2018年06月, 日本歯科保存学会, 日本歯科保存学会学術賞　　　　　　　　　　　　　　　
申請者らは、当研究室にて樹立したヒト歯根膜幹細胞株に対するキャラクタリゼーションを行ってきた。その結果、ダイオキシン類によって発現誘導されるAhRシグナルが、それらのCOL1発現抑制およびアポトーシス亢進を介し、歯周組織破壊を促進している可能性を明らかにした。また、MTAがBMP2の発現を誘導することで、それらの細胞の骨芽細胞分化を促進することを明らかにした。これらの研究成果は、歯科保存学に新たな知見をもたらすものである。さらに申請者は、近年ヒトiPS細胞を高頻度で神経堤細胞へ分化誘導することに成功しており、これらを用いてさらなる歯周組織再生・恒常機能解析を行うことができると考えられる。

2016年07月, 日本歯内療法学会, JEA会長賞　　　　　　　　　　　　　　　
ヒト歯髄細胞の老化と象牙芽細胞様分化におよぼすTNF-αの影響について

2015年10月, 日本歯科保存学会, 日本歯科保存学会ジーシー優秀ポスター賞　　　　　　　　　　　　　　　
歯根膜および皮膚由来ヒト人工多能性幹細胞(iPSC)を用いた神経堤細胞様細胞の樹立とその表現型の比較

2014年10月, 日本歯科保存学会, 日本歯科保存学会ジーシー優秀ポスター賞　　　　　　　　　　　　　　　
β2アドレナリン受容体の作動薬および非作動薬がヒト歯根膜細胞に及ぼす影響

2012年06月, 日本歯内療法学会, 平成２４年度日本歯内療法学会優秀論文賞　　　　　　　　　　　　　　　
レジンシーラーの細胞親和性について－スーパーボンド根充シーラーとAH Plusとの比較－

2010年07月, 日本歯内療法学会, JEA会長賞　　　　　　　　　　　　　　　
前田英史, 友清淳, 他9名.スーパーボンドシーラーの特性について -ヒト歯根膜細胞の増殖と分化に与える影響-.

2009年10月, 日本歯科保存学会, デンツプライ賞　　　　　　　　　　　　　　　
藤井慎介, 前田英史, 友清淳, 他名5名TGF-beta1がヒト歯根膜細胞および前駆細胞の増殖および分化に及ぼす影響.

2008年06月, 日本歯科保存学会, 日本歯科保存学会奨励賞　　　　　　　　　　　　　　　
Tomokiyo A, Maeda H, Fujii S, Wada N, Shima K, Akamine A.,Development of a multipotent clonal human periodontal ligament cell line.,Differentiation,76(4):337-347,2008.04.

2008年04月, 九州大学歯学部, 藤野博賞（主席賞）　　　　　　　　　　　　　　　
友清淳：「ヒト歯根膜幹細胞株を用いた歯根膜再生機構の解析」学位論文

2005年09月, 九州大学歯学部, 大学院中間発表賞　　　　　　　　　　　　　　　
友清淳：平成18年度歯学府大学院中間発表優秀発表賞、発表名「多分化能を持つヒト歯根膜クローン細胞株の樹立とキャラクタリゼーション」（中間発表賞）

2005年05月, 日本歯科保存学会, デンツプライ賞　　　　　　　　　　　　　　　
友清淳、前田英史、藤井慎介、和田尚久、野田亮、島一也、赤峰昭文：ヒト不死化歯根膜クローン細胞におけるEMDおよびbFGFが石灰化誘導に及ぼす影響・第123回秋季日本歯科保存学会総会・東京・2005

2004年06月, 日本歯科保存学会, デンツプライ賞　　　　　　　　　　　　　　　
友清淳、中島美砂子、庵原耕一郎、石河真幸、赤峰昭文：自己複製能と多能性を有する歯髄幹細胞の分取、培養法の開発・第121回秋季日本歯科保存学会総会・長崎・2004

Biological evaluation of novel phosphorylated pullulan-based calcium hydroxide formulations as direct pulp capping materials: An in vivo study on a rat model.
Md Refat Readul Islam, Rafiqul Islam, Yunqing Liu, Yu Toida, Yasuhiro Yoshida, Hidehiko Sano, Hany Mohamed Aly Ahmed, Atsushi Tomokiyo
International endodontic journal, 57, 9, 1247, 1263, 2024年09月, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, AIM: Calcium hydroxide (CH) has been considered as a direct pulp capping materials (DPC) for the last decades despite having some limitations. Phosphorylate pullulan (PPL) incorporated with CH (CHPPL) is a novel biomaterial that was introduced as a promising DPC material. Thus, the aim of the study was to evaluate the inflammatory response and mineralized tissue formation (MTF) ability of PPL-based CH formulations on rat molars after DPC. METHODOLOGY: This study consisted of six groups: CH with 1% PPL (CHPPL-1); 3% PPL (CHPPL-3); 5% PPL (CHPPL-5); Dycal and NEX MTA Cement (N-MTA) as the positive control, and no capping materials (NC). One hundred twenty maxillary first molar cavities were prepared on Wistar rats. After capping, all the cavities were restored with 4-META/MMA-TBB resin and pulpal responses were evaluated at days 1, 7, and 28. Kruskal-Wallis followed by Mann-Whitney U-test was performed with a significance level of 0.05. Immunohistochemical expression of IL-6, Nestin, and DMP-1 was observed. RESULTS: At day 1, CHPPL-1, N-MTA, and Dycal exhibited no to mild inflammation, whilst CHPPL-3, CHPPL-5, and NC showed mild to moderate inflammation, and the results were significantly different (p < .05). At day 7, mild to moderate inflammation was observed in CHPPL-1, N-MTA, and Dycal, whereas CHPPL-3, CHPPL-5, and NC exhibited moderate to severe inflammation. Significant differences were observed between CHPPL-1 and N-MTA with NC (p < .05), CHPPL-1 and CHPPL-3 with CHPPL-5 and Dycal (p < .05), and CHPPL-3 with N-MTA (p < .05). A thin layer of mineralized tissue formation (MTF) was observed in all groups. At day 28, CHPPL-1, Dycal, and N-MTA showed no to mild inflammation, whilst CHPPL-3, CHPPL-5, and NC exhibited mild to severe inflammation, and statistically significant difference was detected (p < .05). CHPPL-1, Dycal, and N-MTA exhibited continuous MTF, whilst CHPPL-3, CHPPL-5, and NC had thicker and interrupted MTF. Significant differences were observed between CHPPL-1, CHPPL-3, and N-MTA with NC group (p < .05). Variable expressions of IL-6, Nestin, and DMP-1 indicated differences in the materials' impact on odontoblast-like cell formation and tissue mineralization. CONCLUSIONS: These findings suggest that CHPPL-1 has the potential to minimize pulpal inflammation and promote MTF and had similar efficacy as MTA cement.

4-META/MMA-TBB resin containing nano hydroxyapatite induces the healing of periodontal tissue repair in perforations at the pulp chamber floor.
Hideki Sugii, Shinichiro Yoshida, Mhd Safwan Albougha, Sayuri Hamano, Daigaku Hasegawa, Tomohiro Itoyama, Junko Obata, Hiroshi Kaneko, Fumiko Minowa, Atsushi Tomokiyo, Hidefumi Maeda
Cell biochemistry and function, 42, 4, e4058, 2024年06月, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, We aimed to evaluate the materials based on 4-methacryloxyethyl trimellitate anhydride/methyl methacrylate tri-n-butylborane (Super-bond [SB]) and nano hydroxyapatite (naHAp) for the repair of perforation at pulp chamber floor (PPF) in vitro and in vivo models. SB and naHAp were mixed in the mass ratio of 10% or 30% to produce naHAp/SB. Human periodontal ligament stem cells (HPDLSCs) were cultured on resin discs of SB or naHAp/SB to analyze the effects of naHAp/SB on cell adhesion, proliferation, and cementoblastic differentiation. A rat PPF model was treated with SB or naHAp/SB to examine the effects of naHAp/SB on the healing of defected cementum and periodontal ligament (PDL) at the site of PPF. HPDLSCs were spindle-shaped and adhered to all resin discs. Changing the resin from SB to naHAp/SB did not significantly alter cell proliferation. Both 10% and 30% naHAp/SB were more effective than SB in promoting cementoblastic differentiation of HPDLSCs. In the rat PPF model, 30% naHAp/SB was more effective than SB in promoting the formation Sharpey's fiber-like structures with expression of the PDL-related marker and cementum-like structures with expression of cementum-related markers. In conclusion, 30% naHAp/SB can be the new restorative material for PPF because it exhibited the abilities of adhering to dentin and healing of defected periodontal tissue.

硬化後のWhite Mineral Trioxide Aggregateに対するウォーキングブリーチ用薬剤の影響
友清 淳, 戸井田 侑, 槌谷 賢太, 矢後 亮太朗, 金澤 凪沙, 川本 千春
日本歯内療法学会雑誌, 45, 2, 112, 121, (一社)日本歯内療法学会, 2024年05月
日本語

Effect of Simulated Dental Pulpal Pressure Using Fetal Bovine Serum for the Bonding Performance of Contemporary Adhesive to Dentin.
Yitong Li, Masahiko Maeno, Carolina Cecilia Cifuentes-Jimenez, Mei Komoto, Yunqing Liu, Yoichiro Nara, Hidehiko Sano, Pedro Alvarez-Lloret, Monica Yamauti, Atsushi Tomokiyo
Polymers, 16, 9, 2024年04月26日, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, This study evaluated the effect of simulated pulpal pressure (SPP) conditions and storage time on contemporary adhesive systems' microtensile bond strength (µTBS) to dentin. Extracted human molars were prepared and randomly divided into four groups according to the adhesives: Clearfil Megabond 2 (CSE), Beautibond Xtreme Universal (BXU), G2-Bond (G2B), and Scotchbond Universal Plus (SBP). Each adhesive group was further divided following the SPP conditions: control with no simulation (SPP-CTR), SPP with distilled water (SPP-DTW), and SPP with fetal bovine serum (SPP-FBS). Resin composite build-ups were prepared, and teeth were stored in water (37 °C) for 24 h (24 h) and 3 months (3 m). Then, teeth were sectioned to obtain resin-dentin bonded beams and tested to determine the µTBS. Data were analyzed using three-way ANOVA, Tukey post hoc tests (=0.05), and Weibull failure analysis. Failure mode was observed using scanning electron microscopy. The µTBS response was affected by adhesive systems, simulated pulpal pressure conditions, and storage time. SPP-CTR groups presented a higher overall bond strength than SPP-DTW and SPP-FBS, which were not significantly different from each other. Only for SBP, the SPP-FBS group showed higher µTBS than the SPP-DTW group. The Weibull analysis showed that the bonding reliability and durability under SPP-DTW and SPP-FBS were inferior to SPP-CTR, and the 24 h bonding quality of adhesives to dentin was superior to that of 3 m. SPP drastically reduced the µTBS of all adhesives to dentin regardless of solution (distilled water or fetal bovine serum). Storage after 3 m also decreased µTBS despite the SPP condition.

Effect of Silver Diamine Fluoride on Bonding Performance and Ultra-morphological Characteristics to Sound Dentin.
Papichaya Intajak, Yuan Yuan, Norihito Sakaguchi, Pipop Saikaew, Pimpinee Eamsaard, Mariko Matsumoto, Hidehiko Sano, Atsushi Tomokiyo
Dental materials : official publication of the Academy of Dental Materials, 40, 4, e24-e32, 2024年04月, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, OBJECTIVES: This study aimed to evaluate microtensile bond strength (µTBS) and ultra-morphological characteristic changes in sound dentin resulting from silver diamine fluoride (SDF) when using adhesives. METHODS: Ninety-six extracted human third molars were divided into the SDF-contaminated dentin group and the sound dentin group. In the SDF-contaminated dentin group, 38% SDF was agitated for 1 min, left undisturbed for 2 min, and rinsed with distilled water for 30 s. Then, each group was further subdivided into six subgroups (n = 8 / group) according to application modes: self-etch mode (SE) and etch-and-rinse mode (ER) followed by three adhesives: (1) Scothbond Universal Plus Adhesive (SUP); (2) G2-Bond Universal Adhesive (G2B); and (3) Clearfil Mega Bond 2 (MB2). All specimens were restored with resin composite and were stored in distilled water for 24 h before μTBS testing. Data from the μTBS test were analyzed using Three-way ANOVA and Duncan test (p < 0.05). The morphology of fractured surface and adhesive-dentin interfaces were evaluated by SEM, TEM, and STEM. Further elemental analysis was done by EDX. RESULTS: All SDF-contaminated dentin groups demonstrated significantly lower μTBS than sound dentin groups. All ER groups had higher μTBS than SE groups, except for G2B in the sound dentin group. STEM/EDX revealed an SDF-dentin-reacted layer in the SDF-contaminated dentin group. SIGNIFICANCE: SDF had an adverse effect on adhesives. Additionally, ER mode is preferable when bonded to SDF-contaminated dentin. A calcium and fluoride-contained layer was observed in all SDF-contaminated dentin.

Hyaluronic Acid Induction Promotes the Differentiation of Human Neural Crest-like Cells into Periodontal Ligament Stem-like Cells
M. Anas Alhasan, Atsushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Hideki Sugii, Taiga Ono, Keita Ipposhi, Kozue Yamashita, Bara Mardini, Fumiko Minowa, Hidefumi Maeda
Cells, 12, 23, 2023年12月
研究論文（学術雑誌）, Periodontal ligament (PDL) stem-like cells (PDLSCs) are promising for regeneration of the periodontium because they demonstrate multipotency, high proliferative capacity, and the potential to regenerate bone, cementum, and PDL tissue. However, the transplantation of autologous PDLSCs is restricted by limited availability. Since PDLSCs are derived from neural crest cells (NCs) and NCs persist in adult PDL tissue, we devised to promote the regeneration of the periodontium by activating NCs to differentiate into PDLSCs. SK-N-SH cells, a neuroblastoma cell line that reportedly has NC-like features, seeded on the extracellular matrix of PDL cells for 2 weeks, resulted in the significant upregulation of PDL marker expression. SK-N-SH cell-derived PDLSCs (SK-PDLSCs) presented phenotypic characteristics comparable to induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived PDLSCs (iPDLSCs). The expression levels of various hyaluronic acid (HA)-related genes were upregulated in iPDLSCs and SK-PDLSCs compared with iPSC-derived NCs and SK-N-SH cells, respectively. The knockdown of CD44 in SK-N-SH cells significantly inhibited their ability to differentiate into SK-PDLSCs, while low-molecular HA (LMWHA) induction enhanced SK-PDLSC differentiation. Our findings suggest that SK-N-SH cells could be applied as a new model to induce the differentiation of NCs into PDLSCs and that the LMWHA–CD44 relationship is important for the differentiation of NCs into PDLSCs.

Effects of Short-Term Exposure of Chloramine-T Solution on the Characteristics of Light-Cured and Chemical-Cured Adhesives
Yunqing Liu, Norihito Sakaguchi, Masahiro Iijima, Md Refat Readul Islam, Jiayuan Zhang, Rafiqul Islam, Monica Yamauti, Hidehiko Sano, Atsushi Tomokiyo
Polymers, 15, 19, 2023年10月
研究論文（学術雑誌）, This study evaluated the effect of a 0.5% chloramine T solution on a chemical-cured universal adhesive by comparing the light-cured, one-step, self-etch adhesive for the bonding performance, mechanical properties, and resin–dentin interfacial characteristics. Caries-free human molars were randomly assigned into eight groups based on the bonding systems employed (Bond Force II, BF and Bondmer Lightless, BL), the immersion solutions used before bonding (0.5% chloramine T solution and distilled water), and the immersion durations (5 and 60 min). Microtensile bond strength (μTBS), nanoleakage evaluation, and nanoindentation tests were performed, and the surface morphology of the resin–dentin interface was examined using a focus ion beam/scanning ion microscopy system. Immersion in chloramine-T for 5 min significantly decreased the μTBS of Bondmer Lightless (from 22.62 to 12.87 MPa) compared with that in distilled water. Moreover, there was also a decreasing trend after immersing in chloramine-T for 60 min (from 19.11 to 13.93 MPa). Chloramine T was found to have no effect on the hardness, elastic modulus, or morphological characteristics of the ion-beam milled resin–dentin interfacial surfaces in the tested adhesives, suggesting that chloramine T might reduce the bond strength by interfering with the interaction and the sealing between the adhesive resin and dentin in the chemical-cured universal adhesive, albeit without affecting the mechanical properties.

Constructing heterogeneous single-cell landscape and identifying microenvironment molecular characteristics of primary and lymphatic metastatic head and neck squamous cell carcinoma.
Jiayuan Zhang, Yunqing Liu, Lianheng Xia, Jia Zhen, Jie Gao, Tomokiyo Atsushi
Computers in biology and medicine, 165, 107459, 107459, 2023年10月, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, BACKGROUND: Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) accounts for more than half of head and neck tumors, roughly 90%. This study focused on constructing the heterogeneous landscape using single-cell and bulk transcriptomic data to identify molecular characteristics of the microenvironment in primary and lymphatic metastatic head and neck squamous carcinomas. METHOD: The study enrolled 23 HNSCC samples with scRNA-seq data and 546 HNSCC samples from TCGA. We used Monocle to sort the cells and used CellPhoneDB to explore the cell-cell interactions. Infercnv, which was used to infer cells with apparent copy number variation based on single-cell sequencing transcriptome data. We re-evaluated HNSCC bulk RNA transcriptome data to characterize the functions of different cell types in shaping the immune microenvironment of HNSCC. RESULTS: We combined genealogical reconstruction, CNV inference, and cellular interactions to uncover the characteristics of distinct cell populations in different disease states, differences in cancer and immune cell lineages of differentiation trajectories, and interactions between non-immune and immune cell. PD-1 and PD-L1/PD-L2 expressed extremely rare in T cells, the immune checkpoint molecule KLRB1-CLEC2D achieved a high-level expression. We identified three microenvironment-based HNSCC subtypes associated with the prognosis of HNSCC patients. CONCLUSIONS: In summary, the present study dissected the intratumoral heterogeneity and immune microenvironment of primary and metastatic HNSCC, which is crucial to reveal the mechanisms of resistance to immunotherapy in HNSCC in different disease states and is expected to assist in the further investigation of the mechanism of HNSCC cell metastasis and guide the treatment of clinical patients.

Dopamine is involved in reparative dentin formation through odontoblastic differentiation of dental pulp stem cells.
Shoko Fujino, Sayuri Hamano, Atsushi Tomokiyo, Risa Sugiura, Daiki Yamashita, Daigaku Hasegawa, Hideki Sugii, Shinsuke Fujii, Tomohiro Itoyama, Hirofumi Miyaji, Hidefumi Maeda
Scientific reports, 13, 1, 5668, 5668, 2023年04月06日, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Conventional direct pulp-capping materials induce pulp cells to secrete various biomolecules in pulp tissues that promote reparative dentin formation through induction of odontoblastic differentiation of dental pulp stem cells (DPSCs). However, these biomolecules sometimes induce bone-like dentin with poor sealing properties. Therefore, exploration of biomolecules that allow tight sealing by tubular reparative dentin is required. We recently reported that dopamine (DA) is involved in dentinogenesis. Hence, we investigated the effect of DA on odontoblastic differentiation of DPSCs and reparative dentin formation. Both tyrosine hydroxylase (TH), a DA synthetase, and DA were expressed in odontoblast-like cells in vivo. In vitro, their expression was increased during odontoblastic differentiation of DPSCs. Furthermore, TH-overexpressing DPSCs had promoted odontoblastic differentiation and DA production. Moreover, DA stimulation promoted their differentiation and induced tubular reparative dentin. These results suggest that DA produced by TH is involved in odontoblastic differentiation of DPSCs and has an inductive capacity for reparative dentin formation similar to primary dentin. This study may lead to the development of therapy to preserve vital pulp tissues.

Current Application of iPS Cells in the Dental Tissue Regeneration.
Sayuri Hamano, Risa Sugiura, Daiki Yamashita, Atsushi Tomokiyo, Daigaku Hasegawa, Hidefumi Maeda
Biomedicines, 10, 12, 2022年12月16日, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, When teeth and periodontal tissues are severely damaged by severe caries, trauma, and periodontal disease, such cases may be subject to tooth extraction. As tooth loss leads to the deterioration of quality of life, the development of regenerative medicine for tooth and periodontal tissue is desired. Induced pluripotent stem cells (iPS cells) are promising cell resources for dental tissue regeneration because they offer high self-renewal and pluripotency, along with fewer ethical issues than embryonic stem cells. As iPS cells retain the epigenetic memory of donor cells, they have been established from various dental tissues for dental tissue regeneration. This review describes the regeneration of dental tissue using iPS cells. It is important to mimic the process of tooth development in dental tissue regeneration using iPS cells. Although iPS cells had safety issues in clinical applications, they have been overcome in recent years. Dental tissue regeneration using iPS cells has not yet been established, but it is expected in the future.

Decorin Promotes Osteoblastic Differentiation of Human Periodontal Ligament Stem Cells.
Orie Adachi, Hideki Sugii, Tomohiro Itoyama, Shoko Fujino, Hiroshi Kaneko, Atsushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Daigaku Hasegawa, Junko Obata, Shinichiro Yoshida, Masataka Kadowaki, Risa Sugiura, Mhd Safwan Albougha, Hidefumi Maeda
Molecules (Basel, Switzerland), 27, 23, 2022年11月25日, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The aim of this study is to clarify the biological functions of decorin (DCN) in the healing and regeneration of wounded periodontal tissue. We investigated the expression pattern of DCN during the healing of wounded periodontal tissue in rats by immunohistochemistry and the effects of DCN on the osteoblastic differentiation of human periodontal ligament (PDL) stem cells (HPDLSCs) and preosteoblasts by Alizarin red S staining, quantitative reverse transcription-polymerase chain reactions, and western blotting. The expression of DCN was increased around the wounded PDL tissue on day 5 after surgery compared with the nonwounded PDL tissue, whereas its expression was not changed in the osteoblastic layer around the wounded alveolar bone. Furthermore, DCN promoted the osteoblastic differentiation of HPDLSCs, but it did not affect the osteoblastic differentiation of preosteoblasts. ERK1/2 phosphorylation was upregulated during the DCN-induced osteoblastic differentiation of HPDLSCs. DCN did not affect proliferation, migration, or the PDL-related gene expression of HPDLSCs. In conclusion, this study demonstrates that DCN has a role in the healing of wounded periodontal tissue. Furthermore, DCN secreted from PDL cells may contribute to bone healing by upregulating osteoblastic differentiation through ERK1/2 signaling in HPDLSCs, indicating a therapeutic effect of DCN in periodontal tissue regeneration.

Involvement of M1/M2 Macrophage Polarization in Reparative Dentin Formation.
Masataka Kadowaki, Shinichiro Yoshida, Tomohiro Itoyama, Atsushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Daigaku Hasegawa, Hideki Sugii, Hiroshi Kaneko, Risa Sugiura, Hidefumi Maeda
Life (Basel, Switzerland), 12, 11, 2022年11月07日, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, In cases in which dental pulp tissue is accidentally exposed, direct pulp capping is often performed to induce reparative dentin formation. Although macrophages are essential for the inflammatory response and tissue repair, the emergence pattern and the role of macrophages in dental pulp tissue have not been clarified. Here, we investigated the emergence of M1/M2 macrophages in dental pulp tissue after a direct pulp capping and the effects of M2 macrophages on odontoblastic differentiation of the dental pulp stem cell (DPSC) clones. The emergence of macrophages in dental pulp tissue was investigated using a rat direct pulp capping model. Alizarin Red S staining and quantitative RT-PCR was performed to examine the effect of M2 macrophages on the mineralization and odontoblastic differentiation of DPSC clones. Immunohistochemical staining revealed that M1 macrophages were detected in dental pulp tissue after treatment and increased in number at three days after treatment. However, M2 macrophages gradually increased in number in dental pulp tissue after treatment, with the highest level recorded at seven days post-operation. Additionally, conditioned medium from M2 macrophages induced odontoblast-like differentiation of DPSC clones. These results suggest that macrophages play a role in the inflammatory response and reparative dentin formation after dental pulp exposure.

Iodine potassium iodideがWhite Mineral Trioxide Aggregateの表面性状および機械的強度に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
山下梢, 友清淳, 小野太雅, 一法師啓太, 濱野さゆり, 杉井英樹, 吉田晋一郎, 糸山知宏, 前田英史
日歯内療誌, 2022年11月, ［査読有り］, ［招待有り］, ［国際誌］
日本語

PAX9 Is Involved in Periodontal Ligament Stem Cell-like Differentiation of Human-Induced Pluripotent Stem Cells by Regulating Extracellular Matrix
Sugiura, Risa; Hamano, Sayuri; Tomokiyo, Atsushi; Hasegawa, Daigaku; Yoshida, Shinichiro; Sugii, Hideki; Fujino, Shoko; Adachi, Orie; Kadowaki, Masataka; Yamashita, Daiki; Maeda, Hidefumi
BIOMEDICINES, 10, 10, 2022年10月, ［査読有り］, ［招待有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Periodontal ligament stem cells (PDLSCs) play central roles in periodontal ligament (PDL) tissue homeostasis, repair, and regeneration. Previously, we established a protocol to differentiate human-induced pluripotent stem cell-derived neural crest-like cells (iNCs) into PDLSC-like cells (iPDLSCs) using human PDL cell-derived extracellular matrix (ECM). However, it remained unclear what factors principally regulate the differentiation of iNCs into iPDLSCs. In this study, we aimed to identify the transcription factor regulating production of human PDL cell-derived ECM, which is responsible for the generation of iPDLSCs. We cultured iNCs on ECMs of two human PDL cell lines (HPDLC-3S and HPDLC-3U) and of human dermal fibroblasts (HDF). iNCs cultured on HPDLC-3U demonstrated higher iPDLSC-associated gene expression and mesenchymal differentiation capacity than cells cultured on HDF or HPDLC-3S. The transcription factor PAX9 was highly expressed in HPDLC-3U compared with HDF and HPDLC-3S. iNCs cultured on siPAX9-transfected HPDLC-3U displayed downregulation of iPDLSC-associated marker expression and adipocytic differentiation capacity relative to controls. Our findings suggest that PAX9 is one of the transcription factors regulating ECM production in human PDL cells, which is responsible for the differentiation of iNCs into iPDLSCs.

シリンジ洗浄法および音波洗浄法におけるスミヤー層除去効果ならびに象牙質浸食作用の比較–根管洗浄剤の使用順序および根管洗浄時間が与える影響について–
倉富覚, 友清淳, 吉田晋一郎, 前田英史
日歯内療誌, 43, 3, 164, 171, (一社)日本歯内療法学会, 2022年09月, ［査読有り］, ［招待有り］, ［国際誌］
日本語, 根管拡大を行ったヒト単根下顎前歯抜去歯60本に対して、根管洗浄時に洗浄針を装着したシリンジを用いるシリンジ洗浄法と、音波振動で根管洗浄剤を攪拌するEDDY洗浄法を行い、洗浄剤の使用順序と洗浄時間がスミヤー層除去効果と象牙質侵食作用に及ぼす影響について検討した。エチレンジアミン四酢酸(EDTA)と次亜塩素酸ナトリウム(NaClO)を用いて30秒間、60秒間、120秒間根管洗浄を行った後、走査型電子顕微鏡にてスミヤー層の残存状態と象牙質侵食状態をスコア化した。その結果、EDDYにてEDTAとNaClOを各々60秒間攪拌すると歯冠側から根尖側までのスミヤー層を除去できたが、侵食スコアはEDTAを先に使用した方が有意に高かった。象牙質侵食の発生を抑制し、根管全体のスミヤー層を除去するためには、EDDYにてNaClOを60秒間攪拌後、EDTAを60秒間攪拌する洗浄法が望ましいと考えられた。

歯科保存学における分野内融合研究 バイオミメティクスを基盤とした歯周組織再生療法、直接覆髄剤、およびバイオハイブリッドインプラント創出の試み
友清 淳
日本歯科保存学雑誌, 65, 2, 109, 114, (NPO)日本歯科保存学会, 2022年04月
日本語

Inhibition of c-Jun N-terminal kinase signaling promotes osteoblastic differentiation of periodontal ligament stem cells and induces regeneration of periodontal tissues
Kaneko, Hiroshi; Hasegawa, Daigaku; Itoyama, Tomohiro; Yoshida, Shinichiro; Tomokiyo, Atsushi; Hamano, Sayuri; Sugii, Hideki; Maeda, Hidefum
ARCHIVES OF ORAL BIOLOGY, 134, 105323, 105323, 2022年02月, ［査読有り］, ［招待有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, OBJECTIVES: Few clinical treatments to regenerate periodontal tissue lost due to severe endodontic and periodontal disease have yet been developed. Therefore, the development of new treatment methods for the regeneration of periodontal tissue is expected. The purpose of this study was to investigate the effects of a c-Jun N-terminal kinase (JNK) inhibitor, SP600125, on the osteoblastic differentiation of periodontal ligament stem cells (PDLSCs) in vitro, and the function of SP600125 on the regeneration of alveolar bone in vivo. DESIGN: Alizarin red S staining, quantitative RT-PCR, and western blotting analysis was performed to determine whether SP600125 affects osteoblastic differentiation of human PDLSCs (HPDLSCs) and bone-related intracellular signaling. The effect of SP600125 on the regeneration of alveolar bone was assessed by using a rat periodontal defect model. The healing of periodontal defects was evaluated using micro-CT scans and histological analysis. RESULTS: SP600125 promoted the osteoblastic differentiation such as Alizarin red S-positive mineralized nodule formation and the expression of osteoblast-related genes in HPDLSCs under osteogenic conditions. In addition, this inhibitor upregulated the BMP2 expression and the phosphorylation of Smad1/5/8 in HPDLSCs under the same conditions. The inhibition of Smad1/5/8 signaling by LDN193189 suppressed the SP600125-induced osteoblastic differentiation of HPDLSCs. Furthermore, the application of SP600125 promoted the regeneration of not only alveolar bone but also PDL tissue in periodontal defects. CONCLUSION: This study suggested that inhibition of JNK signaling promotes the osteoblastic differentiation of HPDLSCs through BMP2-Smad1/5/8 signaling, leading to the regeneration of periodontal tissues such as alveolar bone and PDL tissue.

Activin A Promotes Osteoblastic Differentiation of Human Preosteoblasts through the ALK1-Smad1/5/9 Pathway
Sugii, Hideki; Albougha, Mhd Safwan; Adachi, Orie; Tomita, Hiroka; Tomokiyo, Atsushi; Hamano, Sayuri; Hasegawa, Daigaku; Yoshida, Shinichiro; Itoyama, Tomohiro; Maeda, Hidefumi
INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES, 22, 24, 2021年12月, ［査読有り］, ［招待有り］, ［国際誌］
英語

Mineral trioxide aggregate immersed in sodium hypochlorite reduce the osteoblastic differentiation of human periodontal ligament stem cells.
Kozue Yamashita, Atsushi Tomokiyo, Taiga Ono, Keita Ipposhi, M Anas Alhasan, Akira Tsuchiya, Sayuri Hamano, Hideki Sugii, Shinichiro Yoshida, Tomohiro Itoyama, Hidefumi Maeda
Scientific reports, 11, 1, 22091, 22091, 2021年11月11日, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, White mineral trioxide aggregate (WMTA) is a root canal treatment material, which is known to exhibit a dark brown color when in contact with sodium hypochlorite solution (NaOCl). This study aimed to investigate the effects of NaOCl on the surface properties of WMTA discs and WMTA-induced osteoblastic differentiation of periodontal ligament stem cells (PDLSCs). Mixed WMTA (ProRoot MTA) was filled into the molds to form WMTA discs. These discs were immersed in distilled water (D-WMTA) or 5% NaOCl (Na-WMTA). Their surface structures and Ca2+ release level was investigated. Moreover, they were cultured with a clonal human PDLSC line (line 1-17 cells). The main crystal structures of Na-WMTA were identical to the structures of D-WMTA. Globular aggregates with polygonal and needle-like crystals were found on D-WMTA and Na-WMTA, which included Ca, Si, Al, C and O. However, many amorphous structures were also identified on Na-WMTA. These structures consisted of Na and Cl, but did not include Ca. NaOCl immersion also reduced Ca2+ release level from whole WMTA discs. Line 1-17 cells cultured with D-WMTA formed many mineralized nodules and exhibited high expression levels of osteoblast-related genes. However, cells incubated with Na-WMTA generated a small number of nodules and showed low expression levels of osteoblast-related genes. These results indicated that NaOCl reduced Ca2+ release from WMTA by generating amorphous structures and changing its elemental distribution. NaOCl may also partially abolish the ability of WMTA to stimulate osteoblastic differentiation of PDLSCs.

Development of a novel direct dental pulp-capping material using 4-META/MMA-TBB resin with nano hydroxyapatite.
Shinichiro Yoshida, Hideki Sugii, Tomohiro Itoyama, Masataka Kadowaki, Daigaku Hasegawa, Atsushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Keita Ipposhi, Kozue Yamashita, Hidefumi Maeda
Materials science & engineering. C, Materials for biological applications, 130, 112426, 112426, 2021年11月, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, In the case of dental pulp exposure, direct pulp capping is often performed to preserve vital dental pulp tissue. Numerous studies regarding the development of direct pulp-capping materials have been conducted, but materials with an appropriate sealing ability, which induce dense reparative dentin formation, have not been developed. Although nano hydroxyapatite (naHAp) is a bone-filling material with bioactivity and biocompatibility, the inductive effects of naHAp on reparative dentin formation remain unclear. In the present study, the effects of dental adhesive material 4-methacryloxyethyl trimellitate anhydride/methyl methacrylate tri-n-butylborane [4-META/MMA-TBB or Super-bond (SB)], which included 10%, 30%, and 50% naHAp (naHAp/SB) on odontoblastic differentiation of dental pulp stem cells (DPSCs) and reparative dentin formation were investigated. Scanning electron microscopy (SEM) and energy dispersive X-ray spectrometer analysis were performed to verify the existence of naHAp particles on the surface of naHAp/SB discs. The tensile adhesive strength of naHAp/SB was measured using a universal testing machine. As a result, 10% naHAp/SB and 30% naHAp/SB showed almost the same tensile adhesive strength as SB but 50% naHAp/SB showed significantly lower than the other experimental group. WST-1 proliferation assay and SEM analysis revealed that naHAp/SB did not affect the proliferation of DPSCs. Calcium release assay, quantitative RT-PCR, and western blotting analysis demonstrated that naHAp/SB did not release calcium ion but 30% naHAp/SB increased the expression of calcium-sensing receptor (CaSR) in DPSCs. Additionally, quantitative RT-PCR, western blotting analysis, Alizarin Red S- and von Kossa staining revealed that 30% naHAp/SB induced odontoblastic differentiation of DPSCs, which was inhibited by a MEK/ERK inhibitor and CaSR antagonist. Furthermore, 30% naHAp/SB promoted dense reparative dentin formation in an experimentally-formed rat dental pulp exposure model. These findings suggest that 30% naHAp/SB can be used as an ideal direct pulp capping material.

Iodine potassium iodideがWhite Mineral Trioxide Aggregateの表面性状および機械的強度に及ぼす影響について
山下 梢, 友清 淳, 小野 太雅, 一法師 啓太, 濱野 さゆり, 杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 糸山 知宏, 前田 英史
日本歯内療法学会雑誌, 42, 3, 181, 187, (一社)日本歯内療法学会, 2021年10月, ［査読有り］, ［国内誌］
日本語, ProRoot Mineral Trioxide Aggregate(MTA)粉と蒸留水(DW)を1:3に練和後、37℃・湿度100%にて24時間硬化させてWMTA discを作製した。tubeの中でDWに24時間浸漬させたdisc(D-WMTA)および2%ヨウ素ヨウ化カリウム(IKI)に24時間浸漬させたdisc(I-WMTA)、浸漬前のWMTA disc(C-WMTA)の表面形態・結晶構造・元素比率をX線回折・走査電子顕微鏡解析およびエネルギー分散型X線分析にて解析し比較した。WMTA discはIKIに浸漬すると黄白色から茶褐色へ変化しtube底部に沈殿物を形成したが、WMTA表面の結晶構造や元素分布に変化は認めなかった。I-WMTAはD-WMTAと比較して機械的強度低下を認め、ウシ胎児血清含有alpha-minimum essential mediumに浸漬すると7日目および28日目のカルシウム溶出量が有意に多かった。WMTAにて穿孔部を封鎖した歯の根管治療を行う場合にはIKIの使用を控えることが望ましい。

Secreted Frizzled-Related Protein 1 Promotes Odontoblastic Differentiation and Reparative Dentin Formation in Dental Pulp Cells
Ipposhi Keita; Tomokiyo Atsushi; Ono Taiga; Yamashita Kozue; Alhasan Muhammad Anas; Hasegawa Daigaku; Hamano Sayuri; Yoshida Shinichiro; Sugii Hideki; Itoyama Tomohiro; Ogawa Marina; Maeda Hidefumi
CELLS, 10, 9, 2021年09月, ［査読有り］, ［招待有り］, ［国際誌］
英語

Characterization of a clonal human periodontal ligament stem cell line exposed to methacrylate resin-, bioactive glass-, or silicon-based root canal sealers
Tomokiyo Atsushi; Hasegawa Daigaku; Ono Taiga; Nagano Ryoko; Ipposhi Keita; Yamashita Kozue; Alhasan M. Anas; Maeda Hidefumi
ODONTOLOGY, 2021年08月, ［査読有り］, ［招待有り］, ［国際誌］
英語

Generation of biohybrid implants using a multipotent human periodontal ligament cell line and bioactive core materials.
Taiga Ono, Atsushi Tomokiyo, Keita Ipposhi, Kozue Yamashita, M Anas Alhasan, Yudai Miyazaki, Yoshihiro Kunitomi, Akira Tsuchiya, Kunio Ishikawa, Hidefumi Maeda
Journal of cellular physiology, 2021年02月19日, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, We aimed to generate periodontal ligament (PDL) tissue-like structures from a multipotent human PDL cell line using three-dimensional (3D) bioprinting technology and to incorporate these structures with bioactive core materials to develop a new biohybrid implant system. After 3D bioprinting, single-cell spheroids were able to form 3D tubular structures (3DTBs). We established three types of complexes using 3DTBs and different core materials: 3DTB-titanium core (TIC), 3DTB-hydroxyapatite core (HAC), and 3DTB without a core material (WOC). The expressions of PDL-, angiogenesis-, cementum-, and bone-related genes were significantly increased in the three complexes compared with monolayer-cultured cells. Abundant collagen fibers and cells positive for the above markers were confirmed in the three complexes. However, more positive cells were detected in HAC than in WOC or TIC. The present results suggest that 3D-bioprinted structures and hydroxyapatite core materials can function similarly to the PDL and may be useful for the development of a new biohybrid implant system.

iPS細胞から歯根膜幹細胞様細胞への分化誘導能を有する転写因子の同定　　　　　　　　　　　　　　　
杉浦 梨紗, 濱野 さゆり, 友清 淳, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, 杉井 英樹, 前田 英史
特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 153回, 99, 99, (NPO)日本歯科保存学会, 2020年11月
日本語

Insight into the Role of Dental Pulp Stem Cells in Regenerative Therapy.
Shinichiro Yoshida, Atsushi Tomokiyo, Daigaku Hasegawa, Sayuri Hamano, Hideki Sugii, Hidefumi Maeda
Biology, 9, 7, 2020年07月09日, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Mesenchymal stem cells (MSCs) have the capacity for self-renewal and multilineage differentiation potential, and are considered a promising cell population for cell-based therapy and tissue regeneration. MSCs are isolated from various organs including dental pulp, which originates from cranial neural crest-derived ectomesenchyme. Recently, dental pulp stem cells (DPSCs) and stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHEDs) have been isolated from dental pulp tissue of adult permanent teeth and deciduous teeth, respectively. Because of their MSC-like characteristics such as high growth capacity, multipotency, expression of MSC-related markers, and immunomodulatory effects, they are suggested to be an important cell source for tissue regeneration. Here, we review the features of these cells, their potential to regenerate damaged tissues, and the recently acquired understanding of their potential for clinical application in regenerative medicine.

Possible function of GDNF and Schwann cells in wound healing of periodontal tissue.
Tomohiro Itoyama, Shinichiro Yoshida, Atsushi Tomokiyo, Daigaku Hasegawa, Sayuri Hamano, Hideki Sugii, Taiga Ono, Shoko Fujino, Hidefumi Maeda
Journal of periodontal research, 2020年06月20日, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, OBJECTIVE: The purpose of this study was to evaluate the function of Schwann cells in wound healing of periodontal tissue. BACKGROUND: In our previous study, glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) promoted the migration of human periodontal ligament (PDL) cells and that GDNF expression increased in wounded periodontal tissue. GDNF reportedly induces the migration of Schwann cell precursors. Schwann cells play a crucial role in the regeneration of peripheral tissues, including bone tissue. However, the role of Schwann cells on periodontal tissue regeneration remains unclear. METHODS: A transwell assay and a WST-1 (water-soluble tetrazolium compound-1) proliferation assay were used to determine whether GDNF promotes the migration and proliferation of Schwann cells, respectively. Quantitative RT-PCR and Alizarin Red S staining were performed to examine the effect of these cells on the differentiation of human preosteoblast (Saos2 cells) using conditioned medium from YST-1 (YST-1-CM). Western blotting analysis was performed to determine whether YST-1-CM activates ERK signaling pathway in Saos2 cells. The expression of Schwann cell markers, S100 calcium-binding protein B (S100-B) and growth associated protein 43 (GAP-43), was determined in normal and wounded periodontal tissue by immunofluorescent staining. RESULTS: Glial cell line-derived neurotrophic factor promoted the migration of YST-1 cells but did not affect the proliferation of YST-1 cells. Saos2 cells cultured with YST-1-CM increased the expression of osteoblastic markers and mineralization. YST-1-CM also induced phosphorylation of ERK1/2 in Saos2 cells. The number of S100-B-immunoreactive cells which also expressed GAP-43 was increased in rat wounded periodontal tissue during healing process. CONCLUSION: The accumulation of Schwann cells in wounded periodontal tissue suggests that they play a significant role in wound healing of this tissue, especially alveolar bone tissue.

Expression and function of dopamine in odontoblasts.
Shoko Fujino, Sayuri Hamano, Atsushi Tomokiyo, Tomohiro Itoyama, Daigaku Hasegawa, Hideki Sugii, Shinichiro Yoshida, Ayako Washio, Aoi Nozu, Taiga Ono, Naohisa Wada, Chiaki Kitamura, Hidefumi Maeda
Journal of cellular physiology, 235, 5, 4376, 4387, 2020年05月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Dopamine (DA) is produced from tyrosine by tyrosine hydroxylase (TH). A recent study has reported that DA promotes the mineralization of murine preosteoblasts. However, the role of DA in odontoblasts has not been examined. Therefore, in this investigation, we researched the expression of TH and DA in odontoblasts and the effects of DA on the differentiation of preodontoblasts (KN-3 cells). Immunostaining showed that TH and DA were intensely expressed in odontoblasts and preodontoblasts of rat incisors and molars. KN-3 cells expressed D1-like and D2-like receptors for DA. Furthermore, DA promoted odontoblastic differentiation of KN-3 cells, whereas an antagonist of D1-like receptors and a PKA signaling blocker, inhibited such differentiation. However, antagonists of D2-like receptors promoted differentiation. These results suggested that DA in preodontoblasts and odontoblasts might promote odontoblastic differentiation through D1-like receptors, but not D2-like receptors, and PKA signaling in an autocrine or paracrine manner and plays roles in dentinogenesis.

Functions of beta2-adrenergic receptor in human periodontal ligament cells.
Sayuri Hamano, Atsushi Tomokiyo, Daigaku Hasegawa, Asuka Yuda, Hideki Sugii, Shinichiro Yoshida, Hiromi Mitarai, Naohisa Wada, Hidefumi Maeda
Journal of cellular biochemistry, 2020年03月01日, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Adrenergic receptors (ARs) are receptors of noradrenalin and adrenalin, of which there are nine different subtypes. In particular, β2 adrenergic receptor (β2-AR) is known to be related to the restoration and maintenance of homeostasis in bone and cardiac tissues; however, the functional role of signaling through β2-AR in periodontal ligament (PDL) tissue has not been fully examined. In this report, we investigated that β2-AR expression in PDL tissues and their features in PDL cells. β2-AR expressed in rat PDL tissues and human PDL cells (HPDLCs) derived from two different patients (HPDLCs-2G and -3S). Rat PDL tissue with occlusal loading showed high β2-AR expression, while its expression was downregulated in that without loading. In HPDLCs, β2-AR expression was increased exposed to stretch loading. The gene expression of PDL-related molecules was investigated in PDL clone cells (2-23 cells) overexpressing β2-AR. Their gene expression and intracellular cyclic adenosine monophosphate (cAMP) levels were also investigated in HPDLCs treated with a specific β2-AR agonist, fenoterol (FEN). Overexpression of β2-AR significantly promoted the gene expression of PDL-related molecules in 2 to 23 cells. FEN led to an upregulation in the expression of PDL-related molecules and increased intracellular cAMP levels in HPDLCs. In both HPDLCs, inhibition of cAMP signaling by using protein kinase A inhibitor suppressed the FEN-induced gene expression of α-smooth muscle actin. Our findings suggest that the occlusal force is important for β2-AR expression in PDL tissue and β2-AR is involved in fibroblastic differentiation and collagen synthesis of PDL cells. The signaling through β2-AR might be important for restoration and homeostasis of PDL tissue.

MEST Regulates the Stemness of Human Periodontal Ligament Stem Cells.
Daigaku Hasegawa, Kana Hasegawa, Hiroshi Kaneko, Shinichiro Yoshida, Hiromi Mitarai, Mai Arima, Atsushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Hideki Sugii, Naohisa Wada, Tamotsu Kiyoshima, Hidefumi Maeda
Stem cells international, 2020, 9672673, 9672673, 2020年, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Periodontal ligament (PDL) stem cells (PDLSCs) have been reported as a useful cell source for periodontal tissue regeneration. However, one of the issues is the difficulty of obtaining a sufficient number of PDLSCs for clinical application because very few PDLSCs can be isolated from PDL tissue of donors. Therefore, we aimed to identify a specific factor that converts human PDL cells into stem-like cells. In this study, microarray analysis comparing the gene profiles of human PDLSC lines (2-14 and 2-23) with those of a cell line with a low differentiation potential (2-52) identified the imprinted gene mesoderm-specific transcript (MEST). MEST was expressed in the cytoplasm of 2-23 cells. Knockdown of MEST by siRNA in 2-23 cells inhibited the expression of stem cell markers, such as CD105, CD146, p75NTR, N-cadherin, and NANOG; the proliferative potential; and multidifferentiation capacity for osteoblasts, adipocytes, and chondrocytes. On the other hand, overexpression of MEST in 2-52 cells enhanced the expression of stem cell markers and PDL-related markers and the multidifferentiation capacity. In addition, MEST-overexpressing 2-52 cells exhibited a change in morphology from a spindle shape to a stem cell-like round shape that was similar to 2-14 and 2-23 cell morphologies. These results suggest that MEST plays a critical role in the maintenance of stemness in PDLSCs and converts PDL cells into PDLSC-like cells. Therefore, this study indicates that MEST may be a therapeutic factor for periodontal tissue regeneration by inducing PDLSCs.

Periodontal Ligament Stem Cells: Regenerative Potency in Periodontium.
Atsushi Tomokiyo, Naohisa Wada, Hidefumi Maeda
Stem cells and development, 28, 15, 974, 985, 2019年08月01日, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Periodontium is consisted of root cementum, bone lining the tooth socket, gingiva facing the tooth, and periodontal ligament (PDL). Its primary functions are support of the tooth and protection of tooth, nerve, and blood vessels from injury by mechanical loading. Severe periodontitis induces the destruction of periodontium and results in a significant cause of tooth loss among adults. Unfortunately, conventional therapies such as scaling and root planning are often only palliative. Therefore, the ultimate goal of the treatment for periodontitis is to restore disrupted periodontium to its original shape and function. Tissue engineering refers to the process of combining cells, scaffolds, and signaling molecules for the production of functional tissues to restore, maintain, and improve damaged organs. The discovery of periodontal ligament stem cells (PDLSCs) highlighted the possibility for development of tissue engineering technology-based therapeutics for disrupted periodontium. PDLSCs are a kind of somatic stem cells that show potential to differentiate into multiple cell types and undergo robust clonal self-renewal. Therefore, PDLSCs are considered a highly promising stem cell population for regenerative therapy in periodontium; however, their rarity prevents the progression of basic and clinical researches. In this review, we summarize recent research advancement and accumulated information regarding the self-renewal capacity, multipotency, and immunomodulatory effect of PDLSCs, as well as their contribution to repair and regeneration of periodontium and other tissues. We also discuss the possibility of PDLSCs for clinical application of regenerative medicine and provide an outline of the genetic approaches to overcome the issue about the rarity of PDLSCs.

R-spondin 2 promotes osteoblastic differentiation of immature human periodontal ligament cells through the Wnt/β-catenin signaling pathway.
Mai Arima, Daigaku Hasegawa, Shinichiro Yoshida, Hiromi Mitarai, Atsushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Hideki Sugii, Naohisa Wada, Hidefumi Maeda
Journal of periodontal research, 54, 2, 143, 153, 2019年04月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, OBJECTIVE: In this study, we measured the expression of R-spondin 2 (RSPO2) in periodontal ligament (PDL) tissue and cells. Further, we examined the effects of RSPO2 on osteoblastic differentiation of immature human PDL cells (HPDLCs). BACKGROUND: R-spondin (RSPO) family proteins are secreted glycoproteins that play important roles in embryonic development and tissue homeostasis through activation of the Wnt/β-catenin signaling pathway. RSPO2, a member of the RSPO family, has been reported to enhance osteogenesis in mice. However, little is known regarding the roles of RSPO2 in PDL tissues. METHODS: Expression of RSPO2 in rat PDL tissue and primary HPDLCs was examined by immunohistochemical and immunofluorescence staining, as well as by semiquantitative RT-PCR. The effects of stretch loading on the expression of RSPO2 and Dickkopf-related protein 1 (DKK1) were assessed by quantitative RT-PCR. Expression of receptors for RSPOs, such as Leucine-rich repeat-containing G-protein-coupled receptors (LGRs) 4, 5, and 6 in immature human PDL cells (cell line 2-14, or 2-14 cells), was investigated by semiquantitative RT-PCR. Mineralized nodule formation in 2-14 cells treated with RSPO2 under osteoblastic inductive condition was examined by Alizarin Red S and von Kossa stainings. Nuclear translocation of β-catenin and expression of active β-catenin in 2-14 cells treated with RSPO2 were assessed by immunofluorescence staining and Western blotting analysis, respectively. In addition, the effect of Dickkopf-related protein 1 (DKK1), an inhibitor of Wnt/β-catenin signaling, was also examined. RESULTS: Rat PDL tissue and HPDLCs expressed RSPO2, and HPDLCs also expressed RSPO2, while little was found in 2-14 cells. Expression of RSPO2 as well as DKK1 in HPDLCs was significantly upregulated by exposure to stretch loading. LGR4 was predominantly expressed in 2-14 cells, which expressed low levels of LGR5 and LGR6. RSPO2 enhanced the Alizarin Red S and von Kossa-positive reactions in 2-14 cells. In addition, DKK1 suppressed nuclear translocation of β-catenin, activation of β-catenin, and increases of Alizarin Red S and von Kossa-positive reactions in 2-14 cells, all of which were induced by RSPO2 treatment. CONCLUSION: RSPO2, which is expressed in PDL tissue and cells, might play an important role in regulating the osteoblastic differentiation of immature human PDL cells through the Wnt/β-catenin signaling pathway.

Wnt5a suppresses osteoblastic differentiation of human periodontal ligament stem cell-like cells via Ror2/JNK signaling.
Daigaku Hasegawa, Naohisa Wada, Shinichiro Yoshida, Hiromi Mitarai, Mai Arima, Atsushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Hideki Sugii, Hidefumi Maeda
Journal of cellular physiology, 233, 2, 1752, 1762, 2018年02月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Wnt5a, a non-canonical Wnt protein, is known to play important roles in several cell functions. However, little is known about the effects of Wnt5a on osteoblastic differentiation of periodontal ligament (PDL) cells. Here, we examined the effects of Wnt5a on osteoblastic differentiation and associated intracellular signaling in human PDL stem/progenitor cells (HPDLSCs). We found that Wnt5a suppressed expression of bone-related genes (ALP, BSP, and Osterix) and alizarin red-positive mineralized nodule formation in HPDLSCs under osteogenic conditions. Immunohistochemical analysis revealed that a Wnt5a-related receptor, receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 2 (Ror2), was expressed in rat PDL tissue. Interestingly, knockdown of Ror2 by siRNA inhibited the Wnt5a-induced downregulation of bone-related gene expression in HPDLSCs. Moreover, Western blotting analysis showed that phosphorylation of the intracellular signaling molecule, c-Jun N-terminal kinase (JNK) was upregulated in HPDLSCs cultured in osteoblast induction medium with Wnt5a, but knockdown of Ror2 by siRNA downregulated the phosphorylation of JNK. We also examined the effects of JNK inhibition on Wnt5a-induced suppression of osteoblastic differentiation of HPDLSCs. The JNK inhibitor, SP600125 inhibited the Wnt5a-induced downregulation of bone-related gene expression in HPDLSCs. Additionally, SP600125 inhibited the Wnt5a-induced suppression of the alizarin red-positive reaction in HPDLSCs. These results suggest that Wnt5a suppressed osteoblastic differentiation of HPDLSCs through Ror2/JNK signaling. Non-canonical Wnt signaling, including Wnt5a/Ror2/JNK signaling, may function as a negative regulator of mineralization, preventing the development of non-physiological mineralization in PDL tissue.

Extracellular Matrix from Periodontal Ligament Cells Could Induce the Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells to Periodontal Ligament Stem Cell-Like Cells.
Sayuri Hamano, Atsushi Tomokiyo, Daigaku Hasegawa, Shinichiro Yoshida, Hideki Sugii, Hiromi Mitarai, Shoko Fujino, Naohisa Wada, Hidefumi Maeda
Stem cells and development, 27, 2, 100, 111, 2018年01月15日, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The periodontal ligament (PDL) plays an important role in anchoring teeth in the bone socket. Damage to the PDL, such as after severe inflammation, can be treated with a therapeutic strategy that uses stem cells derived from PDL tissue (PDLSCs), a strategy that has received intense scrutiny over the past decade. However, there is an insufficient number of PDLSCs within the PDL for treating such damage. Therefore, we sought to induce the differentiation of induced pluripotent stem (iPS) cells into PDLSCs as an initial step toward PDL therapy. To this end, we first induced iPS cells into neural crest (NC)-like cells. We then captured the p75 neurotrophic receptor-positive cells (iPS-NC cells) and cultured them on an extracellular matrix (ECM) produced by human PDL cells (iPS-NC-PDL cells). These iPS-NC-PDL cells showed reduced expression of embryonic stem cell and NC cell markers as compared with iPS and iPS-NC cells, and enrichment of mesenchymal stem cell markers. The cells also had a higher proliferative capacity, multipotency, and elevated expression of PDL-related markers than iPS-NC cells cultured on fibronectin and laminin (iPS-NC-FL cells) or ECM produced by human skin fibroblast cells (iPS-NC-SF cells). Overall, we present a culture method to produce high number of PDLSC-like cells from iPS cells as a first step toward a strategy for PDL regeneration.

Senescence and odontoblastic differentiation of dental pulp cells.
Aoi Nozu, Sayuri Hamano, Atsushi Tomokiyo, Daigaku Hasegawa, Hideki Sugii, Shinichiro Yoshida, Hiromi Mitarai, Shuntaro Taniguchi, Naohisa Wada, Hidefumi Maeda
Journal of cellular physiology, 234, 1, 849, 859, 2018年01月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Cellular senescence has been suggested to be involved in physiological changes of cytokine production. Previous studies showed that the concentration of tumor necrosis factor-α (TNF-α) is higher in the blood of aged people compared with that of young people. So far, the precise effects of TNF-α on the odontoblastic differentiation of pulp cells have been controversial. Therefore, we aimed to clarify how this cytokine affected pulp cells during aging. Human dental pulp cells (HDPCs) were cultured until reaching the plateau of their growth, and the cells were isolated at actively (young HDPCs; yHDPCs) or inactively (senescent HDPCs; sHDPCs) proliferating stages. sHDPCs expressed senescence-related molecules while yHDPCs did not. When these HDPCs were cultured in an odontoblast-inductive medium, both young and senescent cells showed mineralization, but mineralization in sHDPCs was lower compared with yHDPCs. However, the administration of TNF-α to this culture medium altered these responses: yHDPCs showed downregulated mineralization, while sHDPCs exhibited significantly increased mineralization. Furthermore, the expression of tumor necrosis factor receptor 1 (TNFR1), a receptor of TNF-α, was significantly upregulated in sHDPCs compared with yHDPCs. Downregulation of TNFR1 expression led to decreased mineralization of TNF-α-treated sHDPCs, whereas restored the reduction in TNF-α-treated yHDPCs. These results suggested that sHDPCs preserved the odontoblastic differentiation capacity and TNF-α promoted odontoblastic differentiation of HDPCs with the progress of their population doublings through increased expression of TNFR1. Thus, TNF-α might exert a different effect on the odontoblastic differentiation of HDPCs depending on their proliferating activity. In addition, the calcification of pulp chamber with age may be related with increased reactivity of pulp cells to TNF-α.

Detection, Characterization, and Clinical Application of Mesenchymal Stem Cells in Periodontal Ligament Tissue.
Atsushi Tomokiyo, Shinichiro Yoshida, Sayuri Hamano, Daigaku Hasegawa, Hideki Sugii, Hidefumi Maeda
Stem cells international, 2018, 5450768, 5450768, 2018年, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Mesenchymal stem cells (MSCs) are a kind of somatic stem cells that exert a potential to differentiate into multiple cell types and undergo robust clonal self-renewal; therefore, they are considered as a highly promising stem cell population for tissue engineering. MSCs are identified in various adult organs including dental tissues. Periodontal ligament (PDL) is a highly specialized connective tissue that surrounds the tooth root. PDL also contains MSC population, and many researchers have isolated them and performed their detailed characterization. Here, we review the current understanding of the features and functions of MSC population in PDL tissues and discuss their possibility for the application of PDL regeneration.

Transgelin mediates transforming growth factor-β1-induced proliferation of human periodontal ligament cells
H. Mitarai, N. Wada, D. Hasegawa, S. Yoshida, M. Sonoda, A. Tomokiyo, S. Hamano, S. Serita, H. Mizumachi, H. Maeda
Journal of Periodontal Research, 52, 6, 984, 993, 2017年12月
研究論文（学術雑誌）, Background and Objective: Human periodontal ligament cells (HPDLCs) express transforming growth factor-β1 (TGF-β1) that regulates differentiation and proliferation, and plays key roles in homeostasis of PDL tissue. Transgelin is a cytoskeleton-associated protein with an Smad-binding element in its gene promoter region. In this study, we examined the localization and potential function of transgelin in PDL tissue and cells. Material and Methods: Microarray analysis of HPDLC lines (2-14, 2-23 and 2-52) was performed. Expression of transgelin in HPDLCs was examined by quantitative reverse transcription–polymerase chain reaction, immunofluorescence staining and western blot analysis. Effects of TGF-β1 and its signaling inhibitor, SB431542, on transgelin expression in HPDLCs were examined by western blot analysis. The effects of transgelin knockdown by small interfering RNA (siRNA) on HPDLC proliferation stimulated by TGF-β1 were assessed by WST-1 assay. Results: In microarray and quantitative reverse transcription–polymerase chain reaction analyses, the expression levels of transgelin (TAGLN) in 2-14 and 2-23 cells, which highly expressed PDL markers such as periostin (POSTN), tissue non-specific alkaline phosphatase (ALPL), α-smooth muscle actin (ACTA2) and type I collagen A1 (COL1A1), was significantly higher than those in 2-52 cells that expressed PDL markers weakly. Immunohistochemical and immunofluorescence staining revealed expression of transgelin in rat PDL tissue and HPDLCs. In HPDLCs, TGF-β1 treatment upregulated transgelin expression, whereas inhibition of the type 1 TGF-β1 receptor by SB431542 suppressed this upregulation. Furthermore, TAGLN siRNA transfection did not promote the proliferation of HPDLCs treated with TGF-β1. The expression levels of CCNA2 and CCNE1, which regulate DNA synthesis and mitosis through the cell cycle, were also not upregulated in HPDLCs transfected with TAGLN siRNA. Conclusion: Transgelin is expressed in PDL tissue and might have a role in HPDLC proliferation induced by TGF-β1 stimulation.

Calcium-sensing receptor-ERK signaling promotes odontoblastic differentiation of human dental pulp cells.
Hiroyuki Mizumachi, Shinichiro Yoshida, Atsushi Tomokiyo, Daigaku Hasegawa, Sayuri Hamano, Asuka Yuda, Hideki Sugii, Suguru Serita, Hiromi Mitarai, Katsuaki Koori, Naohisa Wada, Hidefumi Maeda
Bone, 101, 191, 201, 2017年08月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Activation of the G protein-coupled calcium-sensing receptor (CaSR) has crucial roles in skeletal development and bone turnover. Our recent study has identified a role for activated CaSR in the osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells. Furthermore, odontoblasts residing inside the tooth pulp chamber play a central role in dentin formation. However, it remains unclear how CaSR activation affects the odontoblastic differentiation of human dental pulp cells (HDPCs). We have investigated the odontoblastic differentiation of HDPCs exposed to elevated levels of extracellular calcium (Ca) and strontium (Sr), and the contribution of CaSR and the L-type voltage-dependent calcium channel (L-VDCC) to this process. Immunochemical staining of rat dental pulp tissue demonstrated that CaSR was expressed at high levels in the odontoblastic layer, moderate levels in the sublayer, and low levels in the central pulp tissue. Although normal HDPCs expressed low levels of CaSR, stimulation with Ca or Sr promoted both CaSR expression and odontoblastic differentiation of HDPCs along with increased expression of odontoblastic makers. These effects were inhibited by treatment with a CaSR antagonist, whereas treatment with an L-VDCC inhibitor had no effect. Additionally, knockdown of CaSR with siRNA suppressed odontoblastic differentiation of Ca- and Sr-treated HDPCs. ERK1/2 phosphorylation was observed in Ca- and Sr-treated HDPCs, whereas CaSR antagonist treatment or CaSR knockdown blocked ERK1/2 phosphorylation. Furthermore, inhibition of ERK1/2 suppressed mineralization of Ca- and Sr-treated HDPCs. These results suggest that elevated concentrations of extracellular Ca and Sr induce odontoblastic differentiation of HDPCs through CaSR activation and the ERK1/2 phosphorylation.

Transforming growth factor-β-induced gene product-h3 inhibits odontoblastic differentiation of dental pulp cells.
Suguru Serita, Atsushi Tomokiyo, Daigaku Hasegawa, Sayuri Hamano, Hideki Sugii, Shinichiro Yoshida, Hiroyuki Mizumachi, Hiromi Mitarai, Satoshi Monnouchi, Naohisa Wada, Hidefumi Maeda
Archives of oral biology, 78, 135, 143, 2017年06月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, OBJECTIVE: The aim of this study was to investigate transforming growth factor-β-induced gene product-h3 (βig-h3) expression in dental pulp tissue and its effects on odontoblastic differentiation of dental pulp cells (DPCs). DESIGN: A rat direct pulp capping model was prepared using perforated rat upper first molars capped with mineral trioxide aggregate cement. Human DPCs (HDPCs) were isolated from extracted teeth. βig-h3 expression in rat dental pulp tissue and HDPCs was assessed by immunostaining. Mineralization of HDPCs was assessed by Alizarin red-S staining. Odontoblast-related gene expression in HDPCs was analyzed by quantitative RT-PCR. RESULTS: Expression of βig-h3 was detected in rat dental pulp tissue, and attenuated by direct pulp capping, while expression of interleukin-1β and tumor necrosis factor-α was increased in exposed pulp tissue. βig-h3 expression was also detected in HDPCs, with reduced expression during odontoblastic differentiation. The above cytokines reduced βig-h3 expression in HDPCs, and promoted their mineralization. Recombinant βig-h3 inhibited the expression of odontoblast-related genes and mineralization of HDPCs, while knockdown of βig-h3 gene expression promoted the expression of odontoblast-related genes in HDPCs. CONCLUSIONS: The present findings suggest that βig-h3 in DPCs may be involved in reparative dentin formation and that its expression is likely to negatively regulate this process.

GDNF From Human Periodontal Ligament Cells Treated With Pro-Inflammatory Cytokines Promotes Neurocytic Differentiation of PC12 Cells.
Shinichiro Yoshida, Naohide Yamamoto, Naohisa Wada, Atsushi Tomokiyo, Daigaku Hasegawa, Sayuri Hamano, Hiromi Mitarai, Satoshi Monnouchi, Asuka Yuda, Hidefumi Maeda
Journal of cellular biochemistry, 118, 4, 699, 708, 2017年04月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) is known to mediate multiple biological activities such as promotion of cell motility and proliferation, and morphogenesis. However, little is known about its effects on periodontal ligament (PDL) cells. Recently, we reported that GDNF expression is increased in wounded rat PDL tissue and human PDL cells (HPDLCs) treated with pro-inflammatory cytokines. Here, we investigated the associated expression of GDNF and the pro-inflammatory cytokine interleukin-1 beta (IL-1β) in wounded PDL tissue, and whether HPDLCs secrete GDNF which affects neurocytic differentiation. Rat PDL cells near the wounded area showed intense immunoreactions against an anti-GDNF antibody, where immunoreactivity was also increased against an anti-IL-1β antibody. Compared with untreated cells, HPDLCs treated with IL-1β or tumor necrosis factor-alpha showed an increase in the secretion of GDNF protein. Conditioned medium of IL-1β-treated HPDLCs (IL-1β-CM) increased neurite outgrowth of PC12 rat adrenal pheochromocytoma cells. The expression levels of two neural regeneration-associated genes, growth-associated protein-43 (Gap-43), and small proline-rich repeat protein 1A (Sprr1A), were also upregulated in IL-1β-CM-treated PC12 cells. These stimulatory effects of IL-1β-CM were significantly inhibited by a neutralizing antibody against GDNF. In addition, U0126, a MEK inhibitor, inhibited GDNF-induced neurite outgrowth of PC12 cells. These findings suggest that an increase of GDNF in wounded PDL tissue might play an important role in neural regeneration probably via the MEK/ERK signaling pathway. J. Cell. Biochem. 118: 699-708, 2017. © 2016 Wiley Periodicals, Inc.

Generation of Neural Crest-Like Cells From Human Periodontal Ligament Cell-Derived Induced Pluripotent Stem Cells.
Atsushi Tomokiyo, Kim Hynes, Jia Ng, Danijela Menicanin, Esther Camp, Agnes Arthur, Stan Gronthos, Peter Mark Bartold
Journal of cellular physiology, 232, 2, 402, 416, 2017年02月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Neural crest cells (NCC) hold great promise for tissue engineering, however the inability to easily obtain large numbers of NCC is a major factor limiting their use in studies of regenerative medicine. Induced pluripotent stem cells (iPSC) are emerging as a novel candidate that could provide an unlimited source of NCC. In the present study, we examined the potential of neural crest tissue-derived periodontal ligament (PDL) iPSC to differentiate into neural crest-like cells (NCLC) relative to iPSC generated from a non-neural crest derived tissue, foreskin fibroblasts (FF). We detected high HNK1 expression during the differentiation of PDL and FF iPSC into NCLC as a marker for enriching for a population of cells with NCC characteristics. We isolated PDL iPSC- and FF iPSC-derived NCLC, which highly expressed HNK1. A high proportion of the HNK1-positive cell populations generated, expressed the MSC markers, whilst very few cells expressed the pluripotency markers or the hematopoietic markers. The PDL and FF HNK1-positive populations gave rise to smooth muscle, neural, glial, osteoblastic and adipocytic like cells and exhibited higher expression of smooth muscle, neural, and glial cell-associated markers than the PDL and FF HNK1-negative populations. Interestingly, the HNK1-positive cells derived from the PDL-iPSC exhibited a greater ability to differentiate into smooth muscle, neural, glial cells and adipocytes, than the HNK1-positive cells derived from the FF-iPSC. Our work suggests that HNK1-enriched NCLC from neural crest tissue-derived iPSC more closely resemble the phenotypic and functional hallmarks of NCC compared to the HNK1-low population and non-neural crest iPSC-derived NCLC. J. Cell. Physiol. 232: 402-416, 2017. © 2016 Wiley Periodicals, Inc.

Benzo[a]pyrene/aryl hydrocarbon receptor signaling inhibits osteoblastic differentiation and collagen synthesis of human periodontal ligament cells
S. Monnouchi, Hidefumi Maeda, A. Yuda, S. Serita, Naohisa Wada, Atsushi Tomokiyo, A. Akamine
Journal of Periodontal Research, 51, 6, 779, 788, 2016年12月, ［査読有り］
英語, Background and Objective: Cigarette smoking has detrimental effects on periodontal tissue, and is known to be a risk factor for periodontal disease, including the loss of alveolar bone and ligament tissue. However, the direct effects of cigarette smoking on periodontal tissue remain unclear. Recently, we demonstrated that benzo[a]pyrene (BaP), which is a prototypic member of polycyclic aryl hydrocarbons and forms part of the content of cigarettes, attenuated the expression of extracellular matrix remodeling-related genes in human periodontal ligament (PDL) cells (HPDLCs). Thus, we aimed to examine the effects of BaP on the osteoblastic differentiation and collagen synthesis of HPDLCs. Material and Methods: HPDLCs were obtained from healthy molars of three patients, and quantitative reverse transcription–polymerase chain reaction were performed for gene expression analyses of cytochrome P450 1A1 and 1B1, alkaline phosphatase, bone sialoprotein and aryl hydrocarbon receptor (AhR), a receptor for polycyclic aryl hydrocarbons. We have also analyzed the role of the AhR, using 2-methyl-2H-pyrazole-3-carboxylic acid (2-methyl-4-o-tolylazo-phenyl)-amide (CH-223191), which is an AhR antagonist. Results: The treatment of HPDLCs with BaP reduced mRNA expression of osteogenic genes, alkaline phosphatase activity, mineralization and collagen synthesis. The treatment with CH-223191 subsequently restored the observed suppressive effects of BaP on HPDLCs. Conclusions: The present results suggest that BaP exerts inhibitory effects on the maintenance of homeostasis in HPDL tissue, such as osteoblastic differentiation and collagen synthesis of HPDLCs, and that this signaling pathway could be suppressed by preventing the transactivity of AhR. Future studies may unveil a role for the inhibition of AhR as a promising therapeutic agent for periodontal disease caused by cigarette smoking.

Semaphorin 3A Induces Odontoblastic Phenotype in Dental Pulp Stem Cells.
Shinichiro Yoshida, Naohisa Wada, Daigaku Hasegawa, Hirofumi Miyaji, Hiromi Mitarai, Atsushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Hidefumi Maeda
J Dent Res, 2016年06月, ［査読有り］, ［招待有り］, ［国際誌］
英語

Grp78 Is Critical for Amelogenin-Induced Cell Migration in a Multipotent Clonal Human Periodontal Ligament Cell Line.
Kyosuke Toyoda, Takao Fukuda, Terukazu Sanui, Urara Tanaka, Kensuke Yamamichi, Ryo Atomura, Hidefumi Maeda, Atsushi Tomokiyo, Takaharu Taketomi, Takeshi Uchiumi, Fusanori Nishimura
Journal of cellular physiology, 231, 2, 414, 27, 2016年02月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Periodontal ligament stem cells (PDLSCs) are known to play a pivotal role in regenerating the periodontium. Amelogenin, which belongs to a family of extracellular matrix (ECM) proteins, is a potential bioactive molecule for periodontal regenerative therapy. However, its downstream target molecules and/or signaling patterns are still unknown. Our recent proteomic study identified glucose-regulated protein 78 (Grp78) as a new amelogenin-binding protein. In this study, we demonstrate, for the first time, the cellular responses induced by the biological interaction between amelogenin and Grp78 in the human undifferentiated PDL cell line 1-17, which possesses the most typical characteristics of PDLSCs. Confocal co-localization experiments revealed the internalization of recombinant amelogenin (rM180) via binding to cell surface Grp78, and the endocytosis was inhibited by the silencing of Grp78 in 1-17 cells. Microarray analysis indicated that rM180 and Grp78 regulate the expression profiles of cell migration-associated genes in 1-17 cells. Moreover, Grp78 overexpression enhanced rM180-induced cell migration and adhesion without affecting cell proliferation, while silencing of Grp78 diminished these activities. Finally, binding of rM180 to Grp78 promoted the formation of lamellipodia, and the simultaneous activation of Rac1 was also demonstrated by NSC23766, a widely accepted Rac1 inhibitor. These results suggest that Grp78 is essential for enhancing amelogenin-induced migration in 1-17 cells. The biological interaction of amelogenin with Grp78 offers significant therapeutic potential for understanding the biological components and specific functions involved in the signal transduction of amelogenin-induced periodontal tissue regeneration.

Benzo[a]pyrene/aryl hydrocarbon receptor signaling inhibits osteoblastic differentiation and collagen synthesis of human periodontal ligament cells.　　　　　　　　　　　　　　　
Satoshi Monnouchi, Hidefumi Maeda, Asuka Yuda, Suguru Serita, Naohisa Wada, Atsushi Tomokiyo, Akifumi Akamine
J Periodontal Res, 2016年01月, ［査読有り］, ［招待有り］, ［国際誌］
英語

Periodontal Ligament Stem Cells in Regenerative Dentistry for Periodontal Tissues.　　　　　　　　　　　　　　　
Atsushi Tomokiyo, Naohisa Wada, Sayuri Hamano, Daigaku Hasegawa, Hideki Sugii, Shinichiro Yoshida, Hidefumi Maeda
Journal of Stem Cell Research & Therapy, 1, 3, 2016年, ［査読有り］
英語

Wnt5a Induces Collagen Production by Human Periodontal Ligament Cells Through TGFβ1-Mediated Upregulation of Periostin Expression.
Daigaku Hasegawa, Naohisa Wada, Hidefumi Maeda, Shinichiro Yoshida, Hiromi Mitarai, Atsushi Tomokiyo, Satoshi Monnouchi, Sayuri Hamano, Asuka Yuda, Akifumi Akamine
Journal of cellular physiology, 230, 11, 2647, 60, 2015年11月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Wnt5a, a member of the noncanonical Wnt proteins, is known to play important roles in the development of various organs and in postnatal cell functions. However, little is known about the effects of Wnt5a on human periodontal ligament (PDL) cells. In this study, we examined the localization and potential function of Wnt5a in PDL tissue. Immunohistochemical analysis revealed that Wnt5a was expressed predominantly in rat PDL tissue. Semi-quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction and Western blotting analysis demonstrated that human PDL cells (HPDLCs) expressed Wnt5a and its receptors (Ror2, Fzd2, Fzd4, and Fzd5). Removal of occlusal pressure by extraction of opposing teeth decreased Wnt5a expression in rat PDL tissue, and the expression of Wnt5a and its receptors in HPDLCs was upregulated by exposure to mechanical stress. Stimulation with Wnt5a significantly enhanced the proliferation and migration of HPDLCs. Furthermore, Wnt5a suppressed osteoblastic differentiation of HPDLCs cultivated in osteogenic induction medium, while it significantly enhanced the expression of PDL-related genes, such as periostin, type-I collagen, and fibrillin-1 genes, and the production of collagen in HPDLCs cultivated in normal medium. Both knockdown of periostin gene expression by siRNA and inhibition of TGFβ1 function by neutralizing antibody suppressed the Wnt5a-induced PDL-related gene expression and collagen production in HPDLCs. Interestingly, in HPDLCs cultured with Wnt5a, TGFβ1 neutralizing antibody significantly suppressed periostin expression, while periostin siRNA had no effect on TGFβ1 expression. These results suggest that Wnt5a expressed in PDL tissue plays specific roles in inducing collagen production by PDL cells through TGFβ1-mediated upregulation of periostin expression.

Mechanical induction of interleukin-11 regulates osteoblastic/cementoblastic differentiation of human periodontal ligament stem/progenitor cells
S. Monnouchi, H. Maeda, A. Yuda, S. Hamano, N. Wada, A. Tomokiyo, K. Koori, H. Sugii, S. Serita, A. Akamine
JOURNAL OF PERIODONTAL RESEARCH, 50, 2, 231, 239, WILEY-BLACKWELL, 2015年04月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Background and ObjectiveThe periodontal ligament (PDL) is continually exposed to mechanical loading caused by mastication or occlusion. Physiological loading is thus considered a key regulator of PDL tissue homeostasis; however, it remains unclear how this occurs. We recently reported that an appropriate magnitude of mechanical stretch can maintain PDL tissue homeostasis via the renin-angiotensin system. In the present study, we investigated the expression of interleukin-11 (IL-11) in human primary PDL cells (HPDLCs) exposed to stretch loading, the contribution of angiotensin II (Ang II) to this event and the effects of IL-11 on osteoblastic/cementoblastic differentiation of human PDL progenitor cells (cell line 1-17).
Material and MethodsHuman primary PDL cells, derived from human tissues, with or without antagonists against the Ang II receptors AT1 or AT2, were subjected to cyclical stretch loading with 8% elongation for 1h. Expression of IL-11 was measured by ELISA in these cultures and by immunohistochemistry in the sectioned maxillae of rats. The osteoblastic/cementoblastic potential of cell line 1-17 was determined using cell proliferation, gene expression and Alizarin Red staining.
ResultsPositive staining for IL-11 was observed in the PDL of rat maxillae and in cultures of HPDLCs. In HPDLCs exposed to stretch, expression of the IL11 gene and the IL-11 protein were up-regulated, concomitant with an increase in Ang II and via AT2. Recombinant human IL-11 (rhIL-11) stimulated an increase in expression of mRNA for the cementoblast-specific marker, CP-23, and for the osteoblastic markers, osteopontin and bone sialoprotein, and promoted proliferation in cell line 1-17. In addition, rhIL-11 also increased the degree of mineralized nodule formation in cell line 1-17 cultures treated with CaCl2.
ConclusionMechanical loading appears to control proliferation and osteoblastic/cementoblastic differentiation of human PDL stem/progenitor cells through the regulation of Ang II and AT2 by IL-11.

Effect of CTGF/CCN2 on osteo/cementoblastic and fibroblastic differentiation of a human periodontal ligament stem/progenitor cell line.
Asuka Yuda, Hidefumi Maeda, Shinsuke Fujii, Satoshi Monnouchi, Naohide Yamamoto, Naohisa Wada, Katsuaki Koori, Atsushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Daigaku Hasegawa, Akifumi Akamine
Journal of cellular physiology, 230, 1, 150, 9, 2015年01月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Appropriate mechanical loading during occlusion and mastication play an important role in maintaining the homeostasis of periodontal ligament (PDL) tissue. Connective tissue growth factor (CTGF/CCN2), a matricellular protein, is known to upregulate extracellular matrix production, including collagen in PDL tissue. However, the underlying mechanisms of CTGF/CCN2 in regulation of PDL tissue integrity remain unclear. In this study, we investigated the effect of CTGF/CCN2 on osteo/cementoblastic and fibroblastic differentiation of human PDL stem cells using the cell line 1-11. CTGF/CCN2 expression in rat PDL tissue and human PDL cells (HPDLCs) was confirmed immunohisto/cytochemically. Mechanical loading was found to increase gene expression and secretion of CTGF/CCN2 in HPDLCs. CTGF/CCN2 upregulated the proliferation and migration of 1-11 cells. Furthermore, increased bone/cementum-related gene expression in this cell line led to mineralization. In addition, combined treatment of 1-11 cells with CTGF/CCN2 and transforming growth factor-β1 (TGF-β1) significantly promoted type I collagen and fibronectin expression compared with that of TGF-β1 treatment alone. Thus, these data suggest the underlying biphasic effects of CTGF/CCN2 in 1-11 cells, inducible osteo/cementoblastic, and fibroblastic differentiation dependent on the environmental condition. CTGF/CCN2 may contribute to preservation of the structural integrity of PDL tissue, implying its potential use as a therapeutic agent for PDL regeneration.

Regeneration of the periodontium for preservation of the damaged tooth.
Hidefumi Maeda, Atsushi Tomokiyo, Naohisa Wada, Katsuaki Koori, Giichiro Kawachi, Akifumi Akamine
Histology and histopathology, 29, 10, 1249, 62, 2014年10月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The population of the world grows every year, and life expectancy tends to increase. Thus, long-term preservation of teeth in aged individuals is an urgent issue. The main causes of tooth loss are well known to be periodontitis, caries, fractures, and orthodontic conditions. Although implant placement is a widely accepted treatment for tooth loss, most patients desire to preserve their own teeth. Many clinicians and researchers are therefore challenged to treat and preserve teeth that are irreversibly affected by deep caries, periodontitis, fractures, and trauma. Tissue engineering techniques are beneficial in addressing this issue; stem cells, signal molecules, and scaffolds are the main elements of such techniques. In this review, we describe these three elements with respect to their validation for regeneration of the periodontium and focus particularly on the potency of diverse scaffolds. In addition, we provide a short overview of the ongoing studies of 4-methacryloxyethyl trimellitate anhydride/methyl methacrylate-tri-n-butyl-borane resin including calcium chloride or hydroxyapatite for periodontium regeneration.

Semaphorin 3A induces mesenchymal-stem-like properties in human periodontal ligament cells.
Naohisa Wada, Hidefumi Maeda, Daigaku Hasegawa, Stan Gronthos, Peter Mark Bartold, Danijela Menicanin, Shinsuke Fujii, Shinichiro Yoshida, Atsushi Tomokiyo, Satoshi Monnouchi, Akifumi Akamine
Stem cells and development, 23, 18, 2225, 36, 2014年09月15日, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Periodontal ligament stem cells (PDLSCs) have recently been proposed as a novel option in periodontal regenerative therapy. However, one of the issues is the difficulty of stably generating PDLSCs because of the variation of stem cell potential between donors. Here, we show that Semaphorin 3A (Sema3A) can induce mesenchymal-stem-like properties in human periodontal ligament (PDL) cells. Sema3A expression was specifically observed in the dental follicle during tooth development and in parts of mature PDL tissue in rodent tooth and periodontal tissue. Sema3A expression levels were found to be higher in multipotential human PDL cell clones compared with low-differentiation potential clones. Sema3A-overexpressing PDL cells exhibited an enhanced capacity to differentiate into both functional osteoblasts and adipocytes. Moreover, PDL cells treated with Sema3A only at the initiation of culture stimulated osteogenesis, while Sema3A treatment throughout the culture had no effect on osteogenic differentiation. Finally, Sema3A-overexpressing PDL cells upregulated the expression of embryonic stem cell markers (NANOG, OCT4, and E-cadherin) and mesenchymal stem cell markers (CD73, CD90, CD105, CD146, and CD166), and Sema3A promoted cell division activity of PDL cells. These results suggest that Sema3A may possess the function to convert PDL cells into mesenchymal-stem-like cells.

The roles of calcium-sensing receptor and calcium channel in osteogenic differentiation of undifferentiated periodontal ligament cells.
Katsuaki Koori, Hidefumi Maeda, Shinsuke Fujii, Atsushi Tomokiyo, Giichiro Kawachi, Daigaku Hasegawa, Sayuri Hamano, Hideki Sugii, Naohisa Wada, Akifumi Akamine
Cell and tissue research, 357, 3, 707, 18, 2014年09月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Elevated extracellular calcium has been shown to promote the differentiation of osteoblasts. However, the way that calcium affects the osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem/progenitor cells (PDLSCs) remains unclear. Our aim has been to investigate the proliferation and osteogenic differentiation of a calcium-exposed human PDLSC line (cell line 1-17) that we have recently established and to elucidate the roles of the calcium-sensing receptor (CaSR) and L-type voltage-dependent calcium channel (L-VDCC) in this process. Proliferation activity was investigated by WST-1 assay, and gene and protein expression was examined by quantitative reverse transcriptase plus the polymerase chain reaction and immunostaining, respectively. Calcification assay was performed by von Kossa and Alizarin red staining. Treatment with 5 mM CaCl2 significantly induced proliferation, bone-related gene expression, and calcification in cell line 1-17. During culture with 5 mM CaCl2, this cell line up-regulated the gene expression of CaSR, which was reduced after 7 days. Simultaneous treatment with NPS2143, a CaSR inhibitor, and calcium significantly further increased bone-related gene expression and calcification as compared with CaCl2 exposure alone. The L-VDCC inhibitor, nifedipine, significantly suppressed osteogenic differentiation of cell line 1-17 treated with 5 mM CaCl2 and promoted the expression of CaSR, as compared with calcium treatment alone. Thus, elevated extracellular calcium promotes the proliferation and osteogenic differentiation of a PDLSC line. Antagonizing CaSR further enhances the effect of calcium on osteogenic differentiation, with CaSR expression being regulated by L-VDCC under extracellular calcium. Extracellular calcium might therefore modulate the osteogenic differentiation of PDLSCs through reciprocal adjustments of CaSR and L-VDCC.

Expression and effects of epidermal growth factor on human periodontal ligament cells.
Yoko Teramatsu, Hidefumi Maeda, Hideki Sugii, Atsushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Naohisa Wada, Asuka Yuda, Naohide Yamamoto, Katsuaki Koori, Akifumi Akamine
Cell and tissue research, 357, 3, 633, 43, 2014年09月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Repair of damaged periodontal ligament (PDL) tissue is an essential challenge in tooth preservation. Various researchers have attempted to develop efficient therapies for healing and regenerating PDL tissue based on tissue engineering methods focused on targeting signaling molecules in PDL stem cells and other mesenchymal stem cells. In this context, we investigated the expression of epidermal growth factor (EGF) in normal and surgically wounded PDL tissues and its effect on chemotaxis and expression of osteoinductive and angiogenic factors in human PDL cells (HPDLCs). EGF as well as EGF receptor (EGFR) expression was observed in HPDLCs and entire PDL tissue. In a PDL tissue-injured model of rat, EGF and IL-1β were found to be upregulated in a perilesional pattern. Interleukin-1β induced EGF expression in HPDLCs but not EGFR. It also increased transforming growth factor-α (TGF-α) and heparin-binding EGF-like growth factor (HB-EGF) expression. Transwell assays demonstrated the chemotactic activity of EGF on HPDLCs. In addition, EGF treatment significantly induced secretion of bone morphogenetic protein 2 and vascular endothelial growth factor, and gene expression of interleukin-8 (IL-8), and early growth response-1 and -2 (EGR-1/2). Human umbilical vein endothelial cells developed well-formed tube networks when cultured with the supernatant of EGF-treated HPDLCs. These results indicated that EGF upregulated under inflammatory conditions plays roles in the repair of wounded PDL tissue, suggesting its function as a prospective agent to allow the healing and regeneration of this tissue.

Effects of Activin A on the phenotypic properties of human periodontal ligament cells.
Hideki Sugii, Hidefumi Maeda, Atsushi Tomokiyo, Naohide Yamamoto, Naohisa Wada, Katsuaki Koori, Daigaku Hasegawa, Sayuri Hamano, Asuka Yuda, Satoshi Monnouchi, Akifumi Akamine
Bone, 66, 62, 71, 2014年09月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Periodontal ligament (PDL) tissue plays an important role in tooth preservation by structurally maintaining the connection between the tooth root and the bone. The mechanisms involved in the healing and regeneration of damaged PDL tissue, caused by bacterial infection, caries and trauma, have been explored. Accumulating evidence suggests that Activin A, a member of the transforming growth factor-β (TGF-β) superfamily and a dimer of inhibinβa, contributes to tissue healing through cell proliferation, migration, and differentiation of various target cells. In bone, Activin A has been shown to exert an inhibitory effect on osteoblast maturation and mineralization. However, there have been no reports examining the expression and function of Activin A in human PDL cells (HPDLCs). Thus, we aimed to investigate the biological effects of Activin A on HPDLCs. Activin A was observed to be localized in HPDLCs and rat PDL tissue. When PDL tissue was surgically damaged, Activin A and IL-1β expression increased and the two proteins were shown to be co-localized around the lesion. HPDLCs treated with IL-1β or TNF-α also up-regulated the expression of the gene encoding inhibinβa. Activin A promoted chemotaxis, migration and proliferation of HPDLCs, and caused an increase in fibroblastic differentiation of these cells while down-regulating their osteoblastic differentiation. These osteoblastic inhibitory effects of Activin A, however, were only noted during the early phase of HPDLC osteoblastic differentiation, with later exposures having no effect on differentiation. Collectively, our results suggest that Activin A could be used as a therapeutic agent for healing and regenerating PDL tissue in response to disease, trauma or surgical reconstruction.

Exposure to transforming growth factor-β1 after basic fibroblast growth factor promotes the fibroblastic differentiation of human periodontal ligament stem/progenitor cell lines.
Kiyomi Kono, Hidefumi Maeda, Shinsuke Fujii, Atsushi Tomokiyo, Naohide Yamamoto, Naohisa Wada, Satoshi Monnouchi, Yoko Teramatsu, Sayuri Hamano, Katsuaki Koori, Akifumi Akamine
Cell and tissue research, 352, 2, 249, 63, 2013年05月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Basic fibroblast growth factor (bFGF) is a cytokine that promotes the regeneration of the periodontium, the specialized tissues supporting the teeth. bFGF, does not, however, induce the synthesis of smooth muscle actin alpha 2 (ACTA2), type I collagen (COL1), or COL3, which are principal molecules in periodontal ligament (PDL) tissue, a component of the periodontium. We have suggested the feasibility of using transforming growth factor-β1 (TGFβ1) to induce fibroblastic differentiation of PDL stem/progenitor cells (PDLSCs). Here, we investigated the effect of the subsequent application of TGFβ1 after bFGF (bFGF/TGFβ1) on the differentiation of PDLSCs into fibroblastic cells. We first confirmed the expression of bFGF and TGFβ1 in rat PDL tissue and primary human PDL cells. Receptors for both bFGF and TGFβ1 were expressed in the human PDLSC lines 1-11 and 1-17. Exposure to bFGF for 2 days promoted vascular endothelial growth factor gene and protein expression in both cell lines and down-regulated the expression of ACTA2, COL1, and COL3 mRNA in both cell lines and the gene fibrillin 1 (FBN1) in cell line 1-11 alone. Furthermore, bFGF stimulated cell proliferation of these cell lines and significantly increased the number of cells in phase G2/M in the cell lines. Exposure to TGFβ1 for 2 days induced gene expression of ACTA2 and COL1 in both cell lines and FBN1 in cell line 1-11 alone. BFGF/TGFβ1 treatment significantly up-regulated ACTA2, COL1, and FBN1 expression as compared with the group treated with bFGF alone or the untreated control. This method might thus be useful for accelerating the generation and regeneration of functional periodontium.

Periodontal tissue engineering Defining the triad
Hidefumi Maeda, Shinsuke Fujii, Atsushi Tomokiyo, Naohisa Wada, Akifumi Akamine
International Journal of Oral and Maxillofacial Implants, 28, 6, e461, e471, 2013年, ［査読有り］
英語, The idea that somatic stem cells are localized in periodontal ligament (PDL) tissues as PDL stem cells (PDLSCs) responsible for construction and reconstruction of the periodontium has been widely accepted. Many dental scientists have attempted to clarify the identity of these PDLSCs but the number of PDLSCs localized in PDL tissues is too small to be routinely and conveniently analyzed. Therefore, researchers have been attempting to develop undifferentiated PDL cell lines by transducing them with genes that are suitable for immortalization. The present authors were the first to succeed in establishing two clonal human PDL stem/progenitor cell lines that possessed multipotency derived from PDL tissues and that expressed PDL-related molecules as well as neural crest-and embryonic stem-related markers. The differentiation stages of these cell lines appeared to vary based on their potential to differentiate into other lineage cells, their response to tissue regeneration-related cytokines, and their behavior when transplanted into immunodeficient rats. This review describes the phenotypes of these cell lines compared with reported PDLSCs or other MSCs and discusses contemporary circumstances related to PDL regenerative medicine. Differential analyses between these two clones will reveal the mechanism of differentiation of PDLSCs as well as their phenotypes. The results will also allow for the acquisition of a mass population of PDLSCs or other stem cells directed toward PDL-lineage cells and to develop an unmet treatment needed for construction and reconstruction of PDL tissues based on tissue engineering techniques.

Prospective potency of TGF-β1 on maintenance and regeneration of periodontal tissue.
Hidefumi Maeda, Naohisa Wada, Atsushi Tomokiyo, Satoshi Monnouchi, Akifumi Akamine
International review of cell and molecular biology, 304, 283, 367, 2013年, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Periodontal ligament (PDL) tissue, central in the periodontium, plays crucial roles in sustaining tooth in the bone socket. Irreparable damages of this tissue provoke tooth loss, causing a decreased quality of life. The question arises as to how PDL tissue is maintained or how the lost PDL tissue can be regenerated. Stem cells included in PDL tissue (PDLSCs) are widely accepted to have the potential to maintain or regenerate the periodontium, but PDLSCs are very few in number. In recent studies, undifferentiated clonal human PDL cell lines were developed to elucidate the applicable potentials of PDLSCs for the periodontal regenerative medicine based on cell-based tissue engineering. In addition, it has been suggested that transforming growth factor-beta 1 is an eligible factor for the maintenance and regeneration of PDL tissue.

Alternation of extracellular matrix remodeling and apoptosis by activation of the aryl hydrocarbon receptor pathway in human periodontal ligament cells.
Atsushi Tomokiyo, Hidefumi Maeda, Shinsuke Fujii, Satoshi Monnouchi, Naohisa Wada, Kiyomi Hori, Katsuaki Koori, Naohide Yamamoto, Yoko Teramatsu, Akifumi Akamine
Journal of cellular biochemistry, 113, 10, 3093, 103, 2012年10月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, It is well known that the aryl hydrocarbon receptor (AhR) is involved in the toxicity of halogenated aromatic hydrocarbons (HAH) and polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH). Recent experiments have shown the induction of impaired tooth and hard-tissue formation by AhR pathway activation, however, the effect on periodontal ligament (PDL) tissue remains unclear. Here, we investigated the effects of benzo(a)pyrene (BaP), a member of PAH, on the extracellular matrix (ECM) remodeling-related molecules, collagen type I (COL-I), matrix metalloproteinase-1 (MMP-1), alpha-smooth muscle actin (α-SMA) expression, and apoptosis in two different human periodontal ligament cells (HPDLCs). The transduction of AhR from the cytoplasm to the nucleus and the increase of AhR-responsive genes; that is, cytochrome P450 1A1 (CYP1A1), cytochrome P450 1B1 (CYP1B1), and aryl-hydrocarbon receptor repressor (AhRR), expression was induced by BaP exposure in both HPDLCs. BaP treatment significantly enhanced MMP-1 mRNA expression and MMP-1 protein production, while markedly suppressing COL-I and a-SMA mRNA expression in both HPDLCs. Furthermore, these BaP-treated HPDLCs fell into apoptotic cell death as evidenced by induction in annexin V and caspase-3/7 staining and reduction of total cell number and Bcl-2 mRNA expression. Thus, BaP exposure altered the expression of ECM-related molecules and induced apoptosis in HPDLCs through activation of the AhR pathway. Overactivity of the AhR pathway may induce an inappropriate turnover of PDL tissue via disordered ECM remodeling and apoptosis in PDL cells.

Expression and effects of glial cell line-derived neurotrophic factor on periodontal ligament cells.
Naohide Yamamoto, Hidefumi Maeda, Atsushi Tomokiyo, Shinsuke Fujii, Naohisa Wada, Satoshi Monnouchi, Kiyomi Kono, Katsuaki Koori, Yoko Teramatsu, Akifumi Akamine
Journal of clinical periodontology, 39, 6, 556, 64, 2012年06月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, AIM: To investigate Glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) expression in normal and wounded rat periodontal ligament (PDL) and the effects of GDNF on human PDL cells (HPDLCs) migration and extracellular matrix expression in HPDLCs. MATERIAL AND METHODS: The expression of GDNF and GDNF receptors was examined by immunocyto/histochemical analyses. Gene expression in HPDLCs treated with GDNF, interleukin-1 beta (IL-1β), or tumour necrosis factor-alpha (TNF-α) was quantified by quantitative RT-PCR (qRT-PCR). In addition, we examined the migratory effect of GDNF on HPDLCs. RESULTS: GDNF was expressed in normal rat PDL and cultured HPDLCs. HPDLCs also expressed GDNF receptors. In wounded rat PDL, GDNF expression was up-regulated. QRT-PCR analysis revealed that IL-1β and TNF-α significantly increased the expression of GDNF in HPDLCs. Furthermore, GDNF induced migration of HPDLCs, which was blocked by pre-treatment with the peptide including Arg-Gly-Asp (RGD) sequence, or neutralizing antibodies against integrin αVβ3 or GDNF. Also, GDNF up-regulated expression of bone sialoprotein (BSP) and fibronectin in HPDLCs. CONCLUSIONS: GDNF expression is increased in rat wounded PDL tissue and HPDLCs treated with pro-inflammatory cytokines. GDNF enhances the expression of BSP and fibronectin, and migration in an RGD-dependent manner via the integrin αVβ3. These findings suggest that GDNF may contribute to wound healing in PDL tissue.

A multipotent clonal human periodontal ligament cell line with neural crest cell phenotypes promotes neurocytic differentiation, migration, and survival.
Atsushi Tomokiyo, Hidefumi Maeda, Shinsuke Fujii, Satoshi Monnouchi, Naohisa Wada, Kiyomi Kono, Naohide Yamamoto, Katsuaki Koori, Yoko Teramatsu, Akifumi Akamine
Journal of cellular physiology, 227, 5, 2040, 50, 2012年05月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Repair of injured peripheral nerve is thought to play important roles in tissue homeostasis and regeneration. Recent experiments have demonstrated enhanced functional recovery of damaged neurons by some types of somatic stem cells. It remains unclear, however, if periodontal ligament (PDL) stem cells possess such functions. We recently developed a multipotent clonal human PDL cell line, termed cell line 1-17. Here, we investigated the effects of this cell line on neurocytic differentiation, migration, and survival. This cell line expressed the neural crest cell marker genes Slug, SOX10, Nestin, p75NTR, and CD49d and mesenchymal stem cell-related markers CD13, CD29, CD44, CD71, CD90, CD105, and CD166. Rat adrenal pheochromocytoma cells (PC12 cells) underwent neurocytic differentiation when co-cultured with cell line 1-17 or in conditioned medium from cell line 1-17 (1-17CM). ELISA analysis revealed that 1-17CM contained approximately 50 pg/ml nerve growth factor (NGF). Cell line 1-17-induced migration of PC12 cells, which was inhibited by a neutralizing antibody against NGF. Furthermore, 1-17CM exerted antiapoptotic effects on differentiated PC12 cells as evidenced by inhibition of neurite retraction, reduction in annexin V and caspase-3/7 staining, and induction of Bcl-2 and Bcl-xL mRNA expression. Thus, cell line 1-17 promoted neurocytic differentiation, migration, and survival through secretion of NGF and possibly synergistic factors. PDL stem cells may play a role in peripheral nerve reinnervation during PDL regeneration.

Induction of BMP-2 in periodontal ligament cells by calcium-based biomaterial
Hidefumi Maeda, Atsushi Tomokiyo, Naohisa Wada, Akifumi Akamine
Bone Morphogenetic Proteins: New Research, 187, 202, 2012年02月
論文集(書籍)内論文, Deep caries, severe periodontal diseases, and irreversible trauma cause irretrievable damage to the periodontium, resulting in tooth loss. Many people worldwide are afflicted with these diseases, and thus experience a decreased quality of life. Therefore, researchers have attempted to address this situation by focusing on tissue engineering techniques. The periodontium is mainly composed of two hard tissues and two soft tissues; the former includes alveolar bone and cementum covering the surface of the tooth root, and the latter includes periodontal ligament (PDL) tissue and gingival tissue. In particular, PDL is a specialized, localized connective tissue that bridges the alveolar bone and cementum. Accordingly, complicated growth regulations of these four tissues are required to attain the regeneration of periodontium. Notably, sufficient acquisition of both alveolar bone and PDL tissue is principal in periodontium reconstruction, because severe damage of these tissues elicits extremely difficult regeneration. So far, the potential effects of BMP-2,-4,-6,-7 (OP-1),-12 (GDF7),-13 (GDF6), and-14 (GDF5) on the regeneration of periodontium have been reported. Above all, the promising potency of BMP-2 is well documented in terms of regeneration. In this chapter, we describe the efficacy and prospective roles of BMPs in periodontium regeneration and the potency of calcium-based biomaterial in induction of BMP-2 expression in PDL cells. © 2012 by Nova Science Publishers, Inc. All rights reserved.

Promise of periodontal ligament stem cells in regeneration of periodontium.
Hidefumi Maeda, Atsushi Tomokiyo, Shinsuke Fujii, Naohisa Wada, Akifumi Akamine
Stem cell research & therapy, 2, 4, 33, 33, 2011年07月28日, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, A great number of patients around the world experience tooth loss that is attributed to irretrievable damage of the periodontium caused by deep caries, severe periodontal diseases or irreversible trauma. The periodontium is a complex tissue composed mainly of two soft tissues and two hard tissues; the former includes the periodontal ligament (PDL) tissue and gingival tissue, and the latter includes alveolar bone and cementum covering the tooth root. Tissue engineering techniques are therefore required for regeneration of these tissues. In particular, PDL is a dynamic connective tissue that is subjected to continual adaptation to maintain tissue size and width, as well as structural integrity, including ligament fibers and bone modeling. PDL tissue is central in the periodontium to retain the tooth in the bone socket, and is currently recognized to include somatic mesenchymal stem cells that could reconstruct the periodontium. However, successful treatment using these stem cells to regenerate the periodontium efficiently has not yet been developed. In the present article, we discuss the contemporary standpoints and approaches for these stem cells in the field of regenerative medicine in dentistry.

An in vitro evaluation of two resin-based sealers on proliferation and differentiation of human periodontal ligament cells
H. Maeda, A. Tomokiyo, K. Koori, S. Monnouchi, S. Fujii, N. Wada, K. Kono, N. Yamamoto, T. Saito, A. Akamine
INTERNATIONAL ENDODONTIC JOURNAL, 44, 5, 425, 431, WILEY-BLACKWELL, 2011年05月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, P>Aim
To evaluate the effects of a polymethyl methacrylate resin-based sealer [Superbond sealer (SB)] on the proliferation and osteogenic differentiation of human periodontal ligament cells (HPDLCs) in vitro, compared with a methacrylate resin-based sealer [Epiphany SE sealer (EP)].
Methodology
Human periodontal ligament cells were obtained from of healthy third molar teeth of two participants with informed consent. To determine the effects of the eluent from set resin sealers on HPDLCs, the 7-day-washed (washed) or non-washed freshly prepared (fresh) set SB or EP discs were prepared. Cells cultured on these discs were evaluated by the WST-1 proliferation assay and scanning electron microscopy (SEM). The osteogenic differentiation of HPDLCs on washed SB discs was then evaluated by gene expression analysis of osteopontin (OPN) and osteocalcin (OCN) by using quantitative RT-PCR.
Results
Human periodontal ligament cells exhibited growth on washed SB discs, whereas fresh SB and EP discs and washed EP discs inhibited proliferation of HPDLCs. SEM observation revealed that HPDLCs tightly attached and spread on the surface of washed SB discs, whilst no HPDLCs were observed on the surface of fresh and washed EP discs. Furthermore, HPDLCs significantly upregulated gene expressions of OPN and OCN when cultured on washed SB discs in osteogenic differentiation medium for 2 weeks.
Conclusions
Although Superbond sealer initially exerted cytotoxic effects on HPDLCs, these effects were reduced during washing for 7 days compared to EP, which continued to be cytotoxic even though the specimens were washed for the same period of time. Washed Superbond allowed HPDLCs to differentiate into osteogenic cells.

[An epidemiologic examination on the prevalence of the periodontal diseases and oral pigmentation in Yusho patients in 2010].
Isamu Hashiguchi, Yoshito Yoshimine, Hidefumi Maeda, Yasuharu Gotou, Naohisa Wada, Shinsuke Fujii, Atsushi Tomokiyo, Kirie Saito, Satoshi Monnouchi, Kiyomi Kouno, Hidehiko Okumura, Akifumi Akamine
Fukuoka igaku zasshi = Hukuoka acta medica, 102, 4, 75, 80, 2011年04月, ［査読有り］, ［国内誌］
日本語, 研究論文（学術雑誌）, An epidemiologic examination was carried out to reveal the prevalence of the periodontal diseases and oral pigmentation in patients with Yusho in 2010. The results obtained were as follows. 1) Yusho patients complained of tooth pain and periodontal diseases such as gingival swelling, but not of oral pigmentation. 2) 104 patients out of 117 patients with Yusho, who were measured periodontal pocket depth according to Ramfjord' methods, had at least one tooth with periodontal pocket deeper than 3 mm. Similarly, 314 teeth out of a total 551 examined teeth showed a periodontal pocket with more than 3 mm in depth. However, it was determined that 57 teeth had a periodontal pocket deeper than 4 mm. 3) Oral pigmentation was observed in 63 patients out of 122 patients with Yusho. In this study, gingival pigmentation was most predominant among oral pigmentation. The prevalence of oral pigmentation in male patients seemed to be somewhat higher than that in female patients. In addition, the prevalence of oral pigmentation tended to be higher in patients under seventy years old than patients beyond the age of seventy. These results indicated that PCB-related compounds may be responsible for the higher prevalence of both periodontal diseases and oral pigmentation.

The Roles of Angiotensin II in Stretched Periodontal Ligament Cells
Monnouchi Satoshi, Maeda Hidefumi, Fujii Shinsuke, Tomokiyo Atsushi, Kono Kiyomi, Akamine Akifumi
Journal of Dental Research, 90, 2, 181, 185, International & American Associations for Dental Research, 2011年02月
英語, The loading caused by occlusion and mastication plays an important role in maintaining periodontal ligament (PDL) tissues. We hypothesized that a loading magnitude would be involved in the production of biological factors that function in the maintenance of PDL tissues. Here, we identified up-regulated gene expressions of transforming growth factor-β1 (TGF-β1), alkaline phosphatase (ALP), and angiotensinogen in human PDL fibroblastic cells (HPLFs) that were exposed to 8% stretch loading. Immunolocalization of angiotensin I/II (Ang I/II), which was converted from angiotensinogen, was detected in rat PDL tissues. HPLFs that were stimulated by Ang II also increased their gene expressions of TGF-β1 and ALP. Furthermore, the antagonist for Ang II type 2 receptor, rather than for type 1, significantly inhibited gene expressions induced by the stretch loading. Analysis of these data suggests that Ang II mediates the loading signal in stretched HPLFs to induce expressions of TGF-β1 and ALP.

Effects of TGF-β1 on the proliferation and differentiation of human periodontal ligament cells and a human periodontal ligament stem/progenitor cell line.
Shinsuke Fujii, Hidefumi Maeda, Atsushi Tomokiyo, Satoshi Monnouchi, Kiyomi Hori, Naohisa Wada, Akifumi Akamine
Cell and tissue research, 342, 2, 233, 42, 2010年11月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Periodontal ligament (PDL) is a specialized connective tissue that influences the lifespan of the tooth. Transforming growth factor-β1 (TGF-β1) is a multifunctional cytokine, but little is known about the effects of TGF-β1 on PDL cells. Our aim has been to demonstrate the expression of TGF-β1 in rat PDL tissues and to evaluate its effects on the proliferation and gene expression in human PDL cells (HPLCs) and a human PDL stem/progenitor cell line, line 1-11, that we have recently developed. The expression of TGF-β1 in the entire PDL tissue was confirmed immunohistochemically, and both HPLCs and cell line 1-11 expressed mRNA from the TGF-β1, TGF-β type I receptor, and TGF-β type II receptor genes. Although exogenous TGF-β1 stimulated the proliferation of HPLCs, it did not upregulate the expression of alpha-smooth muscle actin (α-SMA), type I collagen (Col I), or fibrillin-1 (FBN1) mRNA or of α-SMA protein in HPLCs, whereas expression for these genes was attenuated by an anti-TGF-β1 neutralizing antibody. In contrast, exogenous TGF-β1 reduced the proliferation of cell line 1-11, although it upregulated the expression of α-SMA, Col I, and FBN1 mRNA and of α-SMA protein in this cell line. In addition, interleukin-1 beta stimulation significantly reduced the expression of TGF-β1 mRNA and protein in HPLCs. Thus, TGF-β1 seems to play an important role in inducing fibroblastic differentiation of PDL stem/progenitor cells and in maintaining the PDL apparatus under physiological conditions.

Mineral trioxide aggregate induces bone morphogenetic protein-2 expression and calcification in human periodontal ligament cells.
Hidefumi Maeda, Tsuguhisa Nakano, Atsushi Tomokiyo, Shinsuke Fujii, Naohisa Wada, Satoshi Monnouchi, Kiyomi Hori, Akifumi Akamine
Journal of endodontics, 36, 4, 647, 52, 2010年04月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, INTRODUCTION: Mineral trioxide aggregate (MTA) is a therapeutic, endodontic repair material that is reported to exhibit calcified tissue-conductive activity although the mechanisms remain unclear. We hypothesize that the dissolution of calcium from MTA into the surrounding environment may play an important role in the osteoblastic/cementoblastic differentiation of human periodontal ligament cells (HPLCs). METHODS: Two populations of HPLCs were obtained from two patients, respectively, and were cultured in the presence or absence of MTA discs and/or CaCl(2) in order to investigate calcium release, calcification activity, calcium-sensing receptor (CaSR) gene expression and bone morphogenetic protein-2 (BMP-2), and BMP-2 receptor protein and gene expression. RESULTS: MTA released a substantial accumulation of calcium (4 mmol/L) within 14 days into culture media. After 4 weeks, the two populations of HPLCs independently exhibited calcification as well as BMP-2 distribution in the vicinity of MTA. HPLCs inherently expressed genes encoding for the CaSR and BMP-2 receptors. Exogenous CaCl(2) media supplementation induced CaSR gene expression in HPLCs and calcification and BMP-2 synthesis throughout the entire HPLC cultures, whereas MgCl(2) had no effect. Both MTA and CaCl(2) stimulated BMP-2 gene expression above that of baseline levels. CONCLUSION: Here we show the first report showing that HPLCs cocultured directly with MTA up-regulated BMP2 expression and calcification. These results may be through CaSR interactions that were potentially activated by the release of calcium from MTA into the culture environment.

油症患者における歯周疾患ならびに口腔内色素沈着の疫学的調査(第7報)　　　　　　　　　　　　　　　
橋口勇, 吉嶺嘉人, 前田英史, 後藤康治, 藤井慎介, 友清淳, 吉田桐枝, 西垣奏一郎, 門野内聡, 堀清美, 奥村英彦, 赤峰昭文
福岡医誌, 100, 5, 2009年05月, ［査読有り］, ［国内誌］
日本語

[An epidemiologic examination on the prevalence of the periodontal diseases and oral pigmentation in Yusho patients in 2008].
Isamu Hashiguchi, Yoshito Yoshimine, Hidefumi Maeda, Yasuharu Gotou, Shinsuke Fujii, Atsushi Tomokiyo, Kirie Yoshida, Souichiro Nishigaki, Satoshi Monnouch, Kiyomi Hori, Hidehiko Okumura, Akifumi Akamine
Fukuoka igaku zasshi = Hukuoka acta medica, 100, 5, 111, 7, 2009年05月, ［査読有り］, ［国内誌］
日本語, 研究論文（学術雑誌）, An epidemiologic examination was carried out to reveal the prevalence of the periodontal diseases and oral pigmentation in patients with Yusho in 2008. The results obtained were as follows. 1) Yusho patients complained of tooth pain and periodontal diseases such as gingival swelling, gingival bleeding, but not of oral pigmentation. 2) 116 patients out of 148 patients with Yusho, who were measured periodontal pocket depth according to Ramfjord' methods, had at least one tooth with periodontal pocket deeper than 3 mm. Similarly, 399 teeth out of a total 710 examined teeth showed a periodontal pocket with more than 3 mm in depth. However, it was determined that 74 teeth had a periodontal pocket deeper than 4 mm. 3) Oral pigmentation was observed in 91 patients out of 155 patients with Yusho. In this study, gingival pigmentation was most predominant among oral pigmentation. The prevalence of oral pigmentation in male patients seemed to be somewhat higher than that in female patients. In addition, the prevalence of oral pigmentation tended to be higher in younger patients than in elder patients. Pigmentation of the buccal mucosa, lip or palate, however, was observed only in patients beyond the age of fifty. These results indicated that PCB-related compounds may be responsible for the higher prevalence of both periodontal diseases and oral pigmentation.

Investigating a clonal human periodontal ligament progenitor/stem cell line in vitro and in vivo.
Shinsuke Fujii, Hidefumi Maeda, Naohisa Wada, Atsushi Tomokiyo, Masahiro Saito, Akifumi Akamine
Journal of cellular physiology, 215, 3, 743, 9, 2008年06月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The lifespan of the tooth is influenced by the periodontal ligament (PDL), a specialized connective tissue that connects the cementum with the tooth socket bone. Generation of a cell line from PDL progenitor/stem cells would allow development of tissue engineering-based regenerative PDL therapy. However, little is known about the characteristics of PDL progenitor/stem cells because PDL tissue consists of a heterogeneous cell population and there are no pure PDL cell lines. Recently, we succeeded in immortalizing primary human PDL fibroblasts (HPLFs) by transfecting them with SV40 T-antigen and hTERT (Cell Tissue Res 2006; 324: 117-125). In this study, we isolated three clonal cell lines from these immortalized cells (lines 1-4, 1-11, and 1-24) that express RUNX-2, Col I, ALP, OPN, OCN, RANKL, OPG, scleraxis, periostin, Col XII, and alpha-SMA mRNA. Immunocytochemical analysis demonstrated that CD146 was expressed in cell lines 1-4 and 1-11 and that STRO-1 was expressed in lines 1-11 and 1-24. Lines 1-4 and 1-11 differentiated into osteoblastic cells and adipocytes when cultured in lineage-specific differentiation media. Four weeks after transplanting cell line 1-11 into immunodeficient mice with beta-tricalcium phosphate (beta-TCP), the transplant produced cementum/bone-like tissues around the beta-TCP. Eight weeks after transplantation, the 1-11 cell transplant formed PDL-like structures on the surface of the beta-TCP. These data suggest that cell line 1-11 was derived from a progenitor/stem cell present in the PDL and should be very useful for studying the biology and regeneration of human periodontium.

Development of a multipotent clonal human periodontal ligament cell line.
Atsushi Tomokiyo, Hidefumi Maeda, Shinsuke Fujii, Naohisa Wada, Kazuya Shima, Akifumi Akamine
Differentiation; research in biological diversity, 76, 4, 337, 47, 2008年04月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The periodontal ligament (PDL) that anchors the tooth root to the alveolar bone influences the lifespan of the tooth, and PDL lost through periodontitis is difficult to regenerate. The development of new PDL-regenerative therapies requires the isolation of PDL stem cells. However, their characteristics are unclear due to the absence of somatic PDL stem cell lines and because PDL is composed of heterogeneous cell populations. Recently, we succeeded in immortalizing human PDL fibroblasts that retained the properties of the primary cells. Therefore, we aimed to establish a human PDL-committed stem cell line and investigate the effects of basic fibroblast growth factor (bFGF) on the osteoblastic differentiation of the cells. Here, we report the development of cell line 1-17, a multipotent clonal human PDL cell line that expresses the embryonic stem cell-related pluripotency genes Oct3/4 and Nanog, as well as the PDL-related molecules periostin and scleraxis. Continuous treatment of cell line 1-17 with bFGF in osteoblastic induction medium inhibited its calcification, with down-regulated expression of FGF-Receptor 1 (FGF-R1), whereas later addition of bFGF potentiated its calcification. Furthermore, bFGF induced calcification of cell line 1-17 when it was co-cultured with osteoblastic cells. These results suggest that cell line 1-17 is a PDL-committed stem cell line and that bFGF exerts dualistic (i.e., promoting and inhibitory) effects on the osteoblastic differentiation of cell line 1-17 based on its differentiation stage.

[Epidemiologic examination on the prevalence of the periodontal diseases and oral pigmentation in Yusho patients in 2006].
Isamu Hashiguchi, Yoshito Yoshimine, Hidefumi Maeda, Yasuharu Gotou, Masaki Ishikawa, Shinsuke Fujii, Atsushi Tomokiyo, Hiroshi Fukuyama, Hidehiko Okumura, Akifumi Akamine
Fukuoka igaku zasshi = Hukuoka acta medica, 98, 5, 170, 5, 2007年05月, ［査読有り］, ［国内誌］
日本語, 研究論文（学術雑誌）, An epidemiologic examination was carried out to reveal the prevalence of the periodontal diseases and oral pigmentation in patients with Yusho in 2006. The results obtained were as follows. (1) 98 patients out of 106 patients with Yusho, who were measured periodontal pocket depth according to Ramfjord' methods, had at least one tooth with periodontal pocket deeper than 3 mm. Similarly, 343 teeth out of a total 494 examined teeth showed periodontal pocket with more than 3 mm depth. (2) Oral pigmentation was observed in 61 patients out of 116 patients with Yusho. In this study, gingival pigmentation was most predominant among oral pigmentation. The prevalence of oral pigmentation in male patients seemed to be somewhat higher than that in female patients. In addition, this examination revealed that the patients below the age of sixty had a high prevalence of oral pigmentation. These results indicated that PCB-related compounds may be responsible for the higher prevalence of both periodontal diseases and oral pigmentation.

Side population cells isolated from porcine dental pulp tissue with self-renewal and multipotency for dentinogenesis, chondrogenesis, adipogenesis, and neurogenesis.
Koichiro Iohara, Li Zheng, Masataka Ito, Atsushi Tomokiyo, Kenji Matsushita, Misako Nakashima
Stem cells (Dayton, Ohio), 24, 11, 2493, 503, 2006年11月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Dental pulp has the potential to form dentin as a regenerative response to caries. This regeneration is mediated by stem/progenitor cells. Thus, stem cell therapy might be of potential utility in induction of reparative dentin. We isolated side population (SP) cells from dental pulp based on the exclusion of the DNA binding dye Hoechst 33342 by flow cytometry and compared its self-renewal capacities and multipotency with non-SP cells and primary pulp cells. The cumulative cell number of the SP cells was greater than the non-SP cells and primary pulp cells. Bmi1 was continuously expressed in SP cells, suggesting longer proliferative lifespan and self-renewal capacity of SP cells. Next, the maintenance of the multilineage differentiation potential of pulp SP cells was investigated. Expression of type II collagen and aggrecan confirmed chondrogenic conversion (30%) of SP cells. SP cells expressed peroxisome proliferator-activated receptor gamma and adaptor protein 2, showing adipogenic conversion. Expression of mRNA and proteins of neurofilament and neuromodulin confirmed neurogenic conversion (90%). These results demonstrate that pulp SP cells maintain multilineage differentiation potential. We further examined whether bone morphogenetic protein 2 (BMP2) could induce differentiation of pulp SP cells into odontoblasts. BMP2 stimulated the expression of dentin sialophosphoprotein (Dspp) and enamelysin in three-dimensional pellet cultures. Autogenous transplantation of the Bmp2-supplemented SP cells on the amputated pulp stimulated the reparative dentin formation. Thus, adult pulp contains SP cells, which are enriched for stem cell properties and useful for cell therapy with BMP2 for dentin regeneration.

Stimulation of reparative dentin formation by ex vivo gene therapy using dental pulp stem cells electrotransfected with growth/differentiation factor 11 (Gdf11).
Misako Nakashima, Koichiro Iohara, Masaki Ishikawa, Masataka Ito, Atsushi Tomokiyo, Takamasa Tanaka, Akifumi Akamine
Human gene therapy, 15, 11, 1045, 53, 2004年11月, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Dental pulp progenitor/stem cells have the capacity to differentiate into odontoblasts and they provide a potential for dentin repair and regeneration by gene therapy. To develop a successful ex vivo gene therapy to induce reparative dentin formation rapidly and effectively after treatment of caries, we developed a three-dimensional pellet culture system of pulp cells electrotransfected with growth/differentiation factor 11 (Gdf11). The viability after electrotransfection was more than 85%, and the efficiency was about 70% as determined by flow cytometry. After 10 days of culture, the total amount of type I and type III collagen was 3-fold higher in the pEGFP-Gdf11-transfected pellet than in the control. Real-time RT-PCR analysis demonstrated that the expression of markers of odontoblast differentiation (alkaline phosphatase, dentin matrix protein 1 [Dmp1], dentin sialophosphoprotein [Dspp], enamelysin, and phosphate-regulating gene with homologies to endopeptidases on X-chromosome [Phex]) was increased in the pEGFP-Gdf11-transfected pellet compared with the control on day 14. On the basis of this in vitro evaluation, an in vivo investigation in the dog was performed. Autogenous transplantation of Gdf11-transfected cells cultured as a pellet on amputated pulp stimulated reparative dentin formation. Thus, Gdf11 gene therapy may be potentially used in endodontic treatment in dentistry.

誤嚥防止ロール状ガーゼの開発-誤嚥防止能力の評価-
川本千春, 矢後亮太朗, 福山麻衣, 友清淳, 日本医用歯科機器学会誌, 29, 2, 2024年

重合方式の異なるレジンセメント及びコンポジットレジンに対する機械的性質評価
戸井田侑, ISLAM MD Refat Readul, QIBUER, YUAN Yuan, 福山麻衣, 池田考績, 星加修平, 佐野英彦, 友清淳, 日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集(Web), 160th, 2024年

ウォーキングブリーチ用薬剤がWhite Mineral Trioxide Aggregateに及ぼす影響について
友清淳, 戸井田侑, ISLAM Md Refat Readul, ヤマウチ モニカ, 星加修平, 川本千春, ISLAM Rafiqul, 福山麻衣, 日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集(Web), 160th, 2024年

マルチカラーCAD/CAM冠用ハイブリッドレジンブロックの物理化学的性質
槌谷賢太, 槌谷賢太, 佐野英彦, YAMAUTI Monica, 星加修平, 戸井田侑, 福山麻衣, 友清淳, 日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集(Web), 160th, 2024年

根尖孔穿通への熱処理ニッケルチタンファイルとTri Auto ZX2新駆動方式の応用
山下大輝, 友清淳, 濱野さゆり, 濱野さゆり, 前田英史, 前田英史, 日本歯内療法学会雑誌, 45, 1, 34, 40, 2024年
ニッケルチタン(NiTi)製ファイルは根管治療を行う上で重要な器具のひとつである。NiTi合金は熱処理によって圧縮強さや引っ張り強さが変化することが知られており、プログライダーは熱処理加工されていないNiTiファイルと比較して柔軟性と破折抵抗性に優れる。本研究では、プログライダーとOptimum Glide Path(OGP)モードならびに新駆動方式(N-OGPモード)を組み合わせ、穿通の可否および穿通までに要した時間を検証することで、レシプロケーション運動による熱処理NiTiファイルの使用が根尖孔穿通のオプションのひとつとなる可能性について検討した。根管の先端径が0.1mmであるS字根管模型70本を実験に使用し、術者は当科に所属する臨床経験年数6～11年の歯科医師7名(Practician Group)と経験1年未満の研修歯科医7名(Trainee Group)とした。Practician Groupではすべての術者において5群とも穿通が可能であり、穿通率は100%であった。穿通までに要した時間は短い順にN-OGP+SPF、OGP+SPF、OGP+PRG、N-OGP+PRG、KFであった。Trainee Groupでは1術者のOGP+PRGにおいてのみファイル破折が生じたため穿通不可であったが、他の術者および実験群では穿通が可能であり、穿通率は97.1%であった。穿通までに要した時間は短い順にOGP+SPF、N-OGP+PRG、N-OGP+SPF、OGP+PRG、KFであった。, (一社)日本歯内療法学会, 日本語

NiTi製ハンドファイルを極める 2 手用ニッケルチタンファイル「HandFlex」を用いた根管形成教育の実践と今後の展望
友清淳, 歯界展望, 143, 5, 2024年

セメント質誘導型ナノハイドロキシアパタイト含有レジンの新規開発
杉井英樹, 吉田晋一郎, ALBOUGHA Mhd Safwan, 足立織利恵, 友清淳, 友清淳, 濱野さゆり, 濱野さゆり, 長谷川大学, 前田英史, 前田英史, 日本再生医療学会総会(Web), 22nd, 2023年

継代培養したiPS細胞由来神経堤細胞様細胞の歯根膜幹細胞分化能について
杉浦梨紗, 杉浦梨紗, 杉浦梨紗, 杉浦梨紗, 濱野さゆり, 濱野さゆり, 山下大輝, 友清淳, 友清淳, 長谷川大学, 吉田晋一郎, 杉井英樹, 藤野翔香, 前田英史, 前田英史, 日本再生医療学会総会(Web), 22nd, 2023年

手用ニッケルチタンファイル「HandFlex」-ステンレススチールファイルとエンジン用ニッケルチタンファイルの間に位置する新しい根管形成オプション-
友清淳, 日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集(Web), 158th, 2023年

iPS細胞由来歯根膜幹細胞様細胞の分化誘導におけるFibrillin-2の役割
濱野さゆり, 濱野さゆり, 山下大輝, 糸山知宏, 友清淳, 友清淳, 長谷川大学, 杉井英樹, 兼子大志, MARDINI Bara, 前田英史, 前田英史, 日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集(Web), 158th, 2023年

AhRシグナルの活性化はヒト歯根膜細胞のMMP12発現を亢進する
門脇正敬, 友清淳, 友清淳, 糸山知宏, 長谷川大学, 濱野さゆり, 濱野さゆり, 杉井英樹, 前田英史, 前田英史, 日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集(Web), 158th, 2023年

根管治療関連薬剤がWhite mineral trioxide aggregateに及ぼす影響について
友清淳, 日本再生歯科医学会学術大会および総会プログラム・抄録集, 21st, 2023年

難治性根尖病変への挑戦~成因メカニズムと治癒への取り組み~
友清淳, 日本顎咬合学会誌, 43, 2023年

CPC製品使用後の口腔内におけるCPCの経時的濃度変化
國井理恵子, 川本千春, 矢後亮太朗, 兼子裕史, 遠山晏梨, 松尾友太, 弥勒院択良, ヤマウチ モニカ, 佐野英彦, 友清淳, 日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集(Web), 159th, 2023年

新規ユニバーサルシェードレジンの色調適合性の評価
兼子裕史, 川本千春, 戸井田侑, WU Di, 矢後亮太朗, YUAN Yuan, 遠山あん梨, 國井理恵子, 松尾友太, 弥勒院択良, ヤマウチ モニカ, 佐野英彦, 友清淳, 日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集(Web), 159th, 2023年

バイオミメティクスを基盤とした歯周組織再生療法創出の試み
友清淳, 友清淳, 北海道歯学会学術大会プログラム講演内容抄録, 2023, 2023年

臨床経験年数の違いがトライオートZX2新規駆動形式を用いたニッケルチタンファイルによる穿通法に及ぼす影響
山下大輝, 友清淳, 濱野さゆり, 濱野さゆり, 藤野翔香, 杉浦梨沙, 前田英史, 前田英史, 日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集(Web), 156th, 2022年

Decorinによるヒト歯根膜幹細胞の骨芽細胞様分化誘導に関する分子機構の解析
足立織利恵, 杉井英樹, 糸山知宏, 兼子大志, 友清淳, 濱野さゆり, 濱野さゆり, 長谷川大学, 小幡純子, 吉田晋一郎, 藤野翔香, ALBOUGHA Mhd Safwan, 前田英史, 前田英史, 日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集(Web), 156th, 2022年

Fibrillin-2がiPS細胞の歯根膜幹細胞様細胞への分化誘導に及ぼす影響について
濱野さゆり, 杉浦梨紗, 山下大輝, 友清淳, 杉井英樹, 吉田晋一郎, 糸山知宏, 前田英史, 前田英史, 日本再生医療学会総会(Web), 21st, 2022年

Nano Hydroxyapatite含有4-META/MMA-TBBレジンがヒト歯根膜幹細胞のセメント芽細胞様分化に及ぼす影響について
杉井英樹, 吉田晋一郎, ALBOUGHA Mhd Safwan, 足立織利恵, 友清淳, 前田英史, 前田英史, 日本歯内療法学会学術大会プログラム・抄録集, 43rd, 2022年

フェノール系貼薬剤はケイ酸カルシウムの体積増加を介してWhite Mineral Trioxide Aggregateの崩壊を誘導し封鎖性を低下させる
友清淳, 友清淳, 山下梢, 小野太雅, 一法師啓太, ALHASAN M.Anas, 濱野さゆり, 濱野さゆり, 長谷川大学, 杉井英樹, 前田英史, 前田英史, 日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集(Web), 157th, 2022年

レジン系、バイオガラス系およびシリコン系根管充填用シーラーのヒト歯根膜幹細胞株に対する細胞親和性比較　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳, 長谷川 大学, 小野 太雅, 一法師 啓太, 山下 梢, Alhasan M. Anas, 濱野 さゆり, 杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 152回, 42, 42, 2020年06月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

NaClOに浸漬したMineral Trioxide Aggregateはヒト歯根膜幹細胞株の骨芽細胞分化能を低下させる　　　　　　　　　　　　　　　
山下 梢, 友清 淳, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 小野 太雅, 一法師 啓太, Alhasan M. Anas, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 152回, 43, 43, 2020年06月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

バイオ3Dプリント技術を応用した未分化なヒト歯根膜クローン細胞株および生体活性材料コアを用いたバイオハイブリッドインプラントの作製　　　　　　　　　　　　　　　
小野 太雅, 友清 淳, 小川 真里奈, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 吉田 晋一郎, 杉井 英樹, 一法師 敬太, 山下 梢, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 152回, 149, 149, 2020年06月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

未重合レジンセメントと未重合フロアブルレジンの結合力
杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 友清 淳, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 前田 英史, 日本歯科保存学雑誌, 63, 1, 44, 51, 2020年02月
目的:抜歯の原因として歯根破折が増加しているが,その要因としてポストに使用される金属と歯根象牙質の弾性率の違いが示唆されている.そこで,その対策としてファイバーポストとコンポジットレジンを併用し,支台築造体自体の弾性率を象牙質のそれに近似させる試みがなされてきた.近年,根管象牙質とファイバーポスト併用レジン支台築造体の結合を増強させるため,ポスト部分にレジンセメントを,コア部分にフロアブルレジンを使用する方法が実施されている.しかしながら,これまでに未重合のレジンセメントと未重合のフロアブルレジンの結合力を評価した報告はない.そこで本研究では,レジンセメントを使用した支台築造を想定し,メチルメタクリレート(MMA)系およびコンポジット系のレジンセメントを用いて,(1)各セメントとフロアブルレジンを結合させた場合の剪断強さの比較,(2)剪断試験に使用した試験体の破壊界面の観察を行い,各セメントの結合力について検討を行うこととした.材料と方法:レジンセメントは,MMA系のスーパーボンド(SB)およびコンポジット系のケミエースII(CAII)を使用し,フロアブルレジンは,バルクベースハード(BBH)を用いた.混和した各セメントをモールドに填入後,10,60秒および600秒でBBHに接触させ,光照射を行った.その後,37℃,15分間静置してセメントが硬化した後,37℃,24時間水中浸漬し,剪断強さの解析およびその破壊界面の観察を行った.成績:SBは,填入後10秒の群で600秒の群よりも有意に高い剪断強さを示した一方,CAIIは各群間で有意差を認めなかった.また,SBとCAIIの剪断強さを比較した結果,填入後10秒のSB群がCAII群に対し有意に高い値を示したが,填入後60秒および600秒では両セメント群間に有意差を認めなかった.破壊界面に関して,SBは,填入後10秒および60秒の群でBBHの凝集破壊が90%認められた一方,填入後600秒の群でSBとBBHの混合破壊が90%を占めた.CAIIは,填入後10,60秒および600秒の群で,それぞれBBHの凝集破壊が100,90%および70%認められた.また,SBおよびCAII自身にはいずれの条件下でも凝集破壊は認められなかった.結論:未重合のSBは,BBHとの結合においてSB填入後10秒程度でBBHを接触させることで最も高い結合力が生じ,さらに填入後60秒でBBHに接触させた場合においても,CAIIと同等の結合力を発揮することが示唆された.また,SBおよびCAII自身に凝集破壊は認められなかったことより,両セメントは安定した結合力を有していることが推察された.(著者抄録), (NPO)日本歯科保存学会, 日本語

iPS細胞を基盤とする新規歯周組織再生療法開発への戦略　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳, BIO Clinica, 34, 13, 1373, 1377, 2019年11月
歯周病は、歯の支持組織である歯周組織に不可逆的な破壊を引き起こすことから、現在では日本人における歯の喪失原因の第一位である。一方で、歯周病により破壊された歯周組織を再生させる有効な治療法は、未だ確立されていない。2006年に樹立された人工多能性幹細胞(iPS細胞)により、体細胞から多能性幹細胞への初期化が実現され、再生医療研究分野は飛躍的に発展した。本稿では、このiPS細胞を基盤とした、次世代型の歯周組織再生療法の開発戦略について解説する。(著者抄録), (株)北隆館, 日本語

シュワン細胞はヒト前骨芽細胞の骨芽細胞分化を促進する　　　　　　　　　　　　　　　
糸山 知宏, 吉田 晋一郎, 友清 淳, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 杉井 英樹, 小野 太雅, 藤野 翔香, 一法師 啓太, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 151回, 22, 22, 2019年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

Non-canonical Wntシグナル経路の阻害が未分化なヒト歯根膜細胞株の骨芽細胞様分化に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
兼子 大志, 長谷川 大学, 糸山 知宏, 友清 淳, 濱野 さゆり, 吉田 晋一郎, 杉井 英樹, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 151回, 147, 147, 2019年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

研究者の最新動向 iPS細胞の応用による神経堤細胞賦活化遺伝子を標的とした新規歯周組織再生薬の創出
友清 淳, Precision Medicine, 2, 6, 532, 537, 2019年06月
現在、日本人における歯の喪失原因の第一位は歯周病である。歯周炎は歯周病の病態の一つであり、歯周組織の不可逆的な破壊を介して、歯の寿命を短縮する。一方で、歯周炎により破壊された歯周組織を再生する有効な治療法は、未だ確立されていない。近年、ヒトゲノム解析研究の進歩と共に、様々な歯周炎関連遺伝子が明らかとなり、歯根膜幹細胞の表現型に影響を及ぼす遺伝子の存在も示唆されている。これらの遺伝子を標的とした化学的・生物学的アプローチによるゲノム創薬は、次世代の歯周組織再生薬創出への糸口となることが予想される。(著者抄録), (株)北隆館, 日本語

TNF-α刺激した老化ヒト歯髄細胞の象牙芽細胞様分化の解析
野津 葵, 濱野 さゆり, 友清 淳, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, 杉井 英樹, 一法師 啓太, 前田 英史, 基礎老化研究, 43, 2, 92, 92, 2019年06月
日本基礎老化学会, 日本語

Nano hydroxyapatite含有4-META/MMA-TBBレジンがヒト前骨芽細胞に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
吉田 晋一郎, 糸山 知宏, 野津 葵, 杉井 英樹, 長谷川 大学, 友清 淳, 濱野 さゆり, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 150回, 85, 85, 2019年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

Activin Aが有する二極性の細胞分化誘導能に関する分子機構の解明　　　　　　　　　　　　　　　
杉井 英樹, 友清 淳, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, Albougha Mhd Safwan, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 150回, 114, 114, 2019年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

Aryl hydrocarbon receptor signalingの活性化がヒト歯根膜細胞に及ぼす影響について
友清 淳, 日本歯科保存学雑誌, 61, 6, 337, 339, 2018年12月
筆者らは、アリール炭化水素受容体(AhR)シグナルの活性化が歯根膜細胞へ及ぼす影響を検証することで、ダイオキシン類が歯周組織破壊を誘導するメカニズムについて解析を行っている。以下に、その概要を述べた。1)ヒト歯根膜細胞におけるAhRの発現とシグナル活性化、2)AhRシグナルの活性化がヒト歯根膜細胞の細胞外基質リモデリングに及ぼす影響、3)AhRシグナルの活性化がヒト歯根膜細胞の石灰化基質形成に及ぼす影響、として述べた。, (NPO)日本歯科保存学会, 日本語

骨組織上に播種した歯髄幹細胞は歯根膜関連遺伝子を発現する 接触する基質の硬さが細胞分化に及ぼす影響
吉田 晋一郎, 和田 尚久, 長谷川 大学, 御手洗 裕美, 有馬 麻衣, 友清 淳, 濱野 さゆり, 杉井 英樹, 前田 英史, 日本歯科保存学雑誌, 61, 6, 343, 353, 2018年12月
目的:重篤な歯周炎や外傷などのケースにおいては、歯槽骨を含め歯の支持組織である歯根膜組織の破壊が進む。ゆえに、歯根膜組織再生を誘導することができる細胞移植を用いた新規歯周組織再生療法の開発が望まれている。歯髄組織には歯髄幹細胞が豊富に含まれており、再生医療の現場では重要な細胞源として注目されている。近年、間葉系幹細胞は接する基質の硬さにより分化の運命が方向づけられるとの報告がされている。そこで本研究では、歯根膜スペースへ移植した歯髄細胞が、接する基質の硬さを触知して歯根膜様細胞分化を遂げる能力を有する可能性を考え、歯周組織を再生させる細胞源としての有用性について検討することとした。材料と方法:ヒト歯髄細胞およびヒト歯根膜細胞は、全身疾患を有さない抜歯目的の患者より抜去した歯から単離し、またヒト歯髄幹細胞およびヒト歯根膜幹細胞は、それぞれヒト歯髄細胞およびヒト歯根膜細胞からsingle colony selectionにより単離して用いた。各種遺伝子発現を、定量的RT-PCR法を用いて検討した。骨芽細胞・脂肪細胞および軟骨細胞誘導実験は、alizarin red S染色、oil red O染色およびalcian blue染色によって評価した。細胞表面抗原の発現を、フローサイトメーターを用いて測定した。健全なブタ下顎骨から縦10mm×横10mm×高さ3mmに整形したブタ顎骨スライスを採取し、実験に用いた。ラットGFP発現歯髄細胞の歯根膜組織へのホーミングについて、ラット第一臼歯の意図的再植時に、抜歯窩へ細胞移植を行い、免疫組織化学的染色法を用いて解析した。成績:ヒト歯髄細胞とヒト歯根膜細胞における歯根膜関連因子の遺伝子発現を比較した結果、ヒト歯根膜細胞において有意な高発現を認めた。ヒト歯髄幹細胞およびヒト歯根膜幹細胞は、多分化能を示し幹細胞マーカーを高発現していた。また、ヒト歯髄細胞およびヒト歯根膜細胞と同様に、ヒト歯髄幹細胞と比較してヒト歯根膜幹細胞は歯根膜関連遺伝子の高発現を認めた。ブタ顎骨スライス上でヒト歯髄幹細胞を培養した結果、歯根膜関連遺伝子発現は、培養ディッシュ上で培養した歯髄幹細胞と比較して有意に上昇しており、その発現量はヒト歯根膜幹細胞と同等であった。加えて、抜歯窩に移植したラットGFP発現歯髄細胞は、再植歯周囲の歯根膜組織内に多く生着していることが認められた。結論:ヒト歯髄幹細胞を骨基質上で培養すると歯根膜関連遺伝子発現が上昇し、歯根膜組織を再生させる細胞源として有用である可能性が示唆された。(著者抄録), (NPO)日本歯科保存学会, 日本語

【1つ上を目指す歯内療法へのアプローチ 感染根管治療Retreatment III】根管洗浄と根管貼薬
前田 英史, 友清 淳, 日本歯科評論, 78, 11, 49, 63, 2018年11月
(株)ヒョーロン・パブリッシャーズ, 日本語

Semaphorin 3Aによる修復象牙質形成過程へのSonic hedgehogシグナルの関与　　　　　　　　　　　　　　　
吉田 晋一郎, 糸山 知宏, 長谷川 大学, 有馬 麻衣, 友清 淳, 濱野 さゆり, 杉井 英樹, 野津 葵, 和田 尚久, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 149回, 34, 34, 2018年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

ヒト歯髄細胞の象牙芽細胞様分化におよぼすsFRP1の影響について　　　　　　　　　　　　　　　
一法師 啓太, 友清 淳, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 吉田 晋一郎, 杉井 英樹, 有馬 麻衣, 野津 葵, 和田 尚久, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 149回, 114, 114, 2018年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

GDNFは未分化なヒト歯根膜細胞のシュワン細胞様分化を誘導する　　　　　　　　　　　　　　　
糸山 知宏, 吉田 晋一郎, 友清 淳, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 杉井 英樹, 有馬 麻衣, 野津 葵, 和田 尚久, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 149回, 145, 145, 2018年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

LGR4が未分化なヒト歯根膜細胞の増殖能、走化性および骨芽細胞様分化に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
有馬 麻衣, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, 御手洗 裕美, 友清 淳, 濱野 さゆり, 杉井 英樹, 和田 尚久, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 149回, 147, 147, 2018年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

未分化なヒト歯根膜クローン細胞株およびハイドロキシアパタイト焼成体を用いた人工歯根作製について　　　　　　　　　　　　　　　
小野 太雅, 友清 淳, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 吉田 晋一郎, 杉井 英樹, 有馬 麻衣, 小川 真里奈, 野津 葵, 和田 尚久, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 149回, 156, 156, 2018年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

象牙芽細胞分化に及ぼすドーパミンの影響について　　　　　　　　　　　　　　　
藤野 翔香, 濱野 さゆり, 友清 淳, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, 杉井 秀樹, 鷲尾 絢子, 御手洗 裕美, 野津 葵, 有馬 麻衣, 和田 尚久, 北村 知昭, 前田 英史, 清島 保, 和田 裕子, 長谷川 佳那, 日本歯内療法学会学術大会プログラム・抄録集, 39回, 90, 90, 2018年07月
日本歯内療法学会, 日本語

Nano Hydroxyapatite含有4-META/MMA-TBBレジンがヒト歯髄幹細胞に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
吉田 晋一郎, 杉井 英樹, 友清 淳, 長谷川 大学, 糸山 知宏, 野津 葵, 有馬 麻衣, 濱野 さゆり, 御手洗 裕美, 和田 尚久, 前田 英史, 日本歯内療法学会学術大会プログラム・抄録集, 39回, 129, 129, 2018年07月
日本歯内療法学会, 日本語

新規幹細胞関連因子MESTがヒト歯根膜細胞の幹細胞転換に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
長谷川 大学, 長谷川 佳那, 御手洗 裕美, 有馬 麻衣, 濱野 さゆり, 吉田 晋一郎, 友清 淳, 杉井 英樹, 和田 尚久, 清島 保, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 148回, 45, 45, 2018年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

老化したヒト歯髄細胞の象牙芽細胞様分化におよぼすTNF-αの影響について　　　　　　　　　　　　　　　
野津 葵, 濱野 さゆり, 友清 淳, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, 杉井 英樹, 御手洗 裕美, 一法師 啓太, 和田 尚久, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 148回, 88, 88, 2018年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

Activin Aがヒト歯根膜細胞およびヒト前骨芽細胞の骨芽細胞様分化に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
杉井 英樹, 友清 淳, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, 御手洗 裕美, 野津 葵, 有馬 麻衣, 糸山 知宏, 小野 太雅, 藤野 翔香, 一法師 啓太, 和田 尚久, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 148回, 100, 100, 2018年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

Basic Fibroblast Growth FactorおよびephrinB2がヒト歯根膜細胞の増殖に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
小野 太雅, 友清 淳, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 吉田 晋一郎, 杉井 英樹, 御手洗 裕美, 有馬 麻衣, 野津 葵, 和田 尚久, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 148回, 101, 101, 2018年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

R-spondin2はカノニカルWntシグナルを介して未分化なヒト歯根膜細胞の骨芽細胞様分化を促進する　　　　　　　　　　　　　　　
有馬 麻衣, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, 御手洗 裕美, 友清 淳, 濱野 さゆり, 杉井 英樹, 和田 尚久, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 147回, 33, 33, 2017年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

Nano Hydroxiapatite含有4-META/MMA-TBBレジンがヒト歯髄幹細胞に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
吉田 晋一郎, 杉井 英樹, 友清 淳, 長谷川 大学, 糸山 知宏, 御手洗 裕美, 有馬 麻衣, 濱野 さゆり, 野津 葵, 和田 尚久, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 147回, 48, 48, 2017年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

歯内治療ならびに修復処置関連溶液によって生じるWhite Mineral Trioxide Aggregateの色調変化に関する比較分析
友清 淳, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 御手洗 裕美, 有馬 麻衣, 野津 葵, 和田 尚久, 前田 英史, 日本歯科保存学雑誌, 60, 4, 200, 210, 2017年08月
目的:直接覆髄や穿孔部封鎖に用いたWhite Mineral Trioxide Aggregate(WMTA)が,往々にして色調変化をきたすことが知られている一方で,その色調と浸透深さに関する研究報告は少ない.そこで本研究は,歯内治療ならびに修復処置に関連する7種類の溶液を用い,それらによって生じるWMTAの色調変化パターンや浸透深さについて検証することを目的とした.材料と方法:WMTAを蒸留水(DW)と通法に従い混和したものを型枠に填入し,硬化させることによりWMTA diskを作製した.これらのdiskを次亜塩素酸ナトリウム溶液(以下,NaClO),エチレンジアミン四酢酸溶液(以下,EDTA),過酸化水素溶液(以下,H2O2),ボンディング材(以下,BOND),血液(以下,BLOOD),I型コラーゲン溶液(以下,COL1),およびヨウ素溶液(以下,JG)に浸漬し,またコントロールとしてDWに浸漬した.1,7,14日経過後に測色装置および実体顕微鏡による画像撮影を行った.さらに実体顕微鏡画像に対しては,画像補正用カラーチャートを基に画像補正を行った.次に浸漬後のdiskを割断し,実体顕微鏡下にて割断面の画像撮影を行った.また,酸化ビスマスをDW,NaClO,BLOOD,JGに浸漬し,1,7,14日経過後,WMTA diskと同様の画像撮影および画像補正を行った.これらの画像を用いて,1試料当たり5点の色調測定を行い,平均値および標準偏差を算出した.結果:EDTA,H2O2,BOND,COL1に浸漬したdiskは,DWに浸漬したものと同様の色調を示したが,NaClO,BLOOD,JGに浸漬したdiskには色調変化が生じた.Diskの割断面を観察した結果,NaClOおよびJGに浸漬したdiskでは内部まで色調変化が生じたのに対し,BLOODに浸漬したものでは,内部に色調変化は生じなかった.DW,EDTA,H2O2,BOND,COL1に浸漬したdiskにおいても,内部に色調変化は認められなかった.一方NaClO,BLOOD,JGに浸漬した酸化ビスマスにおいても色調変化が生じたが,WMTA diskの色調変化パターンとは異なっていた.結論:次亜塩素酸ナトリウム溶液,血液,ヨウ素溶液は,硬化後のWMTAの色調変化を引き起こすが,それらの色調や浸透深さは異なることが明らかとなった.(著者抄録), (NPO)日本歯科保存学会, 日本語

Tenomodulinがヒト歯根膜細胞の機能維持に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
長谷川 大学, 和田 尚久, 有馬 麻衣, 吉田 晋一郎, 友清 淳, 濱野 さゆり, 御手洗 裕美, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 146回, 50, 50, 2017年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

新規象牙芽細胞マーカーとしてのチロシン水酸化酵素の可能性　　　　　　　　　　　　　　　
藤野 翔香, 濱野 さゆり, 芹田 俊, 友清 淳, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, 水町 博之, 御手洗 裕美, 和田 尚久, 清島 保, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 146回, 121, 121, 2017年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

根管治療ならびに修復処置関連溶液によって誘導されるMineral Trioxide Aggregateの色調変化に関する比較分析　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳, 和田 尚久, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 芹田 俊, 御手洗 裕美, 水町 博之, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 145回, 37, 37, 2016年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

R-spondin2が未分化なヒト歯根膜細胞の線維芽細胞様分化に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
園田 麻衣, 長谷川 大学, 和田 尚久, 吉田 晋一郎, 御手洗 裕美, 友清 淳, 濱野 さゆり, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 145回, 158, 158, 2016年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

歯根膜および皮膚由来ヒト人工多能性幹細胞(iPSC)を用いた神経堤細胞様細胞の樹立とキャラクタリゼーション　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳, 和田 尚久, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 前田 英史, 日本歯科医師会雑誌, 69, 5, 480, 480, 2016年08月
(公社)日本歯科医師会, 日本語

Future Perspectives in Dental Stem Cell Engineering and the Ethical Considerations　　　　　　　　　　　　　　　
Naohisa Wada, Atsushi Tomokiyo, Hidefumi Maeda, 2016年07月
To date, when teeth are damaged or missing, they are restored or compensated by using artificial material fillings, crowns or dentures. However, because dental tissues, such as the dentin/pulp complex, periodontal tissue or whole tooth, are composed of both soft and hard tissues, their complex structures are not easy to be reconstructed. Thus, there is a great need for alternative therapies for regenerating damaged dental tissue with greater efficiency. Recently, cell-based therapies that use stem cells to facilitate tissue regeneration have been investigated for different clinical applications. To achieve tissue regeneration, many scientists and dentists believe that three elements are essential: cells, growth factors, and scaffolds, with numerous studies currently underway. There are still many unanswered questions in the development of an effective method for dental tissue engineering, such as the following. Which stem cell population is appropriate for dental tissue regeneration? What factors are needed for inducing cell differentiation into the required cell population for transplantation or for inducing dedifferentiation into stem-like cells? What is the best scaffold for tissue engineering? What ethical issues must be addressed? More recently, a number of reports have been published that have brought us closer to answering some of these questions. The development of allogeneic stem cell applications, along with the identification of stem cell-induction factors, dental tissue-derived induced pluripotent stem cells, and biomimetic scaffolds could help promote better tissue regeneration in the near future., Dental Stem Cells Part of the series Stem Cell Biology and Regenerative Medicine pp 289-307, 英語

Periodontal Ligament Stem Cells in Regenerative Dentistry for Periodontal Tissues　　　　　　　　　　　　　　　
Atsushi Tomokiyo, Naohisa Wada, Sayuri Hamano, Daigaku Hasegawa, Hideki Sugii, Shinichiro Yoshida, Hidefumi Maeda, 2016年07月
The ideal periodontal treatment is regenerating functional periodontal tissues destroyed by severe periodontitis. The tissue engineering triad includes stem cells, biological signals, and cell-seeded scaffold that are considered to be essential for tissue regeneration. Periodontal ligament (PDL) tissue contains a stem cell population, periodontal ligament stem cells (PDLSC), that is derived the neural crest tissue. PDLSC demonstrate high proliferative capacity and multipotency that make them a highly promising stem cell population for use in the regeneration of damaged periodontal tissues. Here, we review the current understanding of the features and functions of PDLSC., Journal of Stem Cell Research & Therapeutics, 英語

MESTはヒト歯根膜幹細胞における幹細胞特性の維持に関与する　　　　　　　　　　　　　　　
長谷川 大学, 和田 尚久, 濱野 さゆり, 友清 淳, 吉田 晋一郎, 御手洗 裕美, 園田 麻衣, 杉井 英樹, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 144回, 52, 52, 2016年06月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

iPS細胞由来の歯根膜幹細胞様細胞の樹立　　　　　　　　　　　　　　　
濱野 さゆり, 友清 淳, 和田 尚久, 長谷川 大学, 杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 芹田 俊, 水町 博之, 御手洗 裕美, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 144回, 66, 66, 2016年06月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

歯髄細胞におけるβig-h3の発現および機能について　　　　　　　　　　　　　　　
芹田 俊, 友清 淳, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 水町 博之, 御手洗 裕美, 和田 尚久, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 144回, 123, 123, 2016年06月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

ヒト歯髄細胞の老化と象牙芽細胞様分化におよぼすTNF-αの影響について　　　　　　　　　　　　　　　
野津 葵, 友清 淳, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 吉田 晋一郎, 杉井 英樹, 芹田 俊, 水町 博之, 御手洗 裕美, 和田 尚久, 前田 英史, 日本歯内療法学会学術大会プログラム・抄録集, 37回, 88, 88, 2016年06月
日本歯内療法学会, 日本語

Immunomodulatory Properties of PDLSC and Relevance to Periodontal Regeneration
Naohisa Wada, Atsushi Tomokiyo, Stan Gronthos, P. Mark Bartold, Current Oral Health Reports, 2, 4, 245, 251, 2015年12月01日
Periodontitis, a major chronic inflammatory disease of dental tissue, causes periodontal tissue destruction and alveolar bone resorption. When large amounts of alveolar bone are lost, it is very difficult to regenerate the bone using conventional treatments. Periodontal ligament stem cells (PDLSCs) have attracted much attention as potential cell sources for alternative periodontitis regenerative treatment because of their capacity for self-renewal and multipotency. Recently, PDLSCs were found to possess immunomodulatory properties. PDLSCs lack the expression of immune co-stimulating factors and suppress immune cell proliferation following stimulation with mitogens or in mixed allogeneic lymphocyte reactions. Because of these characteristics, the anti-inflammatory effects of PDLSCs and the establishment of allogeneic PDLSC transplantation therapies have been well studied. The aim of this review is to provide an assessment of the latest findings on the immunomodulatory properties of PDLSCs and their potential clinical application for periodontal tissue regeneration., Springer Science and Business Media B.V., 英語, 書評論文,書評,文献紹介等

ヒト歯髄細胞の石灰化におけるCalcium-sensing receptorの関与について　　　　　　　　　　　　　　　
水町 博之, 友清 淳, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 吉田 晋一朗, 杉井 英樹, 芹田 俊, 御手洗 裕美, 和田 尚久, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 143回, 149, 149, 2015年11月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

炎症性サイトカインで刺激したヒト歯根膜細胞由来のGDNFはPC12の神経細胞分化を促進する　　　　　　　　　　　　　　　
吉田 晋一郎, 山本 直秀, 和田 尚久, 友清 淳, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 祐田 明香, 御手洗 裕美, 杉井 英樹, 前田 英史, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 143回, 188, 188, 2015年11月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

Is There a Role for Neural Crest Stem Cells in Periodontal Regeneration?　　　　　　　　　　　　　　　
Atsushi Tomokiyo, Hynes Kim, Gronthos Stan, Naohisa Wada, Bartold Peter Mark, 2015年10月
Current Oral Health Reports, 英語

歯根膜および皮膚由来ヒト人工多能性幹細胞(iPSC)を用いた神経堤細胞様細胞の樹立とその表現型の比較　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳, 前田 英史, 和田 尚久, 門野内 聡, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 祐田 明香, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 142回, 81, 81, 2015年06月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

歯根膜細胞におけるα-SMA発現にTransgelinが関与する　　　　　　　　　　　　　　　
御手洗 裕美, 和田 尚久, 前田 英史, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, 濱野 さゆり, 祐田 明香, 友清 淳, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 142回, 190, 190, 2015年06月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

骨芽細胞様分化におけるActivin Aの作用は前骨芽細胞と歯根膜細胞とで相反する　　　　　　　　　　　　　　　
杉井 英樹, 前田 英史, 友清 淳, 和田 尚久, 門野内 聡, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 祐田 明香, 吉田 晋一郎, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 141回, 32, 32, 2014年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

β2アドレナリン受容体の作動薬および非作動薬がヒト歯根膜細胞に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
濱野 さゆり, 前田 英史, 長谷川 大学, 和田 尚久, 友清 淳, 門野内 聡, 祐田 明香, 杉井 英樹, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 140回, 84, 84, 2014年06月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

Wnt5aがヒト歯根膜細胞に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
長谷川 大学, 和田 尚久, 前田 英史, 友清 淳, 門野内 聡, 郡 勝明, 吉田 晋一郎, 寺松 陽子, 濱野 さゆり, 祐田 明香, 杉井 英樹, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 139回, 65, 65, 2013年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

CCNファミリー研究のメルティングポット CTGF/CCN2が未分化なヒト歯根膜細胞株の骨芽細胞様分化に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
祐田 明香, 前田 英史, 藤井 慎介, 門野内 聡, 山本 直秀, 和田 尚久, 友清 淳, 郡 勝明, 濱野 さゆり, 赤峰 昭文, Journal of Oral Biosciences Supplement, 2013, 96, 96, 2013年09月
(一社)歯科基礎医学会, 日本語

Activin Aがヒト歯根膜細胞に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
杉井 英樹, 前田 英史, 友清 淳, 山本 直秀, 郡 勝明, 和田 尚久, 門野内 聡, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 祐田 明香, 寺松 陽子, 河野 清美, 吉田 晋一郎, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 138回, 227, 227, 2013年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

肥満へ影響を及ぼす生活習慣因子とその相互関係性
東 正裕, 仲井 宏充, 友清 雅子, 川口 淳, 健康支援, 15, 1, 25, 35, 2013年02月
肥満へ影響を及ぼす生活習慣因子とその相互関係性について検討した。就労者を対象に自記式アンケート調査を計画し、1060例から回答を得ることが出来た。生活習慣因子と肥満の関連性は年齢階層で変化し、50歳以上になると、肥満に対して生活習慣の影響を直接、間接的に受けやすくなった。朝食摂取と肥満の関係は40歳以上50歳未満では、その関連は見られなかったが、50歳以上になると朝食欠食は約4倍の肥満のリスクとなった。各年齢階層における肥満者でかつ朝食欠食習慣を有する者の割合が16.5〜21.4%の範囲にあるのに比べ、普通・低体重でかつ朝食欠食習慣を有する者は40歳未満で27.7%、40歳以上50歳未満で15.9%、50歳以上で7.7%であった。運動習慣は40歳未満、40歳以上50歳未満のグラフィカルモデルでは他の生活習慣が、50歳以上になると運動習慣と肥満には直接的及び間接的関係が見られた。, 日本健康支援学会, 日本語

本学での無菌マウス用アイソレータの立ち上げとノトバイオート化マウスによる研究成果
高畑 宗明, 竹尾 淳, 友清 帝, 中野 章代, 森田 英利, 麻布大学雑誌, 24, 101, 102, 2013年01月
麻布大学, 日本語

β2アドレナリン受容体の非作動薬であるPropranololがヒト歯根膜細胞の骨芽細胞分化に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
濱野 さゆり, 前田 英史, 友清 淳, 山本 直秀, 門野内 聡, 和田 尚久, 河野 清美, 郡 勝明, 寺松 陽子, 長谷川 大学, 祐田 明香, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 137回, 151, 151, 2012年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

分化能の異なるヒト歯根膜細胞クローンの単離及びキャラクタライゼーション　　　　　　　　　　　　　　　
長谷川 大学, 和田 尚久, 前田 英史, 藤井 慎介, 郡 勝明, 友清 淳, 門野内 聡, 河野 清美, 山本 直秀, 寺松 陽子, 濱野 さゆり, 祐田 明香, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 137回, 152, 152, 2012年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

Sema3Aがヒト歯根膜細胞の幹細胞/未分化細胞誘導に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
和田 尚久, 前田 英史, 長谷川 大学, 藤井 慎介, 山本 直秀, 友清 淳, 門野内 聡, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 136回, 75, 75, 2012年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

ダイオキシン関連物質がヒト歯根膜細胞の骨芽細胞分化に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
門野内 聡, 前田 英史, 友清 淳, 和田 尚久, 河野 清美, 郡 勝明, 山本 直秀, 寺松 陽子, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 136回, 81, 81, 2012年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

EGFがヒト歯根膜細胞に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
寺松 陽子, 前田 英史, 友清 淳, 門野内 聡, 山本 直秀, 和田 尚久, 藤井 慎介, 河野 清美, 郡 勝明, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 135回, 191, 191, 2011年09月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

レジンシーラーの細胞親和性について スーパーボンド根充シーラーとAH Plusとの比較
前田 英史, 友清 淳, 郡 勝明, 藤井 慎介, 門野内 聡, 和田 尚久, 河野 清美, 山本 直秀, 寺松 陽子, 赤峰 昭文, 日本歯内療法学会雑誌, 32, 2, 97, 101, 2011年05月
生体にシーラーを応用した場合、組織に面した部分は絶えず組織液に曝されていることを想定して、重合後のシーラーを7日間洗浄し、重合直後のシーラーと比較することによって、洗浄したシーラーがヒト歯根膜細胞の増殖に及ぼす影響を比較した。抜去歯の歯根膜組織を採取した。48穴プレートの各ウェルの底面にスーパーボンド根充シーラー(SB)またはAH PIus(AP)のfresh群またはwash群のディスクを静置し、HPDLCを播種した。SB及びAPのいずれも重合当初において、細胞傷害性を有した成分が溶出していた。しかし、7日間の洗浄によって、SBからのこのような成分の溶出量は減少し、SB表面では歯根膜細胞のセメント芽細胞/骨芽細胞様分化が可能となったと思われた。APから溶出する成分は、7日間の洗浄では、細胞増殖を可能にする程度までには減少せず、AP上に接着した細胞を観察することができなかったと考えられた。, 日本歯内療法学会, 日本語

ヒト歯根膜細胞への伸展刺激はInterleukin-11の発現を促進する　　　　　　　　　　　　　　　
門野内 聡, 前田 英史, 山本 直秀, 藤井 慎介, 友清 淳, 和田 尚久, 河野 清美, 郡 勝明, 寺松 陽子, 木原 智子, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 134回, 62, 62, 2011年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

Passive Ultrasonic Irrigationによる根管洗浄の効果 SEM観察　　　　　　　　　　　　　　　
木原 智子, 前田 英史, 郡 勝明, 寺松 陽子, 和田 尚久, 藤井 慎介, 友清 淳, 門野内 聡, 河野 清美, 山本 直秀, 後藤 康治, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 134回, 116, 116, 2011年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

【油症とPCB及びダイオキシン関連化合物に関する研究 報告集 第23集】油症患者における歯周疾患ならびに口腔内色素沈着の疫学的調査(第八報)
橋口 勇, 吉嶺 嘉人, 前田 英史, 後藤 康治, 和田 尚久, 藤井 慎介, 友清 淳, 齋籐 桐枝, 門野内 聡, 河野 清美, 奥村 英彦, 赤峰 昭文, 福岡医学雑誌, 102, 4, 75, 80, 2011年04月
油症患者における歯周疾患や口腔内色素沈着の罹患状況と経年的変化を把握するために、平成22年度の福岡県油症一斉検診時に歯科を受診した油症認定患者122名(男性56名、女性66名)を対象に、問診、視診やX線診(パントモグラフ)と同時に歯周ポケット診査を行った。主訴としては歯周組織炎や歯髄炎が多かった。深さ3mm以上の歯周ポケットを1歯でも有している患者は、被験者117名中104名(88.9%)と高い割合を示した。3mm以上の歯周ポケットを有する歯牙は総被検歯551歯中314歯(57.0%)であったが、その殆どは深さ4mm未満であった。口腔内色素沈着を有している患者は63名(51.6%)で、部位としては歯肉の色素沈着が最も多かった。女性より男性の発現率が高く、また70歳未満の患者に多く認められた。, 福岡医学会, 日本語

bFGFが未分化なヒト歯根膜細胞株の線維芽細胞様分化に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
河野 清美, 前田 英史, 和田 尚久, 藤井 慎介, 友清 淳, 門野内 聡, 山本 直秀, 郡 勝明, 寺松 陽子, 木原 智子, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 133回, 175, 175, 2010年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

ヒト歯根膜および歯髄細胞の免疫抑制特性に関する研究　　　　　　　　　　　　　　　
和田 尚久, 前田 英史, 藤井 慎介, 友清 淳, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 133回, 176, 176, 2010年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

未分化なヒト歯根膜細胞株の分化に及ぼすカルシウムの影響について　　　　　　　　　　　　　　　
郡 勝明, 前田 英史, 藤井 慎介, 友清 淳, 門野内 聡, 和田 尚久, 河野 清美, 山本 直秀, 寺松 陽子, 木原 智子, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 133回, 177, 177, 2010年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

スーパーボンドシーラーの特性について ヒト歯根膜細胞の増殖と分化に与える影響　　　　　　　　　　　　　　　
前田 英史, 友清 淳, 郡 勝明, 藤井 慎介, 門野内 聡, 安田 善之, 山本 直秀, 堀 清美, 和田 尚久, 斎藤 隆史, 赤峰 昭文, 日本歯内療法学会学術大会プログラム・抄録集, 31回, 94, 94, 2010年05月
日本歯内療法学会, 日本語

AhRシグナルがヒト歯根膜細胞のコラーゲン代謝に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳, 前田 英史, 藤井 慎介, 和田 尚久, 門野内 聡, 堀 清美, 郡 勝明, 山本 直秀, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 131回, 49, 49, 2009年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

Mineral trioxide aggregate(MTA)がヒト歯根膜線維芽細胞に及ぼす影響に関する研究
前田 英史, 友清 淳, 藤井 慎介, 島 一也, 和田 尚久, 門野内 聡, 堀 清美, 中野 嗣久, 吉嶺 嘉人, 赤峰 昭文, 日本歯科保存学雑誌, 52, 4, 355, 362, 2009年08月
Mineral trioxide aggregate(MTA)は90年代初頭に歯内治療用修復材として開発・報告された.以来,優れた生体適合性を有していることが明らかになり,直接覆髄,根管または分岐部穿孔,逆充填,Apexificationなどへの応用例において,その表面に硬組織を伝導し,その結果MTAによって修復された部位の周囲組織の再生を促す働きがあることが報告されている.しかしながら,MTAが歯根膜組織に及ぼす影響については不明な点が多いことから,本研究では,ヒト歯根膜線維芽細胞(HPLF)を用いて,MTAへの付着,およびMTAがHPLFの増殖ならびに分化に及ぼす影響へのカルシウムの関与について検討することを目的とした.直径9mm,厚さ1mmのMTA discを作製し,2名の患者から提供された2種のHPLFとの共培養を行った.培養24時間後には,HPLFはMTAの表面形状が粗な面ならびに平滑な面の双方に,同様の接着傾向を示した.またMTAとの共培養において,播種するHPLFの細胞数の違いによる増殖能への影響について検討した結果,低い細胞密度で播種した場合には,培養7日間で細胞数はほとんど増加せず,増殖が制限されていたが,高密度で播種した場合には,MTAを含まないコントロールと同等の細胞増殖を示した.MTAと4週間培養したHPLFは,MTA周囲において石灰化が促進する傾向が観察された.また,HPLFを5mmol/l CaCl2を添加した培地中で4日間培養した結果,オステオポンチン(OPN)ならびにオステオカルシン(OCN)mRNAの発現が促進し,さらに4週間後には石灰化像が観察された.これらの結果から,MTAはHPLFに対して細胞親和性を有しており,さらにHPLFの骨芽細胞/セメント芽細胞様分化を促進する働きをもち,これにはMTAから溶出するカルシウムが関与している可能性が示唆された.(著者抄録), (NPO)日本歯科保存学会, 日本語

【油症とPCB及びダイオキシン関連化合物に関する研究報告集 第22集】油症患者における歯周疾患ならびに口腔内色素沈着の疫学的調査(第七報)
橋口 勇, 吉嶺 嘉人, 前田 英史, 後藤 康治, 藤井 慎介, 友清 淳, 吉田 桐枝, 西垣 奏一郎, 門野内 聡, 堀 清美, 奥村 英彦, 赤峰 昭文, 福岡医学雑誌, 100, 5, 111, 117, 2009年05月
平成20年度の福岡県における油症患者の一斉検診時の結果を基に、口腔内疾患特に歯周疾患や口腔内色素沈着の罹患状況について検討した。平成20年度に歯科を受診した油症患者は155名(男75名、女80名)で問診で口腔内病変・不快症状を訴えた患者は81名で歯肉腫脹、歯痛、歯肉出血といった歯周組織や歯髄の炎症が多かったが口腔内色素沈着による審美障害の訴えはなかった。深さ3mm以上の歯周ポケットを1歯でも有している患者は被験者148名中129名と非常に高い割合を示した。同様に3mm以上の歯周ポケットを有する歯牙は710の総被検歯中399歯であったが、その殆どは4mm未満であった。口腔内色素沈着を有している患者は91名で発現率は58.7%、歯肉の色素沈着が多かった。傾向は男、若年者に多く、歯肉以外の色素沈着は50歳以上のみでPCB、PCB関連物質の関与が疑われた。, 福岡医学会, 日本語

伸展力が負荷されたヒト歯根膜細胞のシグナル伝達にはAngiotensin IIが関与している　　　　　　　　　　　　　　　
門野内 聡, 前田 英史, 藤井 慎介, 友清 淳, 堀 清美, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 130回, 201, 201, 2009年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

TGF-β1がヒト歯根膜細胞および前駆細胞の増殖および分化に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
藤井 慎介, 前田 英史, 友清 淳, 橋口 勇, 門野内 聡, 堀 清美, 和田 尚久, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 130回, 202, 202, 2009年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

MTAはヒト歯根膜細胞のBMP2発現を誘導する　　　　　　　　　　　　　　　
前田 英史, 友清 淳, 藤井 慎介, 島 一也, 中野 嗣久, 和田 尚久, 門野内 聡, 堀 清美, 赤峰 昭文, 特定非営利活動法人日本歯科保存学会学術大会プログラムおよび講演抄録集, 129回, 28, 28, 2008年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

MTAが歯根膜細胞の分化に及ぼす影響に関する研究　　　　　　　　　　　　　　　
前田 英史, 友清 淳, 藤井 慎介, 中野 嗣久, 和田 尚久, 前野内 聡, 堀 清美, 赤峰 昭文, 日本歯科医師会雑誌, 61, 5, 543, 543, 2008年08月
(公社)日本歯科医師会, 日本語

多分化能を有するヒト歯根膜クローン細胞株が神経細胞分化及び細胞遊走に及ぼす影響
友清 淳, 前田 英史, 藤井 慎介, 和田 尚久, 門野内 聡, 赤峰 昭文, 日本歯科保存学雑誌, 51, 春季特別, 43, 43, 2008年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

MTAはヒト歯根膜細胞の骨芽細胞様分化を誘導する
前田 英史, 中野 嗣久, 友清 淳, 藤井 慎介, 門野内 聡, 和田 尚久, 赤峰 昭文, 日本歯科保存学雑誌, 51, 春季特別, 91, 91, 2008年05月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

EDTAならびにNaOClによる根管洗浄後のSEM観察 超音波洗浄との比較
島 一也, 前田 英史, 後藤 康治, 畦森 雅子, 安田 善之, 和田 尚久, 藤井 慎介, 友清 淳, 吉嶺 嘉人, 齋藤 隆史, 赤峰 昭文, 日本歯内療法学会雑誌, 29, 1, 15, 19, 2008年01月
歯根長平均約12mmの単根の抜去歯をcement-enamel junctionで水平横断した後、根管を#60まで拡大形成し、EDTA溶液ならびにNaOClを用いた場合の根管壁のスメア層の除去能について、超音波を用いた場合と比較検討した。その結果、EDTA溶液によるスメア層の除去効果には時間依存性があり、洗浄時間の延長と共にその除去効果が上がっていた。また、NaOClも処理時間の延長と共にスメア層の除去効果が上昇がみられた。根管口〜根中央3分の1でのスメア層の除去効率は高かったが、根尖3〜1mmの部位では効率がやや落ちる傾向があった。超音波による単独洗浄では、チップが接触した根管壁のスメア層はある程度除去されたが、接触していない部位は全く除去されなかった。一方、EDTA溶液を併用した超音波洗浄ではスメア層が全体を通して効果的に除去された。根尖3〜1mmの部位においては、EDTA溶液と超音波の併用が効果的であった。, 日本歯内療法学会, 日本語

油症患者における歯周疾患ならびに口腔内色素沈着の疫学的調査(第六報)
橋口 勇, 吉嶺 嘉人, 前田 英史, 後藤 康治, 石河 真幸, 藤井 慎介, 友清 淳, 福山 宏, 奥村 英彦, 赤峰 昭文, 福岡医学雑誌, 98, 5, 170, 175, 2007年05月
2006年度福岡県カネミ油症一斉検診において歯科を受診した106例(男性44例、女性62例)を対象に歯周ポケットを有する歯牙のポケットの深さを正確に測定し、パントモグラフを用いて歯槽骨吸収の程度や残歯数の状態について検討した。その結果、口腔内の病変や不快症状を訴えたのは45例で、その内訳は歯痛・歯肉出血・歯肉腫脹など歯髄や歯周組織の炎症が多く、口腔内色素沈着による審美障害の訴えはなかった。深さ3mm以上の歯周ポケット1歯以上有している患者は98例(92.5%)と非常に高く、ポケットを有する歯牙は総被検歯494歯中343歯(69.4%)であった。3mm以上の歯周ポケットを有する歯牙の部位は上顎左側第一小臼歯が79%と最も罹患率が高く、次いで下顎右側第一小臼歯・下顎左側第一大臼歯・上顎右側第一大臼歯・上顎左側中切歯の順で、最も罹患率が低い下顎右側中切歯でも約57%と高値であった。口腔内色素沈着の発現率は52.6%で、部位としては歯肉の色素沈着が殆どで口蓋には認めらず、女性より男性、若年者より高齢者に多くみられる傾向が認められた。以上よりPCBやPCB関連物質の歯周病や口腔内色素沈着への関与が示唆された。, 福岡医学会, 日本語

多分化能を持つヒト歯根膜クローン細胞株の樹立とキャラクタリゼーション
友清 淳, 前田 英史, 藤井 慎介, 和田 尚久, 島 一也, 赤峰 昭文, 日本歯科保存学雑誌, 49, 秋季特別, 132, 132, 2006年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

スメアクリーン洗浄後の根管象牙質のSEM観察像 超音波洗浄との比較
島 一也, 前田 英史, 後藤 康治, 畦森 雅子, 和田 尚久, 藤井 慎介, 友清 淳, 赤峰 昭文, 日本歯科保存学雑誌, 49, 秋季特別, 158, 158, 2006年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

MTAおよびSuper-Bondのヒト歯根膜細胞の骨芽細胞様分化に及ぼす影響に関する研究
野田 亮, 前田 英史, 藤井 慎介, 和田 尚久, 友清 淳, 吉嶺 嘉人, 赤峰 昭文, 日本歯内療法学会雑誌, 27, 3, 126, 131, 2006年09月
Mineral Trioxide Aggregate(MTA)およびSuper-Bond(SB)が歯根膜細胞の分化に及ぼす影響について不明な点が多く、ヒト歯根膜細胞の分化、特に骨芽細胞様の分化においてどのような変化を与えているか検討した。DM中で培養したすべての群でvon Kossa陽性の石灰化物を確認したが、特にMTA群で最も多く観察した。CM中で培養したCont群およびSB群では陽性反応は認めなかったが、MTA(CM)培養群では多くの陽性反応を観察した。培養2週目で、ALPase活性はDMにて培養したすべての群でCM培養群と比較して上昇した。Runx2の発現は培養条件に影響を受けず、いずれの条件下でもほぼ同程度を示した。OPNおよびOCNの発現はDMにて培養したすべての群において上昇し、CMにて培養したCont群およびSB群では変化がみられなかったが、MTA群ではDM中で培養した場合と同程度に上昇した。, 日本歯内療法学会, 日本語

ヒト不死化歯根膜クローン細胞におけるEMDおよびbFGFが石灰化誘導に及ぼす影響
友清 淳, 前田 英史, 藤井 慎介, 和田 尚久, 野田 亮, 島 一也, 赤峰 昭文, 日本歯科保存学雑誌, 48, 秋季特別, 227, 227, 2005年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

Induction of regenerative dentin formation in pulp progenitor/stem cells by Gdfl1/Bmp11 transduction
M Nakashima, K Iohara, M Ishikawa, A Tomokiyo, A Akamine, MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL, 15, 128A, 128A, 2004年11月
AMER SOC CELL BIOLOGY, 英語, 研究発表ペーパー・要旨（国際会議）

自己複製能と多能性を有する歯髄幹細胞の分取,培養法の開発
友清 淳, 中島 美砂子, 庵原 耕一郎, 石河 真幸, 赤峰 昭文, 日本歯科保存学雑誌, 47, 秋季特別, 37, 37, 2004年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

歯髄幹細胞を用いたgene therapy法による象牙質再生
庵原 耕一郎, 中島 美砂子, 石河 真幸, 友清 淳, 中島 昭彦, 赤峰 昭文, 日本歯科保存学雑誌, 47, 秋季特別, 197, 197, 2004年10月
(NPO)日本歯科保存学会, 日本語

〔主要な業績〕Detection, Characterization, and Clinical Application of Mesenchymal Stem Cells in Periodontal Ligament Tissue: Advanced Study.　　　　　　　　　　　　　　　
Atsushi Tomokiyo, Shinichiro Yoshida, Sayuri Hamano, Daigaku Hasegawa, Hideki Sugii and Hidefumi Maeda.
Book Publisher International., 2020年07月, 英語, 学術書, ［共著］

日本歯科評論　　　　　　　　　　　　　　　
前田英史, 友清淳
HYORON, 2018年11月, 日本語, 学術書, ［共著］

エンドドンティックス第五版　　　　　　　　　　　　　　　
興地隆史, 石井信之, 小曽根文内
永末書店, 2018年01月, 日本語, 学術書, ［共著］

保存修復学21第五版　　　　　　　　　　　　　　　
田上 順次, 奈良 陽一郎, 山本 一世, 斉藤 隆史, 前田 英史, 友清 淳
永末書店, 2017年03月, 日本語, 学術書, ［共著］

〔主要な業績〕Contribution of Stem Cells to Dental Tissue Regeneration: Isolation, Function, and Application.　　　　　　　　　　　　　　　
Atsushi Tomokiyo, Naohisa Wada, Hidefumi Maeda
Bentham Science Publishers, 2015年12月, 英語, 学術書, ［共著］

Periodontal ligament stem cells.　　　　　　　　　　　　　　　
Hidefumi Maeda, Naohisa Wada, Shinsuke Fujii, Atsushi Tomokiyo, Akifumi Akamine.
InTech, 2011年05月, 英語, 学術書, ［単著］

Promise of periodontal ligament stem cells.　　　　　　　　　　　　　　　
Hidefumi Maeda, Atsushi Tomokiyo, Shinsuke Fujii, Naohisa Wada and Akifumi Akamine
BioMed Central., 2011年05月, 英語, 一般書・啓蒙書, ［単著］

〔主要な業績〕フェノール系貼薬剤はケイ酸カルシウムの体積増加を介して硬化後のWhite Mineral Trioxide Aggregateの崩壊を誘導し封鎖性を低下させる　　　　　　　　　　　　　　　
友清淳, 山下梢, 小野太雅, 一法師啓太, M.Anas Alhasan, 濱野さゆり, 長谷川大学, 杉井英樹, 前田英史
第157回日本歯科保存学会, 2022年11月, 日本語
2022年11月10日 - 2022年11月11日, 岡山コンベンションセンター, 日本国, ［国内会議］

〔主要な業績〕バイオミメティクスを基盤とした歯周組織再生療法，直接覆髄剤，およびバイオハイブリッドインプラント創出の試み.　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳
第155回日本歯科保存学会, 2021年10月, 日本語
2021年10月28日 - 2022年11月10日, Web会議, 日本国, ［招待講演］, ［国内会議］

〔主要な業績〕WMTAの組成成分に及ぼすフェノール系貼薬剤の影響について.　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳, 山下 梢, 小野 太雅, 一法師 啓太, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 前田 英史.
第24回日本歯科医学会学術大会., 2021年09月, 日本語
2022年09月23日 - 2022年09月25日, Web会議, 日本国, ［国内会議］

〔主要な業績〕Aryl hydrocarbon receptorの活性化がヒト歯根膜細胞のMMP2およびMMP12発現に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳
令和３年度全国油症治療研究班会議, 2021年06月, 日本語
2021年06月25日 - 2021年06月25日, Web会議, 日本国, ［国内会議］

secreted Frizzled-Related Protein 1 promotes odontoblastic differentiation and reparative dentin formation by regulating Notch signaling in dental pulp cells　　　　　　　　　　　　　　　
K Ipposhi, A Tomokiyo, T Ono, K Yamashita, M. Anas Alhasan, D Hasegawa, S Hamano, S Yoshida, H Sugii, M Ogawa, H Maeda.
Kyudai Oral Bioscience & OBT Research Center Joint International Symposium 2021, 2021年02月, 英語
2021年06月 - 2021年06月, Web開催, 日本国, ［国際会議］

直接覆髄後の歯髄組織におけるM2マクロファージの集簇　　　　　　　　　　　　　　　
門脇 正敬, 吉田 晋一郎, 糸山 知宏, 友清 淳, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 杉井英樹, 前田 英史
第153回日本歯科保存学会秋季学術大会, 2020年11月, 日本語
2021年06月 - 2021年06月, Web開催, 日本国, ［国内会議］

iPS細胞から歯根膜幹細胞様細胞への分化誘導能を有する転写因子の同定　　　　　　　　　　　　　　　
杉浦 梨紗, 濱野 さゆり, 友清 淳, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, 杉井 英樹, 前田英史.
第153回日本歯科保存学会秋季学術大会, 2020年11月, 日本語
2021年06月 - 2021年06月, Web開催, 日本国, ［国内会議］

Decorinが未分化なヒト歯根膜細胞の骨芽細胞様分化に及ぼす影響．　　　　　　　　　　　　　　　
足立 織利恵, 杉井 英樹, 糸山 知宏, 友清 淳, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 吉田晋一郎
第153回日本歯科保存学会秋季学術大会（Web開催）, 2020年11月, 日本語
2021年06月 - 2021年06月, Web開催, 日本国, ［国内会議］

〔主要な業績〕フェノール系貼薬剤は硬化後のWhite Mineral Trioxide Aggregateの崩壊および色調変化を誘導する　　　　　　　　　　　　　　　
友清淳, 山下梢, 小野太雅, 一法師啓太, 濱野さゆり, 長谷川大学, 杉井英樹, 吉田晋一郎, 前田英史
第４１回日本歯内療法学会学術大会, 2020年06月, 日本語
2020年06月27日 - 2020年06月28日, 誌上開催, 日本国, White Mineral Trioxide Aggregate (WMTA) は、Portland cement (PC) と同様にケイ酸カルシウムを主原料とする歯科用セメントであり、高い封鎖性と硬組織形成誘導作用を示すことから、穿孔部封鎖材として広く使用されている。また往々にして、WMTAによる穿孔部封鎖後も継続的に根管治療を行うことがある。フェノール製剤は消炎鎮痛作用および消毒作用を有することから、根管治療を行う際に根管貼薬剤として使用されることがある。しかしながら、フェノール系貼薬剤がWMTAに及ぼす影響は明らかとなっていない。そこで本研究では、2種類のフェノール系貼薬剤がWMTAの崩壊および色調変化に及ぼす影響について検証することとした。, ［国内会議］

〔主要な業績〕レジン系、バイオガラス系およびシリコン系根管充填用シーラーのヒト歯根膜幹細胞株に対する細胞親和性比較　　　　　　　　　　　　　　　
友清淳, 長谷川大学, 小野太雅, 一法師啓太, 山下梢, M.Anas Alhasan, 濱野さゆり, 杉井英樹, 吉田晋一郎, 前田英史
第１５２回日本歯科保存学会, 2020年06月, 日本語
2020年06月11日 - 2020年06月12日, 誌上開催, 日本国, 根管充填に用いるシーラーの役割は、充填材と根管壁間の空隙を塞ぎ根管の封鎖性を向上させることである。さらに根管充填後の根尖部においては、シーラーと歯根膜組織が持続的に接触することとなることから、シーラーには高い細胞親和性も求められる。歯根膜組織には歯根膜幹細胞が存在し、根尖周囲組織の治癒に重要な役割を果たすことが知られている。しかしながら、歯根膜幹細胞に対するシーラーの細胞親和性は未だ不明な点が多い。そこで本研究ではヒト歯根膜幹細胞株を使用し、細胞親和性に優れることが報告されている3種類のシーラーが細胞増殖および歯根膜細胞関連遺伝子ならびに細胞増殖関連遺伝子発現に及ぼす影響について比較することで、それらの歯根膜幹細胞に対する細胞親和性を検証することとした。, ［国内会議］

〔主要な業績〕Discoloration of White Mineral Trioxide Aggregate Immersed in Various Solutions　　　　　　　　　　　　　　　
TOMOKIYO Atusushi, HAMANO Sayuri, HASEGAWA Daigaku, SUGII Hideki, YOSHIDA Shinichirou, MITARAI Hiromi, ARIMA Mai, NOZU Aoi, WADA Naohisa, MAEDA Hidefum
96th International Association of Dental Research, 2018年07月, 英語
2018年07月25日 - 2019年07月28日, ExCel London Convention Centre, London, グレートブリテン・北アイルランド連合王国(英国), ［国際会議］

ヒト歯根膜クローン細胞株およびハイドロキシアパタイト焼成体を用いた人工歯根作製についての検討　　　　　　　　　　　　　　　
小野太雅, 友清淳, 長谷川大学, 濱野さゆり, 吉田晋一郎, 杉井英樹, 有馬麻衣, 野津葵, 和田尚久, 前田英史
第149回日本歯科保存学会, 2018年11月, 日本語
2018年11月02日 - 2018年11月03日, 京都市勧業館みやこめっせ、京都, 日本国, ［国内会議］

ヒト歯髄細胞の象牙芽細胞分化に及ぼすsFRP1の影響について　　　　　　　　　　　　　　　
一法師啓太, 友清淳, 長谷川大学, 濱野さゆり, 吉田晋一郎, 杉井英樹, 有馬麻衣, 野津葵, 和田尚久, 前田英史
第149回日本歯科保存学会, 2018年11月, 日本語
2018年11月02日 - 2018年11月03日, 京都市勧業館みやこめっせ、京都, 日本国, ［国内会議］

Activin A reversely works on the osteoblastic differentiation in human pre-osteoblastic cells and periodontal ligament cells.　　　　　　　　　　　　　　　
Hideki Sugii, Atsushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Daigaku hasegawa, Shinichiro Yoshida, Hiromi Mitarai, Aoi Nozu, Mai Arima, Tomohiro Itoyama, Taiga Ono, Shoko Fujino, Keita Ippoushi, Naohisa Wada, Hidefumi Maeda
The 65th Annual meeting of Japanese Association for Dental Research, 2017年11月, 日本語
2018年08月 - 2018年08月, Tokyo, 日本国, ［国際会議］

Nano Hydroxyapatite含有4-META/MMA-TBBレジンがヒト歯髄幹細胞に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
吉田晋一郎, 杉井英樹, 友清淳, 長谷川大学, 糸山知宏, 御手洗裕美, 有馬麻衣, 濱野さゆり, 野津葵, 和田尚久, 前田英史
日本歯科保存学会平成29年度秋季大会, 2017年10月, 日本語
2018年08月 - 2018年08月, マリオス（盛岡市）, 日本国, ［国内会議］

R-spondin2はカノニカルWntシグナルを介して未分化なヒト歯根膜細胞の骨芽細胞分化を促進する　　　　　　　　　　　　　　　
有馬麻衣, 長谷川大学, 吉田晋一郎, 御手洗裕美, 友清淳, 濱野さゆり, 杉井英樹, 和田尚久, 前田英史
日本歯科保存学会平成29年度秋季大会, 2017年10月, 日本語
2018年08月 - 2018年08月, マリオス（盛岡市）, 日本国, ［国内会議］

Tenomodulinがヒト歯根膜細胞の機能維持に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
長谷川大学, 和田尚久, 有馬麻衣, 吉田晋一郎, 友清淳, 濱野さゆり, 御手洗裕美, 前田英史
日本歯科保存学会平成２９年度春季大会, 2017年06月, 日本語
2018年08月 - 2018年08月, リンクステーションホール青森, 日本国, ［国内会議］

新規象牙芽細胞マーカーとしてのチロシン水酸化酵素の可能性　　　　　　　　　　　　　　　
藤野翔香, 濱野さゆり, 芹田俊, 友清淳, 長谷川大学, 吉田晋一郎, 水町博之, 御手洗裕美, 和田尚久, 清島保, 前田英史
日本歯科保存学会平成29年度春季大会, 2017年06月, 日本語
2018年08月 - 2018年08月, リンクステーションホール青森, 日本国, ［国内会議］

Transgekub Neduates TGF-beta1-induced Human Periodontal Ligament Cell Proliferation.　　　　　　　　　　　　　　　
Hiromi Mitarai, Naohisa Wada, Daigaku Hasegawa, Shinichiro Yoshida, Mai Sonoda, Atushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Hidefumi Maeda
95th General Session & Exhibition of the IADR, 2017年03月, 日本語
2018年08月 - 2018年08月, San Francisco, アメリカ合衆国, ［国際会議］

〔主要な業績〕歯根膜および皮膚由来ヒト人工多能性幹細胞（iPSC）を用いた神経堤細胞様細胞の樹立とキャラクタリゼーション　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳, 和田尚久, 濱野さゆり, 長谷川大学, 杉井英樹, 吉田晋一郎, 前田英史
第23回日本歯科医学会総会, 2016年10月, 日本語
2018年08月 - 2018年08月, 福岡国際会議場, 日本国, ［国内会議］

〔主要な業績〕歯根膜および皮膚由来ヒト人工多能性幹細胞(iPSC)を用いた神経堤細胞様細胞の樹立とその表現型の比較　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳, 前田英史, 和田尚久, 門野内聡, 濱野さゆり, 長谷川大学, 祐田明香, 赤峰昭文
日本歯科保存学会平成27年度春季大会, 2015年06月, 日本語
2018年08月 - 2018年08月, 北九州国際会議場および西日本総合展示場, 日本国, ［国内会議］

Basic fibroblast growth factorおよびephrinB2がヒト歯根膜細胞の増殖に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
小野太雅, 友清淳, 長谷川大学, 濱野さゆり, 吉田晋一郎, 杉井英樹, 有馬麻衣, 野津葵, 和田尚久, 前田英史
第148回日本歯科保存学会, 2018年06月, 日本語
2018年06月14日 - 2018年06月15日, 横浜みなとみらいホール、横浜, 日本国, ［国内会議］

〔主要な業績〕根管治療ならびに修復処置関連溶液が誘導するWhite Mineral Trioxide Aggregateの色調変化に関する比較分析　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳, 和田 尚久, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 芹田 俊, 御手洗 裕美, 水町 博之, 前田 英史
平成28年度日本歯科保存学会秋季学術大会, 2016年10月28日, 日本語
2016年10月27日 - 2016年10月28日, 松本市キッセイ文化ホール, 日本国, 目的：直接覆髄や穿孔部封鎖に用いたWhite Mineral Trioxide Aggregate (WMTA) が、往々にして色調変化をきたすことが知られている一方で、その色調と深達度に関する研究報告は少ない。そこで本研究は、根管治療ならびに修復処置に関連する8種類の溶液を用い、それらが誘導するWMTAの色調変化パターンや浸透深さについて検証することを目的とした。
材料と方法：WMTAを蒸留水 (DW) と混和したものを型枠に填入し、硬化させることによりWMTA diskを作製した。これらのdiskをDW、次亜塩素酸ナトリウム溶液 (以下、NaClO)、エチレンジアミン四酢酸溶液 (以下、EDTA)、過酸化水素溶液 (以下、H2O2)、ボンディング材 (以下、BOND)、血液 (以下、BLOOD)、I型コラーゲン溶液 (以下、COL1)、ヨウ素溶液 (以下、JG) に浸漬し、1、7、14日経過後に測色装置および実体顕微鏡による画像撮影を行った。さらに実体顕微鏡画像に対しては、画像補正用カラーチャートを基に画像補正を行った。次に浸漬後のdiskを割断し、実体顕微鏡下にて割断面の画像撮影を行った。また、酸化ビスマスをDW、NaClO、BLOOD、JGに浸漬し、1、7、14日経過後、WMTA diskと同様の画像撮影および画像補正を行った。これらの画像を用いて、1試料辺り5点の色調測定を行い、平均値および標準偏差を算出した。
結果：EDTA、H2O2、BOND、COL1に浸漬したdiskは、DWに浸漬したものと同様の色調を示したが、NaClO、BLOOD、JGに浸漬したdiskには色調変化が生じた。Diskの割断面を観察した結果、NaClOおよびJGに浸漬したdiskでは内部まで色調変化が生じたのに対し、BLOODに浸漬したものでは、内部に色調変化は生じなかった。DW、EDTA、H2O2、BOND、COL1に浸漬したdiskにおいても、内部に色調変化は認められなかった。WMTA disk 同様、NaClO、BLOOD、JGに浸漬した酸化ビスマスにおいても色調変化が生じたが、WMTA diskの色調変化パターンとは異なっていた。
結論：次亜塩素酸ナトリウム溶液、血液、ヨウ素溶液は、硬化後のWMTAならびに酸化ビスマスの色調変化を誘導するが、それらの色調や浸透深さは異なることが明らかとなった。, ［国内会議］

R-spondin2が未分化なヒト歯根膜細胞の線維芽細胞様分化に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
園田 麻衣, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, 御手洗 裕美, 友清 淳, 濱野 さゆり, 前田 英史
２０１６年日本歯科保存学会秋季学術大会, 2016年10月27日, 日本語
2016年10月27日 - 2016年10月28日, 松本市キッセイ文化ホール, 日本国, ［国内会議］

ヒト歯髄細胞の老化と象牙芽細胞様分化におよぼすTNF-αの影響について　　　　　　　　　　　　　　　
野津 葵, 友清 淳, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 吉田 晋一郎, 芹田 俊, 御手洗 裕美, 和田 尚久, 前田 英史
第37回 日本歯内療法学会学術大会, 2016年07月24日, 日本語
2016年07月23日 - 2016年07月24日, ウインク愛知, 日本国, ［国内会議］

Identification of a Novel Periodontal Ligament Stem Cell Marker　　　　　　　　　　　　　　　
Daigaku Hasegawa, Naohisa Wada, Sayuri Hamano, Atsushi Tomokiyo, Shinichiro Yoshida, Hiromi Mitarai, Mai Sonoda, Hideki Sugii, Hidefumi Maeda
94th General Session & Exhibition of the IADR, 2016年06月25日, 英語
2016年06月22日 - 2016年06月25日, Soul, 大韓民国, ［国際会議］

Directing Human iPS Cells Toward PDL Stem Cells　　　　　　　　　　　　　　　
Sayuri Hamano, Atsushi Tomokiyo, Naohisa Wada, Daigaku Hasegawa, Hideki Sugii, Shinichiro Yoshida, Suguru Serita, Hiroyuki Mizumachi, Hiromi Mitarai, Hidefumi Maeda
94th General Session & Exhibition of the IADR, 2016年06月25日, 英語
2016年06月22日 - 2016年06月25日, Soul, 大韓民国, ［国際会議］

Semaphorin 3A Induces Odontoblastic Phenotype in Dental Pulp Stem Cells　　　　　　　　　　　　　　　
Shinichiro Yoshida, Naohisa Wada, Daigaku Hasegawa, Atsushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Hiromi Mitarai, Hideki Sugii, Hidefumi Maeda
94th General Session & Exhibition of the IADR,, 2016年06月23日, 英語
2016年06月22日 - 2016年06月25日, Soul, 大韓民国, ［国際会議］

MESTはヒト歯根膜幹細胞における幹細胞特性の維持に関与する　　　　　　　　　　　　　　　
長谷川 大学, 和田 尚久, 濱野 さゆり, 友清 淳, 吉田 晋一郎, 御手洗 裕美, 園田 麻衣, 杉井 英樹, 前田 英史
平成28年度日本歯科保存学会春季学術大会（第144回）, 2016年06月09日, 日本語
2016年06月09日 - 2016年06月10日, 栃木県総合文化センター, 日本国, ［国内会議］

iPS細胞由来の歯根膜幹細胞様細胞の樹立　　　　　　　　　　　　　　　
濱野 さゆり, 友清 淳, 和田 尚久, 長谷川 大学, 杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 芹田 俊, 水町 博之, 御手洗 裕美, 前田 英史
平成28年度日本歯科保存学会春季学術大会（第144回）, 2016年06月09日, 日本語
2016年06月09日 - 2016年06月10日, 栃木県総合文化センター, 日本国, ［国内会議］

歯髄細胞におけるβig-h3の発現および機能について　　　　　　　　　　　　　　　
芹田 俊, 友清 淳, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 水町 博之, 御手洗 裕美, 和田 尚久, 前田 英史
平成28年度日本歯科保存学会春季学術大会（第144回）, 2016年06月09日, 日本語
2016年06月09日 - 2016年06月10日, 栃木県総合文化センター, 日本国, ［国内会議］

Generation of neural crest-like cells from human periodontal ligament cell-d erived induced pluripotent stem cells　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳, 和田 尚久, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 前田 英史
63th Japanese Association for Dental Research, 2015年10月30日, 英語
2015年10月30日 - 2015年10月31日, 福岡国際会議場, 日本国, Objectives: Neural crest cells (NCC) are a transient multipotent stem cell p opulation that migrates into its destination in the vertebrate embryo and gi ves rise to many different types of cells., ［国際会議］

〔主要な業績〕Generation of neural crest-like cells from human periodontal ligament cell-derived induced pluripotent stem cells　　　　　　　　　　　　　　　
A. TOMOKIYO, N. WADA, S. HAMANO, D. HASEGAWA, H. SUGII, S. YOSHIDA and H. MAEDA
第６３回国際歯科研究学会日本部会総会, 2015年10月, 日本語
2015年10月30日 - 2015年10月31日, 福岡国際会議場, 日本国, ［国際会議］

〔主要な業績〕歯根膜および皮膚由来ヒト人工多能性幹細胞(iPSC)を用いた神経堤細胞様細胞の樹立とその表現型の比較　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳, 前田 英史, 和田 尚久, 濱野 さゆり, 長谷川 大学
第１４２回日本歯科保存学会春季大会, 2015年06月25日, 日本語
2015年06月25日 - 2015年06月26日, 北九州国際会議場および 西日本総合展示場, 日本国, 神経堤細胞は胎生期に神経管周囲に形成される神経堤より遊走し、様々な細胞へと分化することで多様な組織を形成する。このような特徴から神経堤細胞は、組織再生医療の鍵を握る細胞であると推察されるが、その希少さ故に再生研究へ応用することは困難であった。2006年に樹立された人工多能性幹細胞(iPSC)は高い自己増殖能と多能性を示すことから、神経堤細胞の有効な細胞源となりうる可能性を有しており、これらを用いることにより再生医療の適応が大きく広がることが予想される。さらに近年、分化した組織細胞からiPSCを作製する際、, ［国内会議］

Effect of β2 Adrenergic Receptor on Human Periodontal Ligament Cells　　　　　　　　　　　　　　　
Sayuri Hamano, Hidefumi Maeda, Daigaku Hasegawa, Monnouchi Satoshi, Naohisa Wada, Atsushi Tomokiyo, Asuka Yuda, Hideki Sugii, Shinichiro Yoshida, Akifumi Akamine
93st General Session & Exhibition of the IADR, 2015年03月12日, 英語
Boston, USA, アメリカ合衆国, ［国際会議］

The effects of Wnt5a on human periodontal ligament cells　　　　　　　　　　　　　　　
Daigaku Hasegawa, Naohisa Wada, Hidefumi Maeda, Shinichiro Yoshida, Asuka Yuda, Hiromi Mitarai, Atsushi Tomokiyo, Monnouchi Satoshi, Sayuri Hamano, Hideki Sugii, Akifumi Akamine
93st General Session & Exhibition of the IADR, 2015年03月12日, 英語
Boston, USA, アメリカ合衆国, ［国際会議］

Collaborative activity of CTGF/CCN2 and TGF-β1 on osteogenesis and fibrogenesis　　　　　　　　　　　　　　　
Asuka Yuda, Hidefumi Maeda, Fujii Shinsuke, Monnouchi Satoshi, Naohisa Wada, Atsushi Tomokiyo, Sayuri Hamano, Daigaku Hasegawa, Hideki Sugii, Shinichiro Yoshida, Akifumi Akamine
93st General Session & Exhibition of the IADR, 2015年03月12日, 英語
Boston, USA, アメリカ合衆国, ［国際会議］

骨芽細胞様分化におけるActivin Aの作用は前骨芽細胞と歯根膜細胞とで相反する　　　　　　　　　　　　　　　
杉井 英樹, 前田 英史, 友清 淳, 和田 尚久, 門野内 聡, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 祐田 明香, 吉田 晋一郎, 赤峰 昭文
第141回日本歯科保存学会秋季学術大会, 2014年10月30日, 日本語
山形県山形市, 日本国, ［国内会議］

Generation of neural crest-like cells from human induced pluripotent stem cells.　　　　　　　　　　　　　　　
Atsushi Tomokiyo
Colgate Australian Clinical Dental Research Centre and University of Adelaide School of Dentistry Research Day, 2014年07月11日, 英語
Adelaide convention centre, Adelaide, SA, Australia, オーストラリア連邦, ［国際会議］

β2アドレナリン受容体の作動薬および非作動薬がヒト歯根膜細胞に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
濱野 さゆり, 前田 英史, 長谷川 大学, 和田 尚久, 友清 淳, 門野内 聡, 祐田 明香, 杉井 英樹, 赤峰 昭文
第140回日本歯科保存学会秋季学術大会, 2014年06月19日, 日本語
滋賀県大津市, 日本国, ［国内会議］

Wnt5aがヒト歯根膜細胞に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
長谷川 大学, 和田 尚久, 前田 英史, 友清 淳, 門野内 聡, 郡 勝明, 吉田 晋一郎, 寺松 陽子, 濱野 さゆり, 祐田 明香, 杉井 英樹, 赤峰 昭文
第139回日本歯科保存学会秋季学術大会, 2013年11月08日, 日本語
秋田県秋田市, 日本国, ［国内会議］

CTGF/CCN2が未分化なヒト歯根膜細胞株の骨芽細胞様分化に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
祐田 明香, 前田 英史, 藤井 慎介, 門野内 聡, 山本 直秀, 和田 尚久, 友清 淳, 郡 勝明, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 赤峰 昭文
第5回日本CCNファミリー研究会, 2013年09月12日, 日本語
おかやま, 日本国, ［国内会議］

Activin Aがヒト歯根膜細胞に及ぼす影響について　　　　　　　　　　　　　　　
杉井 英樹, 前田 英史, 友清 淳, 和田 尚久, 門野内 聡, 長谷川 大学, 濱野 さゆり, 祐田 明香, 吉田 晋一郎, 赤峰 昭文
第138回日本歯科保存学会秋季学術大会, 2013年06月23日, 日本語
福岡県福岡市, 日本国, ［国内会議］

Conversion of periodontal ligament cells into multipotent stem-like cells.　　　　　　　　　　　　　　　
Naohisa Wada, Hidefumi Maeda, Daigaku Hasegawa, Fujii Shinsuke, Hiroko Wada, Atsushi Tomokiyo, Monnouchi Satoshi, Akifumi Akamine
91st General Session & Exhibition of the IADR, 2013年03月23日, 英語
Seattle, USA, アメリカ合衆国, ［国際会議］

Roles of Glial Cell-Derived Neurotrophic Factor in Periodontal Ligament Cells.　　　　　　　　　　　　　　　
Naohide Yamamoto, Hidefumi Maeda, Atsushi Tomokiyo, Naohisa Wada, Monnouchi Satoshi, Katsuaki Koori, Akifumi Akamine
91st General Session & Exhibition of the IADR, 2013年03月23日, 英語
Seattle, USA, アメリカ合衆国, ［国際会議］

CaCl2-added Resin Exerts Bioactive Effects on Periodontal Ligament Cells　　　　　　　　　　　　　　　
Hidefumi Maeda, Atsushi Tomokiyo, Katsuaki Koori, Naohide Yamamoto, Naohisa Wada, Monnouchi Satoshi, Sayuri Hamano, Asuka Yuda, Akifumi Akamine
91st General Session & Exhibition of the IADR, 2013年03月23日, 英語
Seattle, USA, アメリカ合衆国, ［国際会議］

Induction of stem/undifferentiated cells from human periodontal ligament cells by Sema3A.　　　　　　　　　　　　　　　
Naohisa Wada, Hidefumi Maeda, Daigaku Hasegawa, Fujii Shinsuke, Hiroko Wada, Atsushi Tomokiyo, Monnouchi Satoshi, Akifumi Akamine
The Australian Health and Medical Research Congress, 2012年11月25日, 英語
Adelaide Convention Centre, Adelaide, Australia, オーストラリア連邦, ［国際会議］

β２アドレナリン受容体の非作動薬であるPropranololがヒト歯根膜細胞の骨芽細胞分化に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
濱野 さゆり, 前田 英史, 友清 淳, 山本 直秀, 門野内 聡, 和田 尚久, 河野 清美, 郡 勝明, 寺松 陽子, 長谷川 大学, 祐田 明香, 赤峰 昭文
第137回日本歯科保存学会秋季学術大会, 2012年11月14日, 日本語
広島県広島市, 日本国, ［国内会議］

CTGFが未分化なヒト歯根膜細胞株の骨芽細胞様分化に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
祐田 明香, 前田 英史, 藤井 慎介, 門野内 聡, 山本 直秀, 和田 尚久, 友清 淳, 郡 勝明, 河野 清美, 寺松 陽子, 濱野 さゆり, 長谷川 大学, 赤峰 昭文
第137回日本歯科保存学会秋季学術大会, 2012年11月14日, 日本語
広島県広島市, 日本国, ［国内会議］

分化能の異なるヒト歯根膜細胞クローンの単離及びキャラクタライゼーション　　　　　　　　　　　　　　　
長谷川 大学, 和田 尚久, 前田 英史, 藤井 慎介, 郡 勝明, 友清 淳, 門野内 聡, 河野 清美, 山本 直秀, 寺松 陽子, 濱野 さゆり, 祐田 明香, 赤峰 昭文
第137回日本歯科保存学会秋季学術大会, 2012年11月14日, 日本語
広島県広島市, 日本国, ［国内会議］

Sema3Aがヒト歯根膜細胞の幹細胞/未分化細胞誘導に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
和田 尚久, 前田 英史, 長谷川 大学, 藤井 慎介, 山本 直秀, 友清 淳, 門野内 聡, 赤峰 昭文
第136回日本歯科保存学会春季学術大会, 2012年06月13日, 日本語
沖縄県宜野湾市, 日本国, ［国内会議］

ダイオキシン関連物質がヒト歯根膜細胞の骨芽細胞分化に及ぼす影　　　　　　　　　　　　　　　
門野内 聡, 前田 英史, 友清 淳, 和田 尚久, 河野 清美, 郡 勝明, 山本 直秀, 寺松 陽子, 赤峰 昭文
第136回日本歯科保存学会春季学術大会, 2012年06月13日, 日本語
沖縄県宜野湾市, 日本国, ［国内会議］

ベンゾピレンがヒト歯根膜細胞の骨芽細胞分化に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
門野内 聡, 前田 英史, 友清 淳, 和田 尚久, 河野 清美, 郡 勝明, 山本 直秀, 寺松 陽子, 赤峰 昭文
平成24年度厚生労働省全国油症治療研究班会議, 2012年05月25日, 日本語
福岡県福岡市, 日本国, ［国内会議］

EGFがヒト歯根膜細胞に及ぼす影響について.　　　　　　　　　　　　　　　
寺松 陽子, 前田 英史, 友清 淳, 門野内 聡, 山本 直秀, 和田 尚久, 藤井 慎介, 河野 清美, 郡 勝明, 赤峰 昭文
第135回日本歯科保存学会秋季学術大会, 2011年11月21日, 日本語
大阪府大阪市, 日本国, ［国内会議］

Angiotensin II is involved in the loading signal in stretched human PDL cells.　　　　　　　　　　　　　　　
Monnouchi S, Maeda H, Fujii S, Tomokiyo A, Hori K, Akamine A.
3rd Hiroshima Conference on Education and Science in Dentistry., 2009年11月08日
2011年11月08日 - 2011年11月09日, 日本国, ［国際会議］

Passive Ultrasonic Irrigation法による根管洗浄の効果 －SEM観察－　　　　　　　　　　　　　　　
木原 智子, 前田 英史, 郡 勝明, 寺松 陽子, 和田 尚久, 藤井 慎介, 友清 淳, 門野内 聡, 河野 清美, 山本 直秀, 後藤 康治, 赤峰 昭文
第134回日本歯科保存学会春季学術大会, 2011年06月25日, 日本語
千葉県浦安市, 日本国, ［国内会議］

ヒト歯根膜細胞への伸展刺激はInterleukin-11の発現を促進する　　　　　　　　　　　　　　　
門野内 聡, 前田 英史, 山本 直秀, 藤井 慎介, 友清 淳, 和田 尚久, 河野 清美, 郡 勝明, 寺松 陽子, 木原 智子, 赤峰 昭文
第134回日本歯科保存学会春季学術大会, 2011年06月24日, 日本語
埼玉県浦安市, 日本国, ［国内会議］

Stretched periodontal ligament cells up-regulate Interleukin-11 to regulate osteoblastic metabolism.　　　　　　　　　　　　　　　
Monnouchi Satoshi, Hidefumi Maeda, Atsushi Tomokiyo, Naohide Yamamoto, Yoko Teramatsu, Naohisa Wada, Kiyomi Kono, Katsuaki Koori, Akifumi Akamine
The 59th Annual Meeting of Japanese Association for Dental Research(JADR), 2011年06月13日, 英語
Hiroshima, 日本国, ［国際会議］

Contribution of mechanical load to the regeneration of human periodontal ligament tissues.　　　　　　　　　　　　　　　
Hidefumi Maeda, Satoshi Monnouchi, Shinsuke Fujii, Atsushi Tomokiyo, Naohisa Wada, Akifumi Akamine.
International Biomedical and Technology & Healthcare Management Summit., 2010年11月26日
2010年11月26日 - 2010年11月27日, 中華人民共和国, ［招待講演］, ［国際会議］

bFGFが未分化なヒト歯根膜細胞株の線維芽細胞様分化に及ぼす影響について.　　　　　　　　　　　　　　　
河野清美, 前田英史, 和田尚久, 藤井慎介, 友清淳, 門野内聡, 山本直秀, 郡勝明, 寺松陽子, 木原智子, 赤峰昭文.
第133回日本歯科保存学会秋季学術大会., 2010年10月28日
2010年10月28日 - 2010年10月29日, 岐阜, 日本国, ［国内会議］

ヒト歯根膜および歯髄細胞の免疫抑制特性に関する研究.　　　　　　　　　　　　　　　
和田尚久, 前田英史, 藤井慎介, 友清淳, 赤峰昭文.
第133回日本歯科保存学会秋季学術大会., 2010年10月28日
2010年10月28日 - 2010年10月29日, 岐阜, 日本国, ［国内会議］

GDNFがヒト歯根膜細胞の走化性に及ぼす影響について.　　　　　　　　　　　　　　　
山本直秀, 前田英史, 友清淳, 藤井慎介, 和田尚久, 門野内聡, 河野清美, 郡勝明, 寺松陽子, 木原智子, 赤峰昭文.
第133回日本歯科保存学会秋季学術大会., 2010年10月28日
2010年10月28日 - 2010年10月29日, 岐阜, 日本国, ［国内会議］

未分化なヒト歯根膜細胞株の分化に及ぶすカルシウムの影響について.　　　　　　　　　　　　　　　
郡勝明, 前田英史, 藤井慎介, 友清淳, 門野内聡, 和田尚久, 河野清美, 山本直秀, 寺松陽子, 木原智子, 赤峰昭文.
第133回日本歯科保存学会秋季学術大会., 2010年10月28日
2010年10月28日 - 2010年10月29日, 岐阜, 日本国, ［国内会議］

スーパーボンドシーラーの特性について -ヒト歯根膜細胞の増殖と分化に与える影響-.　　　　　　　　　　　　　　　
前田英史, 友清淳, 郡勝明, 藤井慎介, 門野内聡, 安田善之, 山本直秀, 堀清美, 和田尚久, 斎藤隆史, 赤峰昭文.
第31回日本歯内療法学会学術大会., 2010年07月24日
2010年07月24日 - 2010年07月25日, 東京, 日本国, ［国内会議］

The roles of angiotensin II in stretched periodontal ligament cells.　　　　　　　　　　　　　　　
Monnouchi S, Maeda H, Fujii S, Tomokiyo A, Hori K, Akamine A.
88th General Session & Exhibition of the IADR., 2010年07月14日
2010年07月14日 - 2010年07月18日, スペイン, ［国際会議］

The roles of angiotensin II in stretched periodontal ligament cells.　　　　　　　　　　　　　　　
Monnouchi S, Maeda H, Fujii S, Tomokiyo A, Hori K, Akamine A.
88th General Session & Exhibition of the IADR., 2010年07月14日
2010年07月14日 - 2010年07月17日, スペイン, ［国際会議］

Angiotensin II mediates the loading signal in human periodontal ligament cells.　　　　　　　　　　　　　　　
Monnouchi S, Maeda H, Fujii S, Tomokiyo A, Hori K, Akamine A.
The 5th International Symposium on Dental and Craniofacial Morphogenesis and Tissue Regeneration: A View from Stem Cell Researches., 2010年02月05日
2010年02月05日 - 2010年02月06日, Fukuoka, 日本国, ［国際会議］

What are the characteristics of PDL stem cells?　　　　　　　　　　　　　　　
Hidefumi Maeda, Shinsuke Fujii, Atsushi Tomokiyo, Naohisa Wada, Satoshi Monnouchi, Kiyomi Hori, Katsuaki Koori, Naohide Yamamoto, Akifumi Akamine.
The5th International Symposium on Dental and Craniofacial Morphogenesis and Tissue Regeneration: A View from Stem Cell Researches., 2010年02月05日
2010年02月05日 - 2010年02月05日, Fukuoka, 日本国, ［招待講演］, ［国際会議］

Angiotensin II is involved in the loading signal in stretched human PDL cells.　　　　　　　　　　　　　　　
Monnouchi S, Maeda H, Fujii S, Tomokiyo A, Hori K, Akamine A.
3rd Hiroshima Conference on Education and Science in Dentistry., 2009年11月08日
2009年11月08日 - 2009年11月09日, 広島, 日本国, ［国際会議］

Angiotensin II is involved in the loading signal in stretched human PDL cells.　　　　　　　　　　　　　　　
S.MONNNOCHI, H.MAEDA, S.FUJII, A.TOMOKIYO, K.HORI, and A.AKAMINE
3rd Hiroshima Conference on Education and Science in Dentistry, 2009年11月08日
2009年11月08日 - 2009年11月08日, 日本国, ［国際会議］

〔主要な業績〕AhRシグナルがヒト歯根膜細胞のコラーゲン代謝に及ぼす影響.　　　　　　　　　　　　　　　
友清淳, 前田英史, 藤井慎介, 和田尚久, 門野内聡, 堀清美, 郡勝明, 山本直秀, 赤峰昭文.
第131回日本歯科保存学会秋季学術大会, 2009年10月29日
2009年10月29日 - 2009年10月30日, 宮城, 日本国, ［国内会議］

〔主要な業績〕AhRシグナルがヒト歯根膜細胞のコラーゲン代謝に及ぼす影響.　　　　　　　　　　　　　　　
友清淳, 前田英史, 藤井慎介, 和田尚久, 門野内聡, 堀清美, 郡勝明, 山本直秀, 赤峰昭文
第131回日本歯科保存学会秋季学術大会, 2009年10月29日
2009年10月27日 - 2009年10月29日, 仙台国際センター, 日本国, ［国内会議］

AhRシグナルがヒト歯根膜細胞のコラーゲン代謝に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
友清淳, 前田英史, 藤井慎介, 和田尚久, 門野内聡, 堀清美, 内博史, 古江増隆, 赤峰昭文
全国油症班会議, 2009年06月18日
2009年06月18日 - 2009年06月19日, ホテルレガロ福岡, 日本国, ［国内会議］

伸展力が負荷されたヒト歯根膜細胞のシグナル伝達にはAngiotensin IIが関与している.　　　　　　　　　　　　　　　
門野内聡, 前田英史, 藤井慎介, 友清淳, 堀清美, 赤峰昭文
第130回日本歯科保存学会春季学術大会, 2009年06月11日
2009年06月11日 - 2009年06月12日, 北海道, 日本国, ［国内会議］

TGF-beta1がヒト歯根膜細胞および前駆細胞の増殖および分化に及ぼす影響.　　　　　　　　　　　　　　　
藤井慎介, 前田英史, 友清淳, 橋口勇, 門野内聡, 堀清美, 和田尚久, 赤峰昭文.
第130回日本歯科保存学会春季学術大会, 2009年06月11日
2009年06月11日 - 2009年06月12日, 北海道, 日本国, ［国内会議］

MTA stimulates BMP2 expression in human PDL cells.　　　　　　　　　　　　　　　
Maeda H, Tomokiyo A, Fujii S, Monnouchi S, Wada N, Hori K, Akamine A.
87th General Session & Exhibition of the IADR/AADR/CADR., 2009年04月01日
2009年04月01日 - 2009年04月05日, アメリカ合衆国, ［国際会議］

Expression and effects of TGF-beta1 in periodontal ligament tissue.　　　　　　　　　　　　　　　
Fujii S, Maeda H, Wada N, Tomokiyo A, Monnouchi S, Hori K, Akamine A
87th General Session & Exhibition of the IADR/AADR/CADR., 2009年04月01日
2009年04月01日 - 2009年04月05日, アメリカ合衆国, ［国際会議］

〔主要な業績〕自己複製能と多能性を有する歯髄幹細胞の分取、培養法の開発　　　　　　　　　　　　　　　
友清淳, 中島美砂子, 庵原耕一郎, 石河真幸, 赤峰昭文
第121回秋季日本歯科保存学会総会, 2004年11月18日
2008年11月18日 - 2008年11月19日, 長崎県長崎市長崎ブリックホール, 日本国, ［国内会議］

〔主要な業績〕A multipotent hPDL cell line promotes neurocytic differentiation and migration　　　　　　　　　　　　　　　
A.TOMOKIYO, H. MAEDA, S. FUJII, N. WADA, S. MON-NOUCHI and A. AKAMINE
86th General Session & Exhibition of the IADR, 2008年07月03日
2008年06月30日 - 2008年07月06日, Metro Toronto Convention Centre, Toronto, カナダ, ［国際会議］

〔主要な業績〕多分化能を有するヒト歯根膜クローン細胞株が神経細胞分化及び細胞遊走に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
友清 淳, 前田 英史, 藤井 慎介, 和田 尚久, 門野内 聡, 赤峰 昭文
第128回春季日本歯科保存学会総会, 2008年06月05日
2008年06月05日 - 2008年06月06日, 新潟市朱鷺メッセ, 日本国, ［国内会議］

クエン酸または超音波洗浄を用いた根管洗浄後の根管象牙質のSEM観察　　　　　　　　　　　　　　　
島一也, 前田英史, 後藤康治, 畦森雅子, 和田尚久, 藤井慎介, 友清淳, 赤峰昭文
第28回日本歯内療法学会学術大会, 2007年05月26日
2007年05月26日 - 2007年05月27日, 広島国際会議場, 日本国, ［国内会議］

Investigating a clonal human periodontal ligament progenitor/stem cell line in vitro and in vivo　　　　　　　　　　　　　　　
S.Fujii, H.Maeda, N.Wada, A.Tomokiyo, and A.Akamine:
第2回「口腔顎顔面領域の発生と再生」国際シンポジウム, 2007年03月15日
2007年03月15日 - 2007年03月15日, 九州大学百年記念講堂, 日本国, ［国内会議］

〔主要な業績〕Development of a multipotent clonal human periodontal ligament cell line　　　　　　　　　　　　　　　
A.Tomokiyo, H.Maeda, S.Fujii, N.Wada, K.Shima, and A.Akamine
第2回「口腔顎顔面領域の発生と再生」国際シンポジウム, 2007年03月15日
2007年03月15日 - 2007年03月15日, 九州大学百年記念講堂, 日本国, ［国内会議］

〔主要な業績〕多分化能を持つヒト歯根膜クローン細胞株の樹立とキャラクタリゼーション　　　　　　　　　　　　　　　
友清淳, 前田英史, 藤井慎介, 和田尚久, 島一也, 赤峰昭文
第125回秋季日本歯科保存学会総会, 2006年11月09日
2006年11月09日 - 2006年11月10日, 鹿児島市民文化ホール, 日本国, ［国内会議］

スメアクリーン洗浄後の根管象牙質のSEM観察像－超音波洗浄との比較－　　　　　　　　　　　　　　　
島一也, 前田英史, 後藤康治, 畦森雅子, 和田尚久, 藤井慎介, 友清淳, 赤峰昭文
第125回秋季日本歯科保存学会総会, 2006年11月09日
2006年11月09日 - 2006年11月10日, 鹿児島市民文化ホール, 日本国, ［国内会議］

MTA及びSuper-Bondのヒト歯根膜細胞の骨芽細胞分化に及ぼす影響に関する研究　　　　　　　　　　　　　　　
野田亮, 前田英史, 藤井慎介, 和田尚久, 友清淳, 吉嶺嘉人, 赤峰昭文
第27回日本歯内療法学会学術大会, 2006年07月29日
2006年07月29日 - 2006年07月30日, 徳島大学蔵本キャンパス, 日本国, ［国内会議］

〔主要な業績〕ヒト不死化歯根膜クローン細胞におけるEMDおよびbFGFが石灰化誘導に及ぼす影響　　　　　　　　　　　　　　　
友清淳, 前田英史, 藤井慎介, 和田尚久, 野田亮, 島一也, 赤峰昭文
第123回秋季日本歯科保存学会総会, 2005年11月24日
2005年11月23日 - 2005年11月25日, 東京国際フォーラム, 日本国, ［国内会議］

Charactaterization of clonal human periodontal ligament cell lines　　　　　　　　　　　　　　　
S.Fujii, H.Maeda, N.Wada, A.Tomokiyo, and A.Akamine
84th General Session & Exhibition of the IADR, 2005年06月30日
2005年06月29日 - 2005年07月01日, Brisbane Convention & Exhibition Centre, Brisbane, オーストラリア連邦, ［国際会議］

〔主要な業績〕Effects of bFGF and EMD on human periodontal ligament cells　　　　　　　　　　　　　　　
A.Tomokiyo, H.Maeda, S.Fujii, N.Wada, and A.Akamine
84th General Session & Exhibition of the IADR, 2005年06月30日
2005年06月28日 - 2005年07月01日, Brisbane Convention & Exhibition Centre, Brisbane, オーストラリア連邦, ［国際会議］

Induction of Regenerative Dentin Formation in Pulp Progenitor/stem Cells by Gdf11/Bmp11 Transduction　　　　　　　　　　　　　　　
M.Nakashima, K.Iohara, A.Tomokiyo, M. Ishikawa, and A.Akamine
44th American Society of Cell Biology, 2004年12月05日
2004年12月04日 - 2004年12月08日, Washington DC, アメリカ合衆国, ［招待講演］, ［国際会議］

歯髄幹細胞を用いたgene therapy法による象牙質再生　　　　　　　　　　　　　　　
庵原耕一郎, 中島美砂子, 石河真幸, 友清淳, 中島昭彦, 赤峰昭文
第121回秋季日本歯科保存学会総会, 2004年11月18日
2004年11月18日 - 2004年11月19日, 長崎県長崎市長崎ブリックホール, 日本国, ［国内会議］

ダブルネットワークハイドロゲルを基盤とする自己修復型コンポジットレジンの創成
科学研究費助成事業
2024年04月01日 - 2027年03月31日
YAMAUTI MONICA, 友清 淳, 戸井田 侑, 網塚 憲生, 星加 修平, 川本 千春
日本学術振興会, 基盤研究(C), 北海道大学, 24K12924

酸化ストレスを標的とした象牙質/歯髄複合体の加齢変化の機序の解明
科学研究費助成事業
2022年04月01日 - 2026年03月31日
前田 英史, 友清 淳, 濱野 さゆり, 小幡 純子, 杉井 英樹, 糸山 知宏
日本学術振興会, 基盤研究(B), 九州大学, 22H03270

歯周組織発生過程の模倣を基盤とするハイブリッド構造体の創成と歯周組織再生への応用
科学研究費助成事業
2022年 - 2025年
友清 淳, 前田 英史, 和田 尚久, 小幡 純子, 杉井 英樹, 糸山 知宏, 藤野 翔香
日本学術振興会, 基盤研究(B), 九州大学, 研究代表者, 競争的資金, 22H03271

根面う蝕を標的としたファージ療法の創出
科学研究費助成事業
2021年04月01日 - 2024年03月31日
小幡 純子, 前田 英史, 友清 淳, 濱野 さゆり, 杉井 英樹
高齢者が抱える根面う蝕に対する治療法としてフッ化物の応用が推奨されている。しかしながら、う蝕原性細菌に対しては酸産生の抑制を期待するという間接的なものでしかなく、積極的な効果が望めないのが現状である。そこで、近年臨床応用されているバクテリオファージを利用した「ファージ療法」に着目し、細菌を宿主として増殖するウイルスであるこのバクテリオファージを根面う蝕に対しても用いることができないかと考えた。本研究は、根面う蝕細菌に対して特異的に作用するバクテリオファージを探索・同定し、このバクテリオファージに標的細菌を死滅させることにより根面う蝕の進行を停止させるという新たな治療法を確立することを目的とする。この非侵襲的かつ積極的な根面う蝕治療法の確立は、我が国が長年抱えてきた高齢者の根面う蝕という課題に対する革新的な解決策となると考えている。
2021年度は、RIKEN BRCよりターゲットとする根面う蝕細菌株を購入し、それぞれの菌の培養、特性の解明を行った。また、、それぞれの根面う蝕細菌のバクテリオファージを同定することが必要であるが、まずはバクテリオファージの扱いを習得する為に、既存の細菌種及びバクテリオファージを用いてその手技を学内のバクテリオファージの専門家のもと習得を目指した。今後の根面う蝕細菌のバクテリオファージ探索における必要事項を理解することができ、ファージ探索の様々な角度からのアプローチを再検討した。
日本学術振興会, 基盤研究(C), 九州大学, 21K09918

オミックス解析を用いた歯根膜発生機構の解明と幹細胞誘導型組織再生技術への応用
科学研究費助成事業 基盤研究(B)
2019年04月01日 - 2023年03月31日
和田 尚久, 前田 英史, 友清 淳, 祐田 明香, 藤井 慎介, 御手洗 裕美, 和田 裕子
歯胚発生期に着目してオミックス解析により歯根膜発生・形成に重要な特異的因子を同定、機能解析することで歯根膜発生機構の一端を解明し、さらに歯根膜発生・形成に重要な同定因子を幹細胞分化制御候補因子として歯根膜細胞への分化誘導能について検討することを目的として研究を進めた。
マウス胎生18日齢の臼歯歯胚より、歯胚上皮組織、歯乳頭組織、歯小嚢組織を分離し、各組織のmRNAを回収した。各組織に特異的な遺伝子（keratinやvimentin等）の発現の検討により組織のisolationの確度が高いことを確認したのち、微量RNA-seqにて発現遺伝子の網羅的解析を行った。その結果、各組織に高発現している遺伝子群が検出された。その中から歯小嚢組織に高発現していた複数の因子を抽出し、定量的RT-PCRにて検討したところいくつかの因子は歯乳頭と比較して有意に高発現しており、また免疫組織化学染色にて歯小嚢組織に特異的に発現していた。因子A（仮称）の機能を検討する実験を進めているが、ヒト歯根膜細胞の分化および増殖、走化性に影響を及ぼしている結果が得られている。並行して歯胚上皮組織に高発現している遺伝子群についてもその局在および機能の検討を進めている。
また、歯根膜に特異的に発現しているActa2の機能解析を進めており、Acta2がTGF-beta刺激によりsmad2/3を介して、コラーゲン線維形成に関与していることが分かった。
日本学術振興会, 基盤研究(B), 九州大学, 19H03832

食品を介したダイオキシン類等の人体への影響の把握とその治療法の開発等に関する研究　　　　　　　　　　　　　　　
厚生労働科学研究費補助金
2021年 - 2023年
厚生労働省, 厚生労働科学研究費補助金 (厚生労働省), 研究分担者, 競争的資金, 21KA2003

神経堤細胞賦活化低分子化合物を核とする次世代型歯周組織再生薬の創出
科学研究費助成事業
2021年 - 2023年
友清 淳, 前田 英史, 和田 尚久, 杉井 英樹, 吉田 晋一郎, 小幡 純子, 糸山 知宏, 小野 太雅
幹細胞は組織の再生に重要な役割を示すことが知られているが、その数は極めて少量である。申請者らは、歯根膜組織に存在する神経堤細胞(NC)を賦活化し歯根膜幹細胞(PDLSC)へと分化させ、歯根膜組織内のPDLSC数を増加させることで、歯周組織の再生を誘導するという、新しい歯周組織再生療法の開発を目指している。
これまでに申請者らは、HXCがNCからPDLSCへの分化を促進する働きを有することを明らかにしてきた。そこで低分子化合物スクリーニングを行い、HXCと同様にNCからPDLSCへの分化を促進する化合物の同定を試みた。スクリーニングの結果から、PDLSCのマーカーであるCOL1, FBN1, OPG, POSTNのうち、４種類の発現を上昇させるものを４化合物、３種類の発現を上昇させるものを３化合物同定した。さらに、PDLSCのマーカーとして、上述の4種類に加え、PLAP1, SCX, TNMD, aSMAの発現に関しても検証を行った。その結果、これらの候補化合物の中には、新たな４遺伝子発現も上昇させるものが含まれていた。現在候補化合物に関して、再現性を確かめると共に、濃度を変化させた場合のNCからPDLSCへの分化誘導効率について検証を行っている。
日本学術振興会, 挑戦的研究（萌芽）, 九州大学, 研究代表者, 競争的資金, 21K19608

iPS細胞を用いた3次元的歯根膜作製法の確立と人工歯根開発への応用
科学研究費助成事業 基盤研究(A)
2017年04月01日 - 2022年03月31日
前田 英史, 友清 淳, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, 濱野 さゆり, 和田 尚久, 杉井 英樹
ヒト皮膚由来iPS細胞を神経堤細胞様細胞へ分化誘導した細胞（iPS-NC細胞）を、ヒト初代歯根膜細胞（HPDLC）が分泌した細胞外基質上で培養した細胞（iPS-NC-PDL細胞）が、歯根膜幹細胞様細胞であることをより明らかにするために、骨芽細胞、脂肪細胞への分化能および間葉系細胞の表面抗原の発現、そして歯根膜細胞関連因子（Collagen 1, Osteoprotegerin, Periostin）の発現について比較検討した。その結果、iPS-NC-PDL細胞が、これらの幹細胞の特性と同時に歯根膜の特性も獲得していることを確認した。またiPS-NC細胞と発現因子が異なる特性を有することに関してもNestinおよびp75NTRの発現によって明確にした。
つぎに、iPS-NC細胞からiPS-NC-PDL細胞への分化誘導に重要なHPDLC由来の細胞外基質について明らかにするために、cDNAマイクロアレイ法およびCAGE法を用いて、対照として皮膚線維芽細胞のそれと比較し、発現基質を解析した。その結果、幾つかの因子が候補因子として選別された。それぞれの遺伝子発現を抑制した結果、iPS-NC-PDL細胞への分化を抑制する因子を検出することができた。現在、それぞれの因子単味による誘導能について解析を進めている。
歯根膜様チューブ形成については、予備実験として当分野で保有している不死化歯根膜幹細胞様細胞株を用いてスフェロイド形成を行い、3Dバイオプリンターを用いて作製した。チューブ内部にハイドロキシアパタイトの軸を挿入し培養した結果、界面で歯根膜細胞関連因子の1つであるPeriostinの発現が促進することが明らかになった。今後、セメント質関連因子の発現について検討を加え、iPS-NC-PDL細胞からチューブ形成を進めて行く。
日本学術振興会, 基盤研究(A), 九州大学, 17H01598

iPS創薬とゲノム創薬の融合による歯根膜幹細胞賦活化物質の創出と再生医療への応用
科学研究費助成事業 挑戦的研究(萌芽)
2018年06月29日 - 2021年03月31日
友清 淳, 前田 英史, 長谷川 大学, 吉田 晋一郎, 濱野 さゆり, 和田 尚久, 杉井 英樹
歯根膜組織(PDL)に存在する幹細胞（歯根膜幹細胞：PDLSC)は、歯周組織全体の再生に重要な役割を果たすことが知られている。そこで我々は、PDLSCの持つ再生能の賦活化により、効率的および効果的に歯周組織全体を再生させる遺伝子を標的とした、新しい歯周組織再生薬の開発を計画した。
我々はヒト人工多能性幹細胞(iPSC)から、神経堤細胞に極めて近い表現型を示すiPSC-NCLCを樹立し、さらにiPSC-NCLCをPDLSCの表現型を示すiPSC-NCLC-PDLへ分化させる方法の確立に成功している(Hamano S et al. Stem Cells Dev. 2018 Jan 15;27(2):100-111)。我々の研究成果により、神経堤細胞およびPDLSCsの表現型を有する細胞を多数実験に使用することが可能となり、結果として神経堤細胞がPDLSCへと分化する過程における包括的な遺伝子解析が可能となった。
一塩基の変異であるSingle nucleotide polymorphism（SNP)は、アミノ酸置換を誘導し、タンパク質の量、構造、発現時期、および機能等に変化を引き起こすことから、様々な表現型や疾患を司る重要な因子であると考えられている。そこで我々は、SNPによる遺伝子変異の結果、歯根膜幹細胞が機能を果たせなくなることで、歯周組織の再生が阻害されると考え、これまでSNPと歯周病の関連性が報告されている遺伝子群に着目した。
本年度はiPSC-NCLCおよびiPSC-NCLC-PDLを用いてマイクロアレイ解析を行ったのち、変動の大きい遺伝子を同定したのち、それらの中でSNPと歯周病の関連性が報告されているものの選出を行った。
日本学術振興会, 挑戦的研究(萌芽), 九州大学, 18K19651

iPS由来神経堤細胞によるバイオミメティクスに基づいた新規歯周組織再生療法の開発
科学研究費助成事業 基盤研究(B)
2017年04月01日 - 2021年03月31日
友清 淳, 前田 英史, 吉田 晋一郎, 濱野 さゆり, 和田 尚久, 杉井 英樹, 長谷川 大学
歯周組織の再生には、歯根膜幹細胞が重要な役割を果たすことが知られている。近年、ヒトを用いた歯根膜幹細胞移植実験が行われ、移植により歯周ポケット深さ、歯周組織欠損部面積、および新生骨骨密度が有意に改善することが報告された(Shalini HS and Vandana KL. J Indian Soc Periodontol. 22, 503-512, 2018)。しかしながら、生体に存在する歯根膜幹細胞はごく少数であり、移植を行うには多大な多大な時間、設備、および人的資源を必要とする。
我々は、生体における発生過程の模倣(バイオミメティクス技術）を応用した、神経堤細胞移植による歯周組織再生誘導法の開発を目指し実験を行っている。顔面頭蓋の骨、歯および歯周組織の大部分は神経堤細胞に発生を由来するため、神経堤細胞の再生療法への応用は、歯周組織の発生を模倣した歯周組織の再生に有効であると考えられる。我々は既に、人工多能性幹細胞(iPSC)から、極めて神経堤細胞に類似した表現型を示す、神経堤細胞様細胞(iPSC-NCLC)の樹立に成功している。そこで本年度は、iPSC-NCLCをiPS細胞由来歯根膜幹細胞(iPSC-PDL)へと分化誘導する際に、主要な役割を果たすマスター遺伝子の選出、ならびにマスター遺伝子の発現を誘導するリガンド分子の選出を行い、それらのiPSC-NCLCの分化へ及ぼす影響について検討を行った。iPSC-NCLCを生体へ移植する際に、これらの因子を応用することで、iPSC-NCLCによる歯周組織発生を模倣した歯周組織再生を加速化させることができると考えられる。
日本学術振興会, 基盤研究(B), 九州大学, 17H04385

3Dプリンターを用いた歯内治療シミュレーションシステムの創出
科学研究費助成事業 基盤研究(C)
2016年04月01日 - 2019年03月31日
後藤 康治, 前田 英史, 友清 淳
本研究の目的は、熱溶解積層（Fused Deposition Modeling：FDM）方式のパーソナル３Ｄプリンターで造形した３Ｄモデルを用いた歯内治療シミュレーションシステムの創出を行うことである。コーンビームCT（CBCT）画像から変換ソフトで３Ｄデータを作成し、３Ｄプリンターで造形を行った。今回作製した３Ｄモデルは歯内治療のシミュレーションシステムとして使用可能であると考えられた。
日本学術振興会, 基盤研究(C), 九州大学, 16K11555

歯根膜幹細胞誘導による組織再生を基盤とした包括的歯内疾患治療法の開発
科学研究費助成事業 基盤研究(B)
2015年04月01日 - 2019年03月31日
和田 尚久, 前田 英史, 清島 保, 友清 淳, 和田 裕子
本研究により歯原性上皮においてWnt/beta-cateninシグナル依存的なSema3Aの発現を介した増殖の制御が歯胚発生および形成に重要な役割を担っており、加えて歯牙腫の発生にも関与している可能性が示唆された。加えて、歯根膜組織や歯髄組織における複数因子の発現ならびに組織再生に関連する機能や幹細胞分化誘導法について各々明らかにした。
Semaphorin3Aによる歯原性上皮の発生メカニズムや他因子の機能を段階的、多角的に検討できたことで、効率よく歯周組織を再生あるいは形成誘導する包括的な方法確立のためのメカニズムの一端を明らかにできたと考えられた。
日本学術振興会, 基盤研究(B), 九州大学, 15H05023

カルシウム感知受容体制御に着目した象牙質修復治療法の開発
科学研究費助成事業 挑戦的萌芽研究
2014年04月01日 - 2017年03月31日
前田 英史, 赤峰 昭文, 和田 尚久, 門野内 聡, 友清 淳
本研究では、カルシウム感知受容体(CaSR)を介したシグナルが硬組織形成を促す作用があることに着目し、CaSR作動薬を歯髄が露出した部位へ応用し、生体組織との接触部位に壊死層を作らず硬組織形成を促す直接覆髄材を開発することを目的とした。まずヒト歯髄細胞から、多分化能を有し間葉系幹細胞マーカーを発現するヒト歯髄幹細胞株を得た。次にこの細胞をCaSR作動薬であるカルシウムで刺激した結果、象牙芽細胞分化が亢進することを明らかにした。そこでハイドロキシアパタイトを含有したアクリル系レジンを作製し、直接覆髄材としてラットの露髄モデルに応用した結果、露髄面に硬組織形成を促す働きがあることを明らかにした。
日本学術振興会, 挑戦的萌芽研究, 九州大学, 26670825

歯根膜組織形成能を有したバイオアクティブレジンの開発
科学研究費助成事業 基盤研究(B)
2013年04月01日 - 2017年03月31日
前田 英史, 和田 尚久, 友清 淳, 赤峰 昭文, 門野内 聡
歯質接着能を有し修復材表層に歯根膜組織の形成を可能にする生物学的活性を有したバイオアクティブレジンを開発することを目的とした。4-META/ MMA-TBBレジンに塩化カルシウムまたはナノハイドロキシアパタイトを含有したもの(nHAP/SB)を作製し歯根膜細胞と共培養を行った結果、骨関連遺伝子の発現が促進した。また象牙質への接着力を引っ張り試験の結果ではnHAP/SBが未添加群と同等の接着力を示した。ラットの抜歯窩に歯根膜細胞シートを巻いたnHAP/SBを埋入した結果、その周囲に硬組織および線維性組織が形成された。以上よりnHAP/SBはバイアクティブレジンの候補となりうることが示唆された。
日本学術振興会, 基盤研究(B), 九州大学, 25293388

新規覆髄材の開発を目的としたBig-h3の解析　　　　　　　　　　　　　　　
科学研究費助成事業
2014年 - 2016年
日本学術振興会, 基盤研究(C), 研究分担者, 競争的資金, 26462887

歯根膜幹細胞由来神経再生因子を用いた新規の末梢神経ならびに歯根膜組織再生法の開発
科学研究費助成事業 基盤研究(C)
2012年04月01日 - 2013年03月31日
友清 淳
日本学術振興会, 基盤研究(C), 九州大学, 24592873

アンギオテンシン II を用いた成功率の高い意図的歯牙再植術の開発
科学研究費助成事業 挑戦的萌芽研究
2011年 - 2012年
前田 英史, 赤峰 昭文, 和田 尚久, 門野内 聡, 友清 淳
歯の保存治療の1つに意図的再植法があり、難治性の根尖病変の除去や、破折した歯の口腔外接着後の再植時に応用される治療法である。現在のところ、抜歯の際に歯根膜組織へのダメージを最小限にする以外に、再植後の治癒を促進するような薬は開発されていない。そこで本研究では、アンギオテンシノーゲンの代謝産物であるアンギオテンシン II (AngII) が、抜歯再植後の歯根膜組織の治癒に及ぼす影響について検討するために、歯牙再植実験モデルラットを作製し、その歯根膜組織の治癒に及ぼす影響と、AngII をさらに細かく分けたペプチドが歯根膜細胞に及ぼす影響について明らかにすること目的とした。その結果、AngII にて処理されたラットの歯根膜組織において、歯根膜組織中の血管形成が促進し、異所性の骨形成が抑制された。また AngII ペプチドが、未分化なヒト歯根膜細胞に対して、腱/靱帯関連遺伝子の発現を誘導し、さらに歯根膜細胞の起源である歯小嚢のマーカーの 1 つとされるトロンボスポンディン2の発現を亢進することが明らかになった。以上の結果より、意図的歯牙再植を行う際に、AngII を応用することによってアンキローシスを抑制し、歯根膜組織の治癒を促進しうる可能性が示唆された。
日本学術振興会, 挑戦的萌芽研究, 九州大学, 23659890

歯根膜を有した次世代型人工歯根の開発
科学研究費助成事業 基盤研究(B)
2010年 - 2012年
前田 英史, 赤峰 昭文, 和田 尚久, 門野内 聡, 友清 淳, 藤井 慎介
天然歯に近い歯根膜組織を有した次世代型インプラント体の開発を目的とした。本研究において、カルシウム刺激が当研究室で樹立した2種類の未分化なヒト歯根膜細胞株の増殖と骨系細胞への分化誘導作用があることを明らかにした。そこでラット脛骨骨窩洞内へハイドロキシアパタイトの円柱(HAp)とともに未分化なヒト歯根膜細胞を移植した結果、HAp 周囲に、移植細胞に由来した骨様硬組織形成とその周囲に歯根膜様線維組織の形成が観察された。つぎに同ラットの抜歯窩骨窩洞内に埋入した結果、歯根膜様組織の形成が認められた。以上より、HAp および未分化な歯根膜細胞との骨への移植によって歯根膜様組織を有した人工歯根を具現化可能な結果と手段が得られたと考えられる。
日本学術振興会, 基盤研究(B), 九州大学, 22390359

歯周靭帯の再生を主軸にした新規歯周再生療法の開発
科学研究費助成事業 基盤研究(C)
2010年 - 2012年
藤井 慎介, 赤峰 昭文, 前田 英史, 和田 尚久, 友清 淳
ヒト歯根膜細胞に伸展力を負荷したところ発現量の増加した 216個の遺伝子のうち、 Wnt を歯周靭帯の再生を促進する因子として検出した。歯根膜細胞において Wnt5a 刺激により分化関連遺伝子発現が上昇し、運動能が促進した。また、Far-western 法および質量分析法を用いて、 Wnt と結合する細胞外基質蛋白質 Nidogen-1を同定した。二相分離法の結果、Nidogen-1 と結合した Wnt は親水相に分画された。Nidogen-1 と Wnt3a を混和後、細胞に刺激したところ、Wnt3a 刺激依存性のシグナル伝達が促進した。
日本学術振興会, 基盤研究(C), 22592123

歯根膜はその再生に何を必要とするか?
科学研究費助成事業 基盤研究(B)
2009年 - 2011年
赤峰 昭文, 前田 英史, 和田 尚久, 友清 淳, 藤井 慎介
歯根膜組織は、歯根を骨に結びつける線維性結合組織であり、歯の維持において重要な働きを有している。本研究課題では、骨縁下カリエスや重度の歯周病、外傷によって喪失した歯根膜組織を再生することを念頭に置いて、それに求められる幹細胞、形態形成因子、そして足場材について明らかにすることを目的とした。その結果、まず歯根膜幹細胞には、間葉系幹細胞と基本的に同等のマーカーの発現が重要であることが明らかになった。つぎに形態形成因子として、TGF-beta1、bFGF、bFGF/TGF-beta1連続刺激、NGF、GDNF、EGF、メカニカルストレス、Angiotensin II、Interleukin-11、そしてカルシウムが重要な因子であることが判明した。そして足場材として、カルシウムを含む材料やスーパーボンドのような樹脂製材に足場材としての有効性が認められた。
日本学術振興会, 基盤研究(B), 九州大学, 21390510

歯根膜幹細胞を応用した神経再生誘導法の樹立
科学研究費助成事業 若手研究(B)
2009年 - 2010年
友清 淳
ヒト歯根膜幹細胞による神経再生について解析を行うため、多分化能を有し胚性幹細胞関連遺伝子を発現するヒト歯根膜細胞株(1-17細胞株)を用い、ラット副腎髄質褐色細胞腫由来細胞(PC12)の神経細胞分化、細胞遊走、およびアポトーシスについて検討を行った。その結果、1-17細胞株がPC12の神経細胞分化ならびに細胞遊走を促進し、アポトーシスを抑制したことからヒト歯根膜幹細胞における神経再生能が示唆された。さらに1-17細胞株と、神経細胞への分化能を有さないヒト歯根膜細胞株とのマイクロアレイ及びプロテオミクス解析を行い、現在神経再生を促進する因子について検討を行っている。
日本学術振興会, 若手研究(B), 九州大学, 21791942

ヒト歯根膜前駆細胞クローン細胞株を用いた歯根膜再生機構の解明
科学研究費助成事業 基盤研究(B)
2007年 - 2009年
前田 英史, 赤峰 昭文, 藤井 慎介, 友清 淳
本研究課題において私たちは、2種のヒト歯根膜幹細胞/前駆細胞株を樹立し、歯根膜組織再生に必要な細胞要素としてのそれらのキャラクタリゼーションを行った。いずれも骨髄間葉系幹細胞と同様のマーカーを発現したが、歯根膜細胞株は歯根膜組織に強く発現するPeriostinならびにScleraxisを発現していたことから歯根膜の特徴を維持していることが明らかになった。この細胞株を用いて、組織再生のための足場材にはカルシウムを成分として含む材料が、効果的にセメント芽細胞/骨芽細胞への分化を促進することがわかった。さらに歯根膜再生の形態形成因子として、Basic Fibroblast Growth FactorならびにTransforming Growth Factor-β1の有効性を明らかにした。また心臓血管系の調節に重要な働きをしていることが知られているAngotensin IIが歯根膜組織再生に有益な効果をもたらす可能性があることが示唆された。そして歯根膜幹細胞はNerve Growth Factorを分泌し、神経細胞の分化、遊走そしてアポトーシス抑制において重要な働きをしていることが判明した。以上のことから、歯根膜組織再生は、これらが複合して機能性を発揮することによって達成される可能性があることが示唆された。
日本学術振興会, 基盤研究(B), 九州大学, 19390486