWS/ETSが転写のco-factorとして働くことが明らかになった。Adenovirusの新規がん遺伝子であるE4orf6はp53,p51,p73の全てのp53ファミリーの機能を抑制し、細胞がん化に働くことが示されているが、p53の欠損した細胞株にE4orf6を遺伝子導入した際にも細胞死の抑制が生じ、E4orf6はアポトーシス誘導因子であるBH3 only protein、BNIP3を直接ターゲットとしてその細胞内局在を変化させ、細胞死を抑制することが明らかになった。 がんの悪性度はがん細胞の浸潤・転移活性の有無によるところが大きい。我々はetsがん遺伝子群転写因子E1AFをクローニングし、E1AFがMMP-1,-3,-9の転写を亢進することで口腔がんの悪性度と関連していることを報告してきた。E1AFはMMP-9と同様のtypeIV collagenaseであるMMP-2の直接の転写亢進はしめさなかったが、今回の検索でMT1-MMPの転写を亢進することでMMP-2の活性化を導くことが明らかになった。口腔がんはリンパ行性に転移することが多く、リンパ管の増殖因子であるVEGF-Cの発現をreal-time RT-PCRで検索したところ、口腔がんでのVEGF-Cの発現と転移には有意の相関関係が認められた。 腫瘍組織は恒常的に低酸素状態に曝されているにも関わらず、細胞死は抑制され増殖を続ける。我々は、低酸素で誘導される転写因子HIF-1に着目し、口腔がんでの発現について検索した。その結果、HIF-1aを高発現している口腔がんでは転移形質を含めた悪性度が有意に高いことが示された。さらに、HIF-1aのdominant negative mutantを遺伝子導入することで膵臓がんでの腫瘍原性を抑制することを明らかにした。 このように、口腔がんでも腫瘍発生・悪性進展化に関与する遺伝子/遺伝子産物を検索することで、腫瘍のもつ形質を把握でき、さらにこれらをターゲットにした遺伝子治療も可能になるものと思われた。
• バングラディッシュにおける頬粘膜がんの分子疫学的解析

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 2001年 -2003年 

  代表者 : 安田 元昭, 東野 史裕, 進藤 正信, 千葉 逸朗

   

  1.HPVメンブレンアレイシステムの構築 各パピローマゲノムは相同性が高く、従来のハイブリダイゼーション法では各々のプローブが他の型のゲノム配列を認識してしまうことが多かった。今回試作したプロトタイプのアレイシステムでは6, 11, 16, 17, 18, 20, 21, 30, 31, 33, 34, 35, 39, 40, 42, 45, 47, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 58, 59, 61型のヒトパピローマウイルスゲノムをバックグラウンドなしに判別することが可能であった。 2.HPVメンブレンアレイの検出感度評価 細胞当り1ないし2コピーのHPV genomeが存在していることが報告されているSiHa細胞を出発材料としてシステムの感度の評価を行った。SiHa細胞では約100個の細胞が出発材料中に存在していれば、本メンブレンアレイにて検出できることが確認された。この結果は臨床材料を対象とした検索に十分使用可能であると考えられた。 3.HPVメンブレンアレイによる臨床材料の解析 すでにHPVにより発症していることが明らかとなっている、陰茎部のコンジローマ症例からgenomic DNAを抽出し、本システムによる解析を行った。従来のPCR法にてPCR陽性であった全ての症例でHPV genomeが検出された。さらに従来法では検出できなかった混合感染の検出を行うことができた。 4.バングラディッシュサンプルの解析 バングラディッシュ頬粘膜癌組織および正常粘膜、計63検体をコンセンサスPCR法あるいはDNAアレイ法にて解析した、全検体がHPV陰性であり、HPVとこれら発がん過程の因果関係は証明されなかった。
• 高齢者,有病者の鬆粗な顎骨へのデンタルインプラント適応の拡大をめざして -骨関連タンパク遺伝子導入細胞組込型デンタルインプラントの開発-

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 2001年 -2003年 

  代表者 : 横山 敦郎, 安田 元昭, 進藤 正信, 東野 史裕, 山本 玲子, 塙 隆夫, 川崎 貴生

   

  高齢者,有病者の鬆粗な顎骨へのデンタルインプラント適応の拡大を目的に研究を行い以下の成果を得た. チタンをはじめとするインプラント材料に骨芽細胞を速く強力に接着させるため,骨関連タンパクであるオステオポンチン,オステオネクチンの遺伝子を骨芽細胞様細胞であるSaos2に導入した.オステオポンチンを導入したSaos2-OPは,ポリスチレンに対する接着率,接着強度はコントロールであるSaos2より高かったが,オステオネクチンを導入したSaos2-ONの接着率および接着強度はSaos2に比較し,低い値を示した.チタンに対する接着率も同様であることから,オステオポンチンはインプラントへの骨芽細胞の接着を促進し,かつ強固にすることが示唆された. 有病者に対するインプラント適応拡大の対象として糖尿病を選択し,インプラントを埋入した後に糖尿病に罹患するモデルをラットを用いて他に先駆け作製した.大腿骨および上顎骨にチタン製のインプラント体を埋入し,4週後にストレプトゾトシンにて高血糖状態を誘発した.大腿骨においても,上顎骨においても,高血糖状態を4週継続した場合,インプラントと骨組織の接触率には変化が認められず,インプラントと骨組織の接触率には,糖尿病による高血糖状態は影響を及ぼさないことが示唆された. 骨形成能が低下している症例において,確実なインプラントと骨組織の結合を達成するため細胞を組み込んだインプラントを考案した.ラット骨髄幹細胞をデンタルインプラント上で培養し,骨芽細胞に分化させ,骨芽細胞を組み込んだインプラントを皮下組織に埋入し4週後に摘出した.インプラント周囲には骨組織が観察され,骨芽細胞組込型インプラントが骨形成能が低下している場合には有効であることが示唆された.
• 口腔扁平上皮がんのカスパーゼカスケード活性化によるアポトーシス誘導

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 2001年 -2002年 

  代表者 : 戸塚 靖則, 安田 元昭, 東野 史裕, 進藤 正信, 鄭 漢忠, 小林 正伸

   

  Caspaseの活性化機構の調節に重要な役割を演じているBcl-2ファミリーに属するBnip3はBH-3 only proteinの一つで、BH3ドメインと膜貫通(TM)ドメインを持ち、アポトーシスの誘導タンパクとして機能する。Bnip3とcaspaseの関係を明らかにすることを目的としてBnip3の膜貫通ドメインのアポトーシス誘導能における役割を検討した。 その結果、Bnip3とCED-3の単独遺伝子導入ではそれぞれ10%前後のアポトーシスが誘導された。両者の共導入では単独導入により誘導される細胞死の2倍以上のアポトーシスの誘導が認められ、相乗的なアポトーシスを誘導効果があることが示唆され、この過程にはBnip3はCED-3との結合とTMドメインによるCED-3のミトコンドリアヘの局在が必須であることが示唆された. このようなBnip3によるアポトーシスの誘導機構の詳細を知るために、アデノウイルスの新規ウイルスがん遺伝子E4orf6を用いて実験を行った。E4orf6はがん抑制遺伝子p53ファミリータンパクに結合し、それらの機能を抑制することを我々は報告してきた。 E4orf6はBNIP3のアポトーシス誘導能を抑制した。E4orf6はN末端側にNuclear Export Signal (NES)をコードする領域を持っている。E4orf6とBNIP3を293細胞に遺伝子導入し、レーザー共焦点顕微鏡により観察したところ、E4oef6は細胞質中でBNIP3のミトコンドリアヘの局在を変化させることが認められた。さらにBNIP3との結合にはNESを含むがんの悪性化に重要な役割を果たす領域が必要であった。これらの結果はE4orf6はBNIP3をターゲットにして細胞中で相互作用し細胞を悪性化することを示唆している。 ヒトがん細胞でもE4orf6に相当するがん遺伝子がp53ファミリーを介さずにアポトーシス抑制的に働き、細胞がん化に働いているものを思われ、今後このような機能をもつ細胞がん遺伝子をターゲットにしてがん細胞のアポトーシスを誘導することによってがんの遺伝子治療に寄与するものと思われた。
• 抜歯即時インプラントにおける早期の咬合機能回復の達成をめざして

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 2000年 -2002年 

  代表者 : 横山 敦郎, 東野 史裕, 安田 元昭, 進藤 正信, 中須 正議, 川崎 貴生

   

  抜歯即時インプラントにおける早期の咬合機能回復を達成するため,粗造な海綿骨の緻密化を目的に研究を行い,以下の成果を得た. 付型性があり自由な形態を付与することが可能なリン酸カルシウムセメントを開発し,このセメントが操作性に優れ,生体適合性および骨伝導性に優れることを明らかにした.さらに,顎堤挙上を想定したサンドイッチテクニックを考案し,その有効性を示した.セメントの多孔化にも成功したが,生体内吸収性をセメントに付与することはできなかった.海綿骨の緻密化には,骨内で材料が吸収されることが不可欠と考え,吸収性を有する材料の開発に取り組み,球状β-三リン酸カルシウム(β-TCP)とCM-キチンの複合体を開発した.この骨補填材は,流動性を有し注射針より排出可能であり操作性に優れており,軟組織および骨内においても起炎性は認められず,優れた生体適合性も有していることが示された.また,BMPのキャリアとしての有効性を検索するため,このCM-キチン-β-TCP複合体にBMPを添加し,軟組織に埋入したところ,活発な骨形成が認められた.これまで,BMPのキャリアとしてコラーゲンが多用されてきたが,BSEなどの問題を考慮した場合,コラーゲンに代わるキャリアが必要とされており,この複合体が有用であることが示唆された.骨補填材としての有用性を検索するため,大腿骨に埋入したところ材料周囲には旺盛な骨形成が観察された.また,経時的に複合体の吸収が生じ,骨組織と置換され,大腿骨海綿骨領域は,緻密化されることが明らかとなり,抜歯即時インプラントにおける早期の咬合機能回復の可能性が示唆された.
• シェーグレン症候群の唾液腺障害とサイトカイン産生異常およびアポトーシスとの関連

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 2000年 -2002年 

  代表者 : 福田 博, 安田 元昭, 小林 一三, 進藤 正信, 杉浦 千尋

   

  本研究の結果から、SSにおける唾液腺機能低下と有意に相関する所見として、点状〜小円形の唾影像く(III、IV型)および末梢血リンパ球のCD4/CD8比の低下が認められた。前述のように、唾影像上、末梢性の点状〜小円形の陰影出現は末梢導管の破壊と密接に関連することが報告されていることから、この組織学的変化がSSにおける唾液腺機能低下の一因である可能性が推測された。また、末梢血リンパ球のCD4/CD8比の低下はリンパ球の各種サイトカイン産生能の変化と関連すると考えられているが、今回SS群の唾液腺局所におけるTh1/Th2の相対的亢進が示唆された。さらに全身的なTh1/Th2の亢進が示唆された。今後さらにSSおける各種のサイトカイン産生能と唾液腺障害との関連もあわせて検討してゆく必要があると思われた。 他方、Vissinkらはラットの顎下腺を用いた検索から、放射線照射による唾液腺の機能低下は形態学的変化に先行することを報告しており、SS等の唾液腺疾患においても唾液腺機能低下が形態学的変化に先行することが推測された。また、近年、唾液腺細胞の情報伝達系の変化が唾液腺機能の変化と関連することが報告されており、SS等の唾液腺疾患における唾液腺機能低下が細胞内外の情報伝達系の変化と関連することも推測された。今後、SSの唾液腺における情報達系の変化と唾液腺機能低下との関連も検索してゆく必要があると思われた。
• 表在性口腔がんの遺伝子治療への試み-腫瘍特異発現の検討-

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 2000年 -2001年 

  代表者 : 進藤 正信, 小林 正伸, 安田 元昭, 東野 史裕

   

  口腔悪性腫瘍の大部分を占める扁平上皮がんは、表在性で腫瘍が視認できるという特徴がある。このため、遺伝子治療にあたって腫瘍への遺伝子導入が他臓器のがんに比べ、明視野で直接的に行えるという特徴がある。 今回の検索では、我々が口腔扁平上皮がん細胞に特異的に発現することを見いだした、etsがん遺伝子群転写因子E1AFのプロモーター活性を利用した遺伝子治療法の効果について検討した。E1AFは細胞外基質分解酵素であるマトリックスメタロプロテアーゼの転写を亢進し、腫瘍細胞の浸潤形質と深く関わっていることを我々は既に報告している。 口腔扁平上皮がん及び浸潤転移形質の高い悪性黒色腫細胞からRNAを抽出し、RT-PCR法でE1AFの発現を検索したところ、浸潤性に増殖する扁平上皮がんと多くの悪性黒色腫細胞でE1AFの発現亢進が認められた。E1AFの転写調節領域をpAd Bgl II CMV BGHpAベクターのCMVプロモーターと置き換えその下流にapotosis誘導遺伝子であるBikを組み込み、293細胞にpJM17とco-transfectionすることで、組む換えアデノウイルスベクターAd-Fbikを得た。 このアデノウイルスをE1AFを発現している扁平上皮がん細胞にin vitroで感染させると、DNAの断片化が認められ、apotosisが誘導された。ヌードマウス皮下に扁平上皮がん細胞を移植し、腫瘍が増大した後、アデノウイルスベクターAdFBikを感染させ、経時的に観察したところ、腫瘍の増殖は抑制された。 このような所見は、アデノウイルスベクターを用いた遺伝子治療の有効性を示唆するものと思われた。
• 放射線照射にて活性化されるCaspaseカスケード

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 2000年 -2001年 

  代表者 : 安田 元昭, 進藤 正信, 東野 史裕

   

  放射線照射により惹起される細胞死誘導のメカニズムを解明する目的で以下の検討を行った。 1.ヒト正常細胞およびがん細胞の放射線感受性に関する検討 ヒト正常線維芽細胞MRC5およびがん細胞HL60、MCF7にコバルト60によるガンマ線照射を施し、caspase-8とcaspase-9の活性化についての解析を行った。HL60では両caspaseの著明な活性化が認められたのに対してMRC5ではcaspase-8には活性化がみられず、caspase-9のわずかな活性化が認められた。このようなcaspaseの活性化の程度の差が細胞の放射線感受性に強い相関を示していることが明らかとなった。 2.放射線照射によりヒト正常線維芽細胞の上皮細胞遊走因子放出を活性化する 放射線照射によりMRC5の培養上清中に放出される上皮細胞遊走化因子の絶対量が増加した。Northern Blottingおよび中和抗体を用いた実験によりこの因子の一つがHGF(Hepatocyte growth factor)であることが明らかとなった。 3.遺伝子チップを用いた放射線照射による遺伝子誘導の解析 ヒト正常線維芽細胞MRC5に10Gyのガンマ線照射を行い24時間後の遺伝子発現を対照群と比較した。検索した範囲では著明なBCL-2関連タンパク質の発現上昇は認められなかった。Caspase関連ではCaspase-2、-6、-10の発現レベルがやや上昇していた。これらの結果から上記1.にて予想されたメカニズムは主に翻訳後に活性化されるカスケードにより制御されている可能性が示唆された。またメッセージレベルでアポトーシス抑制性タンパク質の転写量の上昇例も多数認められ、正常細胞の放射線抵抗性の一部はこれらにより説明されると考えられた。
• Etsがん遺伝子群転写因子E1AFの細胞周期調節機構の解析

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 2000年 -2001年 

  代表者 : 戸塚 靖則, 安田 元昭, 東野 史裕, 進藤 正信, 小林 正伸

   

  1.高い浸潤活性を持つ口腔扁平上皮がん細胞HSC3にAd12型E1A発現プラスミドを遺伝子導入したところ、MMPとE1AF mRNAおよびタンパク発現が低下した。この過程にはAd12型E1Aによる転写因子E1AFの発現を抑制するネガティブフィードバック機構が存在することを示唆するものだった。 2.口腔扁平上皮癌由来細胞株Ca9.22にメタロチオネイン誘導E1AF発現ベクターを遺伝子導入し、ZnC12刺激によりE1AFを発現するMT9.22F細胞を樹立した。E1AF誘導細胞では、MMPの産生亢進と同時にp21waf1/cip1の発現亢進が認められることが明らかになり、口腔扁平上皮がん細胞の浸潤活性の亢進は、細胞周期の中で増殖期以外の時期に生じ、この過程にはE1AFが関与している可能性があることが示唆された。 3.E1AFによるp21遺伝子の転写の活性化に及ぼすp53の影響をルシフェラーゼアッセイで検索した結果、E1AFとp53は相乗的にp21プロモーターを活性化した。両タンパクの結合を調べた結果、E1AFとp53はin vitroおよびin vivoで両タンパクは結合した。さらに、E1AFのTumor Suppressor活性およびApoptosis活性について検索したところ、E1AFはTumor suppressor活性を有するがApotosis活性はもたないことが示された。 これらの結果より、E1AFはp21の転写調節領域上でp53タンパクと相互作用し転写活性を上げ細胞周期を止めることによりTumor suppressorを示しているものと考えられる。
• 生体材料が骨形成関連タンパク、細胞接着タンパクの遺伝子発現に及ぼす影響について

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 1999年 -2000年 

  代表者 : 横山 敦郎, 東野 史裕, 安田 元昭, 進藤 正信, 川崎 貴生

   

  生体材料と細胞の接着や表面における骨形成に関しては不明な点が多い.これらを解明する目的で,以下の研究を行った. 生体材料の材質がヒト骨芽細胞の材料表面への初期接着に与える影響を検索した.血清添加培地を使用した場合は,ヒト骨芽細胞様細胞であるSaos2のハイドロキシアパタイト(HAP)への接着率は,チタン(Ti)やヴァナジウム(V)に比較し高かったが,無血清培地では,HAPとTiの間には接着率に差が認められなかった.この結果から,血清のタンパクが生体材料へのSaos2の接着に影響を与えるものと考え,骨の非コラーゲン性のタンパクであり,細胞接着タンパクでもあるオステオポンチンをSaos2に遺伝子導入し,Saos2のTiへの接着能にどのような影響を与えるかを検索した.ヒトオステオポンチンcDNAのC末端にFLAG tagを付与し,レトロウィルスベクター(pBabe-puro)にサブクローニングした.パーッケージング細胞に導入後,レトロウィルスを回収した.このレトロウィルスをSaos2に感染させ,puromycinを用いてselectionを行い,OP-FLAG発現Saos2株をクローニングした(Saos2-OP).p-Babe-puroのみをmock infectionし,selectionしたSaos2-puroをコントロールとして用いた.RT-PCRにてオステオポンチンのmRNAがSaos2-OPのみに発現されていること,またWestern blottingでFLAG tagを含むオステオポンチンの発現がSaos2-OPのみに発現されていることを確認した.これらの3種の細胞を用いて,ポリスチレンとTiに対する接着試験と走査電顕による観察を行った.接着率は,細胞播種6時間後では,3種の細胞間に有意差は認められなかったが,12時間後,24時間後では,ポリスチレン,TiともにSaos2-OPの接着率は,コントロールであるSaos2及びSaos2-puroに比較し有意に高い値を示した.また走査電顕による観察において,Saos2-OPは,Saos2に比較し,小さく厚くなる傾向を示し,表面には顆粒状の構造が認められた.以上の結果から,オステオポンチンの遺伝子導入を行うことにより,in vitroにおいてSaos2の接着能を高めることが示された.
• 口腔扁平上皮がんにおける転写因子E1AFの発現と悪性度との関連

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 1999年 -2000年 

  代表者 : 小野 貢伸, 安田 元昭, 東野 史裕, 進藤 正信

   

  E1AFはHigashinoらによって発見されたets-oncogene familyに属する転写因子で、種々の遺伝子の転写に関与することが示唆されている。われわれはこれまで口腔扁平上皮癌由来細胞株を用いてE1AFが腫瘍細胞の浸潤性増殖に深く関与し、培養細胞系では転写因子E1AFの発現と細胞の悪性形質とは非常にパラレルな関係にあることを明らかにしてきた。 実際の口腔扁平上皮癌でも同様の関係が成り立つならば、E1AFは腫瘍の予後因子として術前の生検材料での予測が成り立ち、治療法の選択において重要な役割を果たすものと思われた。今回の検索は、患者から採取した口腔扁平上皮癌組織での転写因子E1AF、細胞外基質分解酵素MT1-MMPの発現を検索し、病理組織学的分化度、血管内皮細胞増殖因子VEGFの発現および転移との関連について検索した。 検索を行った32例中リンパ節転移を認めた症例は18例であった。また32例中11例がE1AF陽性であり、このうち7例にリンパ節転移を認めた。MT1-MMP陽性症例は5例であったが、そのいずれもがE1AF陽性症例であり、うち4例にリンパ節転移を認めた。32例中11例がVEGF陽性であり、このうち10例にリンパ節転移を認めた。VEGFの発現とリンパ節転移の有無の間には統計学的有意差を認めた。また、E1AF、VEGFのいずれかが陽性であった症例は17例あり、そのうちの12例にリンパ節転移を認めた。、E1AF、VEGFがともに陰性であった症例は15例あり、そのうちの6例にしかリンパ節転移が認められなかった。E1AF、VEGFの発現と病理組織学的分化度との間には相関関係は認められなかった。 以上の検索結果から、口腔扁平上皮がんの転移に関してE1AF、MT1-MMPおよびVEGFが重要な役割を演じていることが示唆され、これらの術前の検索が転移の有無を予測するパラメーターの一つとなりうると考えられた。
• 口腔扁平上皮がんの遺伝子治療への試み -遺伝子導入法の検討-

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 1999年 -2000年 

  代表者 : 進藤 正信, 小林 正伸, 安田 元昭, 東野 史裕, 澤田 幸治

   

  E1AFは細胞外基質分解酵素マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)の転写を亢進し、口腔扁平上皮がんの浸潤性増殖と深く関わる一方で、細胞周期制御に関与しているp21waf1/cip1の転写を亢進することが知られ、E1AFの機能の多様性を示している。P53欠損肺がん細胞株を用いてCAT assayを行い、E1AFによるbaxの転写活性化について検索した。その結果、baxの転写活性はE1AFの濃度依存性に亢進し、E1AFと野生型P53を共導入することで相乗的に亢進した。一方、変異型P53とE1AFを遺伝子導入した際には、baxの転写活性の減弱が認められた。これらの結果より、E1AFがp53とともに、baxを介したアポトーシスの誘導に深く関与していることが示唆された。変異型p53とE1AFの共導入によりbaxの転写活性が減弱したことは、変異型p53がE1AFのもつbaxの転写活性化機能を積極的に抑制し、がん化を促進させる可能性のあることを示すものと考えられ、E1AFの相反する機能は、細胞のp53の状態と関係している可能性があるものと思われた。 E4orf6はアデノウィルスの新しいウィルスがん遺伝子で、がん抑制遺伝子p53ファミリーの機能を抑制することで細胞のがん化を導くことが報告されている。今回、アポトーシス関連蛋白に対するE4orf6の影響について検索し、Bcl-2ファミリーのBNIP3のアポトーシス誘導能をE4orf6が抑制することを見出した。E4orf6はN末端側にNuclear Export Signal(NES)をコードする領域を持っている。E4orf6とBNIP3を293細胞に遺伝子導入し、レーザー共焦点顕微鏡により観察したところ、E4orf6は細胞質中でBMP3のミトコンドリアへの局在を変化させることが認められた。さらにBNIP3との結合にはNESを含むがんの悪性化に重要な役割を果たす領域が必要であった。これらの結果はE4orf6はBNIP3をターゲットにして細胞中で相互作用し細胞を悪性化することを示唆している。 今後、E4orf6に相当するヒトがん遺伝子の同定を行うことによって、これを対象とした遺伝子治療が有効なものになってくることが考えられる。このためには、細胞・組織特異的なウイルスベクターの開発が望まれる。
• 口腔偏平上皮がんの放射線感受性に関与する遺伝子の同定

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 1998年 -1999年 

  代表者 : 安田 元昭

   

  口腔がん症例の放射線治療では、腫瘍組織のほか周囲正常細胞にも照射は行われ、正常組織にも照射による遺伝子発現の変化が生じているはずである。正常組織より放出されるタンパク質が腫瘍細胞に大きな影響を与えているのは予想に難くなく、この腫瘍一間葉間の相互作用が腫瘍細胞の放射線感受性に影響を及ぼすと考えられる。また腫瘍細胞自身の遺伝子発現、特に細胞死抑制的に働く遺伝子の発現は治療効果を左右する大きな因子である。 申請者は平成10年度の研究により、10Gyの照射を行ったヒト正常線維芽細胞において、HGF,ファイブロネクチンの発現が、照射24時間後より上昇することを確認した。HGFは多様な生物活性を持つタンパク質であり、肝細胞の再生、その他肺、腎細胞の再生に関与しこれら臓器の創傷治癒に正の働きがあることが示されている。これらのことから、ある放射条件においては、正常結合組織に照射線照射により腫瘍細胞を生存の方向に導く可能性のあるタンパク質の発現亢進が起こってる可能性が示唆された。 平成11年度は、腫瘍細胞に種々のアポトーシス抑制遺伝子を導入し、これらが放射線により引き起こされる細胞死を克服できるか否かを検討した。Bcl-xl,アデノウイルスE1B19K,Bag-l,サイトメガロウイルスUL37を導入したH1299細胞に照射を行いそのプレート効率の比較を行ったところ、Bcl-xl,アデノウイルスE1B19K、サイトメガロウイルスUL37は対照細胞に比較して、明らかな細胞死抑制能を持つことが示されたが、Bag-1はわずかな抑制を示すのみであった。この結果は、通常行われている放射線照射により起こる腫瘍治療効果の大きな部分が、近年注目を集めているミトコンドリア関連タンパク質により制御されている可能性をしめすものである。
• Two hybrid法を用いた転写因子E1AFのターゲット遺伝子の同定

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 1998年 -1999年 

  代表者 : 進藤 正信, 安田 元昭, 小林 正伸, 吉田 幸一, 東野 史裕

   

  口腔扁平上皮がん細胞HSC3にAd12型E1A-12S発現プラスミドを遺伝子導入し、12-12S細胞を樹立した。12-12S細胞は母細胞であるHSC3細胞と比べてE1AFmRNAおよびMMPタンパクの発現抑制が認められた。in vitro invasion assayで、12-12S細胞はHSC3のほぼ半分の浸潤活性を示した。これらの結果から、Ad12型E1A遺伝子は、E1AFの発現を低下させることにより、MMPの転写を抑制し、がん細胞のもつ浸潤活性が抑制することが明らかになり、また、AdE1Aの転写を亢進させるヒト細胞の転写因子として発見されたE1AFがAdE1Aによりその発現が抑制されることは、AdE1AとE1AFの間にネガティブフィードバック機構が存在することを示唆するものであった。 肝細胞増殖因子(Hepatocyte Growth Factor:HGF)は肝再生因子として発見され、HGFはがん細胞の浸潤、転移を強力に誘導し、胃がん・肺がん等では、原発組織中のc-MET(HGFレセプター)の発現とHGFレベルが悪性度、予後とよく相関することが報告されている。ヒト口腔扁平上皮がん由来細胞株HSC3と二種類のヒト線維芽細胞株MRC5(HGF高産生性)、Gin1(HGF低産生性)を用いたin vitro三次元浸潤モデル(raft culture)による形態学的検索では、コラーゲンゲル内への浸潤は、HSC3/MRC5で著しく、HSC3/Gin1では、がん細胞は重層化するのみでゲル中への浸潤傾向は示さず、がん細胞のin vitro運動能、浸潤能は、HGFの濃度と正の相関を示し増加した。HSC3細胞はHGF濃度依存性にE1AF mRNAの発現が亢進し、同時にMMP-1、3、9mRNAの発現も亢進した。これにより、口腔がん細胞の浸潤活性の少なくとも一部は、HGFによるがん細胞の運動性の亢進と、転写因子E1AFを介したMMP遺伝子の転写亢進によるものであることが示唆された。 遺伝子チップを用いた解析をおこなったところ、前述のMMPなどの亢進に加えてreninbinding protein、RAD51、paxillinなどが転写亢進することが証明された。今後、DNAチップにより明らかになった遺伝子・遺伝子産物の相互作用を検討する予定である。
• 口腔前癌病変の悪性化に関与する遺伝子修復障害とゲノム刷り込み異常の解析

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 1996年 -1997年 

  代表者 : 千葉 逸朗, 安田 元昭, 進藤 正信, 守内 哲也

   

  申請者らは北海道大学歯学部附属病院口腔外科を受診し、病理組織学的に扁平上皮癌と診断された患者を対象に、その生検組織、あるいは外科切除組織を用い、p53遺伝子の異常ならびにヒトパピローマウイルス(HPV)の感染について検索し、高頻度にp53遺伝子の異常、HPVの感染を認めた(Oncogene,12:1663-1668,1996)。また、噛みタバコの習慣のあるスリランカの口腔癌、前癌病変(International Journal of Cancer,in press)、あるいは口腔癌の動物モデルであるDMBA誘発ハムスター頬粘膜扁平上皮癌(日本口腔外科学会雑誌,42:347-362,1996)についても同様の検査を行い、それぞれの遺伝子異常の相違について検討した。その結果、スリランカの口腔癌ではp53遺伝子のエクソン5に遺伝子の一部欠失を含む比較的大きな遺伝子異常が数多く認められた。これは日本人の口腔癌やDMBA誘発ハムスター頬粘膜扁平上皮癌ではあまり認められないことから、噛みタバコの成分中にp53遺伝子のエクソン5に特異的に異常をきたす因子が含まれていることを示唆している。また、点突然変異を起こした部位はG-C rich regionがほとんどであった。噛みタバコの成分の一つであるslaked limeは強アルカリであり、活性酸素を産生することが知られており、この活性酸素は特異的にGuanosineに結合することによりDNAを障害する。このように遺伝子の特定の部位に異常が集積することから噛みタバコ中の特定の成分が発癌物質としてp53遺伝子をはじめ、他の遺伝子の特定の部位にも異常をきたしたり、修復障害をきたすという可能性が示唆された。そこで、現在ではさらにras遺伝子群についてもMASA(mutant allele specific amplification)を用いて詳細に検討を行っている。
• ラフトカルチャーによる口腔がんの浸潤・転移活性の評価と転写因子E1A-Fとの関連

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 1995年 -1995年 

  代表者 : 進藤 正信, 藤永 恵, 千葉 逸朗, 安田 元昭

   

  1 口腔扁平上皮がんの浸潤・転移活性を評価する目的で、2種類の異なったコラーゲン(1型コラーゲンのみ・1型+4型コラーゲン)を担体としたラフトカルチャーを行った。使用した細胞は口腔扁平上皮がん由来細胞株HSC3、Ca9.22を用いた。 2 Northern blottingではHSC3は、MMP(Matrix metalloproteinase)1(間質型コラゲナーゼ)およびMMP9(Gelatinase B)とets-oncogene familyに属する転写因子E1AFのmRNAの発現が顕著だったが、Ca9.22はそれらの発現はほとんど示さなかった。 3 両細胞とも、1型コラーゲンゲルのみでのラフトカルチャーでは浸潤する傾向は示さなかったが、HGF(Hepatocyte growth factor)を産生するMRC5 fibroblastをゲル中に混じると、HSC3細胞はゲル中に浸潤した。しかし、Ca9.22はMRC5を加えたラフトカルチャーにおいても浸潤する傾向は認められなかった。 4 さらに、HGFで刺激すると、HSC3はE1AFの転写の亢進が認められ、MMP1、MMP9の転写亢進も認められたが、Ca9.22は反応を示さなかった。 5 MRC5を加えないコラーゲンゲルを用いたラフトカルチャーにおいても、HGFを培地に加えることで、HSC3は浸湿性の増殖を示した。 6 Ca9.22をファイブロネクチン処理すると、Northern blottingでMMP2の転写が亢進した。しかしMMP1、MMP9には著名な変化は認められなかった。ラフトカルチャーにおいては、Ca9.22/ファイブロネクチン処理したものでは、1型コラーゲンには、浸潤傾向を示さなかったが、1+4型コラーゲンでは浸潤性に増殖した。 7 口腔扁平上皮がん手術摘出材料より初代培養したがん細胞がん細胞を、同様にラクトカルチャーを行い検索した。膨張性の発育を示した腫瘍細胞では、ほとんどゲル中への浸湿傾向は認められなかった。頚部リンパ節転移巣から分離した腫瘍細胞は著しい浸潤傾向を示し、とくに1+4型コラーゲンで顕著だった。
• ダウン症候群児の歯周疾患発症における細胞接着因子の役割

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 1995年 -1995年 

  代表者 : 工藤 真幸, 安田 元昭

   

  ダウン症候群(DS)においては一般に歯周疾患の罹患率が高いといわれている。一方,細胞接着因子のひとつであるLFA-1(lymphocyte function associated antigen-1)のβ_2鎖は21番染色体上にコードされており,Talorらは21トリソミ-であるDSではその発現が増大していると報告している。また,LFA-1の欠損症である白血球粘着異常症においてはその臨床的特徴として小児期からの重篤な歯周疾患の発症が認められる。本研究ではこのLFA-1とDS児における歯周疾患との関連について検討した。 [試料および方法] 北海道大学歯学部付属病院小児歯科外来に通院中のDS児についてその末梢血を採取し,フローサイトメトリーにて解析した。抗体としてはLFA-1のβ鎖を認識するCD18およびα鎖を認識するCDlla,それぞれのモノクローナル抗体を用い,リンパ球,好中球のフローサイトメトリーのパターンについてCoulter社製EPIC ELITE Flocytometry Systemにより検討した。またそれぞれの患児について下顎前歯部のデンタルX線写真を撮影し,歯槽骨の状態について検討した。 [結果] DS児から採取したリンパ球のCD18についてフローサイトメトリーを実施した結果,健常児のものと比較してそのパターンに変異が認められた。つまり健常児ではa,b,2つの明らかなピークをもつ二峰性のパターンが認められたが,DS児ではaのピークの低下によりbのみの1ピークに近いパターンとなった。これらのピークの変化はT細胞のサブセット比の変化と相関するとの報告もあるが、本研究ではa/b比とTh/Ts比の明らかな相関は認められず,下顎前歯部のbone lossとの関連も明確ではなかった。一方,好中球についてはDS児,健常児ともに1つのピークでこのような変異は認められなかった。今後はこの2峰性のピークの違いとDS児における免疫機構との関連について検討する予定である。
• 放射線治療の容積効果と形態保持に関する分子生物学的研究

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 1994年 -1995年 

  代表者 : 白土 博樹, 安田 元昭

   

  放射線治療後の形態温存の代表的な現象として、鼻原発の偏平上皮癌、鼻原発の悪性リンパ腫、転移性骨腫瘍などの治療前後の画像的比較がなされた。いずれも単なる組織修復だけの現象とは断定できず、形態再生に関わる分子生物学的機序について、解析が必要であることを再確認させられた。 照射後の組織標本のE-cadherin抗体による染色では、40Gy程度照射後は細胞膜表面の染色性が一時的に低下するが、65Gy照射後5年目の粘膜ではE-cadherinが再度増加していた。これは、放射線治療後の形態再生に細胞接着因子の役割が関与していることを示している。 in vitroの実験系としては、migration assayにおいて上皮細胞HSC3およびca9-22どちらでも、繊維芽細胞MRC5の10Gy照射後のconditioned mediumにより、細胞遊走が非照射conditioned mediumよりも強く起こることがわかった。MRC5が産成している液性因子としては、fibrinonectionとHGFがbioasseyで同定された。特に、HGFに関しては、10Gy照射後24時間で上昇することがnorthern blottingおよびimmunobiochemicalな定量法で初めて明らかにされた。HGFは、数々の臓器において形態形成において極めて重要な役割を担うことはよく知られており、われわれの発見は放射線治療後の形態形成にHGFなどの形態形成因子の増加が関与していることを示唆している。 以上のごとく、まだ未解決の問題も多いが放射線治療後の形態再生の機序を明らかにする端緒として、分子生物学的検討が重要なことが示された。
• HPV E6/E7遺伝子とapoptosisに関する分子生物学的研究

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 1994年 -1994年 

  代表者 : 安田 元昭

   

  頭頚部におけるがんのほとんどは扁平上皮がんであり、これらの治療に際しては手術療法の他、放射線療法、化学療法、温熱療法が単独あるいは併用されている。しかしながら保存的療法といえる放射線等に対する腫瘍感受性のメカニズムについての分子生物学的研究はさほど進んでいないのが現状である。その中で、近年の腫瘍学におけるトピックスの一つとしてp21(waf1/cip1/sdi1)に関する諸研究があげられる。このタンパク質はp53により発現誘導され、Cdk2またはcyclin DとCdk4複合体に結合し、G1 cyclinとCdk複合体酵素の活性を抑制すること、また細胞の老化に伴い増加してくることがあきらかにされており、腫瘍感受性においても大きな役割を果たしていると思われる。我々は、頭頚部扁平上皮がん細胞株を用い、CBDCA(carboplatin)感受性とp53,p21の発現に関する検討を行い以下のことを明らかにした。 使用した細胞はHSC2,HSC3,HSC4,Ca922,KBでありCBDCAを様々な濃度で作用させた。 1.CBDCAは頭頚部扁平上皮がんに対して増殖を抑制し、細胞死を惹起する事ができた。細胞死に際して形態的あるいは分子生物学的にDNA fragmentationが認められた。 2.最も感受性の高かったHSC3ではCBDCAによりp21の転写が活性化されたがp53転写は増強されず従来の報告とは異なった活性化経路の存在が示唆された。 3.CBDCA処理によりCa9-22,KBにてp53の転写が増強した。両細胞では同時にp21転写も増強されていたがp53のmutationおよびHPV18の存在を考慮すると、ここにおいてもp53 independentなp21活性経路が予想された。 4.p16はKBにおいてのみCBDCA処理により転写が増強した。
• 口腔扁平上皮癌の放射線感受性に関する分子生物学的研究

  日本学術振興会：科学研究費助成事業

  研究期間 : 1993年 -1993年 

  代表者 : 安田 元昭

   

  今回の科学研究補助金(奨励研究(A))により以下の検索を行った。 1.口腔癌症例におけるHPV DNAの検出およびp53 mutationの解析 20例の口腔扁平上皮癌のDNA sampleに対して、HPVについてはconsensus primerを用いたdetection assay、p53についてはPCR SSCP法によるmutationの検出を試みた。これらのうち8例にHPV16型の存在を確認し、5例にp53のmutationを認めた。今後症例を重ねて予後との比較検討を行う予定である。 2.口腔癌細胞株に発現するnm23遺伝子の解析 口腔癌細胞株HSC2,HSC3,HSC4,Ca992,KB,OSC20のmRNAを出発材料としてRT-PCR法によりnm23遺伝子の増幅を行い半定量的解析および制限酵素切断パターンの解析を行った。HAC4,Ca922,KB,OSC20にてnm23H1,H2遺伝子の発現に差異は認めなかったが、HSC2ではnm23H1の発現量が低く、HSC3ではnm23H2遺伝子のPCR productのsizeが小さいことが見いだされた。今後はこの事実が細胞浸潤能、移転能とどのような関わりをもつかを明らかにしていく予定である。方法論的には核MMP nRNAの発現量の解析、マトリゲルを用いた浸潤能の解析を行う計画である。 3.舌癌におけるPCNA陽性率と頚部リンパ節転移の相関について 初診時T1N0あるいはT2N0であった口腔舌癌24症例に対して抗PCNAモノクローナル抗体による免疫染色を施しその陽性率と後発頚部リンパ節転移との関係を検索した。これらのうち後発転移は6例に認められ、これらの症例ではPCNA 陽性率が30%以上であった。これによりぜつ扁平上皮癌細胞の増殖活性と転移能にはかなりの相関性があることが示唆された。
• DNA腫瘍ウイルス

  研究期間 : 1986年
• Adenovirus,Human Papillomavirus

  研究期間 : 1986年

産業財産権

• 特開2007-228818:細胞培養容器、その製造方法および細胞培養方法  2007年09月13日

  西 泰治, 田崎 剛, 福田 始弘, 柴田 健一郎, 安田 元昭, 菊池 裕子  株式会社クラレ  200903080352157588
• 特許第3600616号:ヒトパピローマウイルスを検出するためのプライマーセット、検出方法および検出用DNAアレイ  

  柴田 健一郎, 安田 元昭, 道又 理恵, 西村 訓弘  株式会社ジェネティックラボ  201103066882580568