2021年02月, 北海道大学大学院医学研究院, 優秀論文賞　　　　　　　　　　　　　　　
築山忠維

2015年12月, 公益財団法人 日本膵臓病研究財団, 膵臓病研究奨励賞　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維

New insights in ubiquitin-dependent Wnt receptor regulation in tumorigenesis
Tadasuke Tsukiyama
In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal, Springer Science and Business Media LLC, 2024年02月21日, ［査読有り］, ［招待有り］, ［筆頭著者, 責任著者］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Abstract

Wnt signaling plays a crucial role in embryonic development and homeostasis maintenance. Delicate and sensitive fine-tuning of Wnt signaling based on the proper timings and positions is required to balance cell proliferation and differentiation and maintain individual health. Therefore, homeostasis is broken by tissue hypoplasia or tumor formation once Wnt signal dysregulation disturbs the balance of cell proliferation. The well-known regulatory mechanism of Wnt signaling is the molecular reaction associated with the cytoplasmic accumulation of effector β-catenin. In addition to β-catenin, most Wnt effector proteins are also regulated by ubiquitin-dependent modification, both qualitatively and quantitatively. This review will explain the regulation of the whole Wnt signal in four regulatory phases, as well as the different ubiquitin ligases and the function of deubiquitinating enzymes in each phase. Along with the recent results, the mechanism by which RNF43 negatively regulates the surface expression of Wnt receptors, which has recently been well understood, will be detailed. Many RNF43 mutations have been identified in pancreatic and gastrointestinal cancers and examined for their functional alteration in Wnt signaling. Several mutations facilitate or activate the Wnt signal, reversing the RNF43 tumor suppressor function into an oncogene. RNF43 may simultaneously play different roles in classical multistep tumorigenesis, as both wild-type and mutant RNF43 suppress the p53 pathway. We hope that the knowledge obtained from further research in RNF43 will be applied to cancer treatment in the future despite the fully unclear function of RNF43., 42063426

Wnt/β-catenin signaling stabilizes hemidesmosomes in keratinocytes
Kosumi, Hideyuki, Watanabe, Mika, Shinkuma, Satoru, Fujimura, Yu, Tsukiyama, Tadasuke, Donati, Giacomo, Iwata, Hiroaki, Ujiie, Hideyuki, Natsuga, Ken M
Journal of Investigative Dermatology, 142, 6, 1576, 1586, 2022年06月01日, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Hemidesmosomes (HDs) are adhesion complexes that promote epithelial-stromal attachment in stratified and complex epithelia, including the epidermis. In various biological processes, such as differentiation and migration of epidermal keratinocytes during wound healing or carcinoma invasion, quick assembly and disassembly of HDs are prerequisites. In this study, we show that inhibition of Wnt/β-catenin signaling disturbs HD organization in keratinocytes. Screening with inhibitors identified the depletion of HD components and HD-like structures through Wnt inhibition, but keratinocyte differentiation was not affected. Wnt inhibition significantly diminished plectin and type XVII collagen expression in the basal side of Wnt-inhibited cells and the dermo-epidermal junction of the Wnt-inactive murine basal epidermis. Similar to Wnt inhibition, PLEC-knockout cells or cells with plectin-type XVII collagen binding defects showed type XVII collagen reduction in the basal side of the cells, implying the possible involvement of Wnt/β-catenin signaling in HD assembly. Atypical protein kinase C inhibition ameliorated the phenotypes of Wnt-inhibited cells. These findings show that Wnt/β-catenin signaling regulates the localization of HD components in keratinocytes and that the atypical protein kinase C pathway is involved in Wnt inhibition‒induced HD disarrangement. Our study suggests that the Wnt signaling pathway could be a potential therapeutic target for treating HD-defective diseases, such as epidermolysis bullosa.

Post‐translational Wnt receptor regulation: Is the fog slowly clearing?
Tadasuke Tsukiyama, Bon‐Kyoung Koo, Shigetsugu Hatakeyama
BioEssays, 43, 4, 2000297, 2000297, Wiley, 2021年02月11日, ［査読有り］, ［招待有り］, ［筆頭著者, 責任著者］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Wnt signaling plays pivotal roles during our entire lives, from conception to death, through the regulation of morphogenesis in developing embryos and the maintenance of tissue homeostasis in adults. The regulation of Wnt signaling occurs on several levels: at the receptor level on the plasma membrane, at the β-catenin protein level in the cytoplasm, and through transcriptional regulation in the nucleus. Several recent studies have focused on the mechanisms of Wnt receptor regulation, following the discovery that the Wnt receptor frizzled (Fzd) is a target of the ubiquitin ligases, RNF43 and ZNRF3. RNF43 and ZNRF3 are homologous genes that are mutated in several cancers. The details underlying their mechanism of action continue to unfold, while at the same time raising many new questions. In this review, we discuss advances and controversies in our understanding of Wnt receptor regulation., 24556193

A phospho-switch controls RNF43-mediated degradation of Wnt receptors to suppress tumorigenesis
Tadasuke Tsukiyama, Juqi Zou, Jihoon Kim, Shohei Ogamino, Yuki Shino, Takamasa Masuda, Alessandra Merenda, Masaki Matsumoto, Yoichiro Fujioka, Tomonori Hirose, Sayuri Terai, Hidehisa Takahashi, Tohru Ishitani, Keiichi I. Nakayama, Yusuke Ohba, Bon-Kyoung Koo, Shigetsugu Hatakeyama
Nature Communications, 11, 1, 4586, 4586, Springer Science and Business Media LLC, 2020年09月15日, ［査読有り］, ［筆頭著者, 責任著者］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）,
Frequent mutation of the tumour suppressor RNF43 is observed in many cancers, particularly colon malignancies. RNF43, an E3 ubiquitin ligase, negatively regulates Wnt signalling by inducing degradation of the Wnt receptor Frizzled. In this study, we discover that RNF43 activity requires phosphorylation at a triplet of conserved serines. This phospho-regulation of RNF43 is required for zebrafish development and growth of mouse intestinal organoids. Cancer-associated mutations that abrogate RNF43 phosphorylation cooperate with active Ras to promote tumorigenesis by abolishing the inhibitory function of RNF43 in Wnt signalling while maintaining its inhibitory function in p53 signalling. Our data suggest that RNF43 mutations cooperate with KRAS mutations to promote multi-step tumorigenesis via the Wnt-Ras-p53 axis in human colon cancers. Lastly, phosphomimetic substitutions of the serine trio restored the tumour suppressive activity of extracellular oncogenic mutants. Therefore, harnessing phospho-regulation of RNF43 might be a potential therapeutic strategy for tumours with RNF43 mutations.

The role of Mediator and Little Elongation Complex in transcription termination.
Hidehisa Takahashi, Amol Ranjan, Shiyuan Chen, Hidefumi Suzuki, Mio Shibata, Tomonori Hirose, Hiroko Hirose, Kazunori Sasaki, Ryota Abe, Kai Chen, Yanfeng He, Ying Zhang, Ichigaku Takigawa, Tadasuke Tsukiyama, Masashi Watanabe, Satoshi Fujii, Midori Iida, Junichi Yamamoto, Yuki Yamaguchi, Yutaka Suzuki, Masaki Matsumoto, Keiichi I Nakayama, Michael P Washburn, Anita Saraf, Laurence Florens, Shigeo Sato, Chieri Tomomori-Sato, Ronald C Conaway, Joan W Conaway, Shigetsugu Hatakeyama
Nature communications, 11, 1, 1063, 1063, 2020年02月26日, ［査読有り］, ［国際誌］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Mediator is a coregulatory complex that regulates transcription of Pol II-dependent genes. Previously, we showed that human Mediator subunit MED26 plays a role in the recruitment of Super Elongation Complex (SEC) or Little Elongation Complex (LEC) to regulate the expression of certain genes. MED26 plays a role in recruiting SEC to protein-coding genes including c-myc and LEC to small nuclear RNA (snRNA) genes. However, how MED26 engages SEC or LEC to regulate distinct genes is unclear. Here, we provide evidence that MED26 recruits LEC to modulate transcription termination of non-polyadenylated transcripts including snRNAs and mRNAs encoding replication-dependent histone (RDH) at Cajal bodies. Our findings indicate that LEC recruited by MED26 promotes efficient transcription termination by Pol II through interaction with CBC-ARS2 and NELF/DSIF, and promotes 3' end processing by enhancing recruitment of Integrator or Heat Labile Factor to snRNA or RDH genes, respectively.

Type XVII collagen coordinates proliferation in the interfollicular epidermis
Mika Watanabe, Ken Natsuga, Wataru Nishie, Yasuaki Kobayashi, Giacomo Donati, Shotaro Suzuki, Yu Fujimura, Tadasuke Tsukiyama, Hideyuki Ujiie, Satoru Shinkuma, Hideki Nakamura, Masamoto Murakami, Michitaka Ozaki, Masaharu Nagayama, Fiona M. Watt, Hiroshi Shimizu
ELIFE, 6, e26635, 1, 24, ELIFE SCIENCES PUBLICATIONS LTD, 2017年07月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Type XVII collagen (COL17) is a transmembrane protein located at the epidermal basement membrane zone. COL17 deficiency results in premature hair aging phenotypes and in junctional epidermolysis bullosa. Here, we show that COL17 plays a central role in regulating interfollicular epidermis (IFE) proliferation. Loss of COL17 leads to transient IFE hypertrophy in neonatal mice owing to aberrant Wnt signaling. The replenishment of COL17 in the neonatal epidermis of COL17-null mice reverses the proliferative IFE phenotype and the altered Wnt signaling. Physical aging abolishes membranous COL17 in IFE basal cells because of inactive atypical protein kinase C signaling and also induces epidermal hyperproliferation. The overexpression of human COL17 in aged mouse epidermis suppresses IFE hypertrophy. These findings demonstrate that COL17 governs IFE proliferation of neonatal and aged skin in distinct ways. Our study indicates that COL17 could be an important target of anti-aging strategies in the skin.

The inflammatory cytokine IL-1β is involved in bladder remodeling after bladder outlet obstruction in mice.
Kanno Y, Mitsui T, Kitta T, Moriya K, Tsukiyama T, Hatakeyama S, Nonomura K
Neurourology and urodynamics, 35, 3, 377, 381, WILEY-BLACKWELL, 2016年03月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, AimsWe investigated the relationship between IL-1 and morphological and functional changes following partial bladder outlet obstruction (pBOO).
MethodsFemale wild-type C57/BL6 mice (WT) and IL-1-/- mice (KO) were used. Animals were sacrificed either 1 or 3 weeks after pBOO or sham surgery, and their bladders were harvested to determine bladder weight, for RT-PCR to measure interleukin-1 (IL-1), insulin growth factor-1 (IGF-1), and transforming growth factor- (TGF-) levels, and for histological analysis with Hematoxylin-Eosin (HE) staining. Cystometry was performed on conscious animals 3 weeks after surgery to evaluate urodynamic parameters. IGF-1 was also administered intraperitoneally to KO with pBOO, and bladder weight was then investigated.
ResultsIL-1-mRNA levels were significantly higher in WT-pBOO than in WT-sham. IGF-1-mRNA and TGF--mRNA levels were also significantly higher in WT-pBOO than in WT-sham; however, these increases were smaller in KO-pBOO than in WT-pBOO. Bladder weight was significantly higher in WT-pBOO than in WT-sham, while increases in bladder weight were significantly suppressed in KO-pBOO. HE staining revealed the thickened bladder wall in WT-pBOO, and this phenomenon was less in KO-pBOO than in WT-pBOO. Regarding the urodynamic parameters examined, micturition pressure and bladder capacity were significantly higher in WT-pBOO than in WT-sham, but remained unchanged in KO-pBOO. The administration of IGF-1 to KO-pBOO led to similar increases in bladder weight and the thickened bladder wall as those observed in WT-pBOO.
ConclusionIL-1 has the potential to induce bladder remodeling and deteriorate urodynamic parameters in pBOO. Neurourol. Urodynam. 35:377-381, 2016. (c) 2015 Wiley Periodicals, Inc.

Molecular Role of RNF43 in Canonical and Noncanonical Wnt Signaling
Tadasuke Tsukiyama, Akimasa Fukui, Sayuri Terai, Yoichiro Fujioka, Keisuke Shinada, Hidehisa Takahashi, Terry P. Yamaguchi, Yusuke Ohba, Shigetsugu Hatakeyama
MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY, 35, 11, 2007, 2023, AMER SOC MICROBIOLOGY, 2015年06月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Wnt signaling pathways are tightly regulated by ubiquitination, and dysregulation of these pathways promotes tumorigenesis. It has been reported that the ubiquitin ligase RNF43 plays an important role in frizzled-dependent regulation of the Wnt/beta-catenin pathway. Here, we show that RNF43 suppresses both Wnt/beta-catenin signaling and noncanonical Wnt signaling by distinct mechanisms. The suppression of Wnt/beta-catenin signaling requires interaction between the extracellular protease-associated (PA) domain and the cysteine-rich domain (CRD) of frizzled and the intracellular RING finger domain of RNF43. In contrast, these N-terminal domains of RNF43 are not required for inhibition of noncanonical Wnt signaling, but interaction between the C-terminal cytoplasmic region of RNF43 and the PDZ domain of dishevelled is essential for this suppression. We further show the mechanism by which missense mutations in the extracellular portion of RNF43 identified in patients with tumors activate Wnt/beta-catenin signaling. Missense mutations of RNF43 change their localization from the endosome to the endoplasmic reticulum (ER), resulting in the failure of frizzled-dependent suppression of Wnt/beta-catenin signaling. However, these mutants retain the ability to suppress noncanonical Wnt signaling, probably due to interaction with dishevelled. RNF43 is also one of the potential target genes of Wnt/beta-catenin signaling. Our results reveal the molecular role of RNF43 and provide an insight into tumorigenesis.

MED26 regulates the transcription of snRNA genes through the recruitment of little elongation complex
Hidehisa Takahashi, Ichigaku Takigawa, Masashi Watanabe, Delnur Anwar, Mio Shibata, Chieri Tomomori-Sato, Shigeo Sato, Amol Ranjan, Chris W. Seidel, Tadasuke Tsukiyama, Wataru Mizushima, Masayasu Hayashi, Yasuyuki Ohkawa, Joan W. Conaway, Ronald C. Conaway, Shigetsugu Hatakeyama
NATURE COMMUNICATIONS, 6, 5941, NATURE PUBLISHING GROUP, 2015年01月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Regulation of transcription elongation by RNA polymerase II (Pol II) is a key regulatory step in gene transcription. Recently, the little elongation complex (LEC)-which contains the transcription elongation factor ELL/EAF-was found to be required for the transcription of Pol II-dependent small nuclear RNA (snRNA) genes. Here we show that the human Mediator subunit MED26 plays a role in the recruitment of LEC to a subset of snRNA genes through direct interaction of EAF and the N-terminal domain (NTD) of MED26. Loss of MED26 in cells decreases the occupancy of LEC at a subset of snRNA genes and results in a reduction in their transcription. Our results suggest that the MED26-NTD functions as a molecular switch in the exchange of TBP-associated factor 7 (TAF7) for LEC to facilitate the transition from initiation to elongation during transcription of a subset of snRNA genes.

Variation in the bacterial conditions inside cages is correlated with intracage humidity and ammonia levels.　　　　　　　　　　　　　　　
Tosa N, Yoshimatsu K, Tadasuke Tsukiyama, Hatakeyama S, Arikawa J
Lab Animal and Environ, 21, 2, 87, 98, 2013年, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）

Ymer acts as a multifunctional regulator in nuclear factor-κB and Fas signaling pathways.
Tsukiyama T, Matsuda-Tsukiyama M, Bohgaki M, Terai S, Tanaka S, Hatakeyama S
Molecular medicine (Cambridge, Mass.), 18, 4, 587, 597, FEINSTEIN INST MED RES, 2012年04月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The nuclear factor (NF)-kappa B family of transcription factors regulates diverse cellular functions, including inflammation, oncogenesis and apoptosis. It was reported that A20 plays a critical role in the termination of NF-kappa B signaling after activation. Previously, we showed that Ymer interacts and collaborates with A20, followed by degradation of receptor-interacting protein (RIP) and attenuation of NF-kappa B signaling. Here we show the function of Ymer in regulation of several signaling pathways including NF-kappa B on the basis of results obtained by using Ymer transgenic (Ymer Tg) mice. Ymer Tg mice exhibited impaired immune responses, including NF-kappa B and mitogen-activated protein kinase (MAPK) activation, cell proliferation and cytokine production, to tumor necrosis factor (TNF)-alpha, polyl:C or lipopolysaccharide ([PS) stimulation. Ymer Tg mice were more resistant to LPS-induced septic shock than wild-type mice. Transgene of Ymer inhibited the onset of glomerulonephritis in Ipr/Ipr mice as an autoimmune disease model. In contrast to the inflammatory immune response to LPS, Fas-mediated cell death was strongly induced in liver cells of Ymer Tg mice in which Ymer is abundantly expressed. These findings suggest that Ymer acts as a regulator downstream of several receptors and that Ymer functions as a positive or negative regulator in a signaling pathway-dependent manner. Online address: hffp://www.molmed.org doi: 10.2119/molmed.2011.00435

Mice lacking Wnt2b are viable and display a postnatal olfactory bulb phenotype
Tadasuke Tsukiyama, Terry P. Yamaguchi
NEUROSCIENCE LETTERS, 512, 1, 48, 52, ELSEVIER IRELAND LTD, 2012年03月, ［査読有り］, ［筆頭著者, 責任著者］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Wnts are secreted glycoproteins that play important roles in embryonic development. Wnt2b is transiently expressed in the primitive streak (PS) during gastrulation and in several organs during organogenesis. To determine the biological function of Wnt2b during mouse development, we established a conditional null allele of Wnt2b. Mice lacking Wnt2b were viable, fertile, and displayed a normal life span, however, the olfactory bulb in adult Wnt2b mutant mice was significantly reduced in length. Our results suggest that Wnt2b primarily plays a supportive role in gastrulation and organogenesis, functioning redundantly with canonical Wnts, such as Wnt2, in numerous tissues. (C) 2012 Elsevier Ireland Ltd. All rights reserved.

TRIM29 negatively regulates p53 via inhibition of Tip60
Takuya Sho, Tadasuke Tsukiyama, Tomonobu Sato, Takeshi Kondo, Jun Cheng, Takashi Saku, Masahiro Asaka, Shigetsugu Hatakeyama
BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-MOLECULAR CELL RESEARCH, 1813, 6, 1245, 1253, ELSEVIER SCIENCE BV, 2011年06月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Ataxia-telangiectasia (AT) is an autosomal recessive genetic disease characterized by immunological deficiencies, neurological degeneration, developmental abnormalities and an increased risk of cancer. Ataxia-telangiectasia group D (ATDC) was initially described as a gene related to AT. Ataxia-telangiectasia group D. also known as TRIM29, is structurally a member of the tripartite motif (TRIM) family of proteins, some of which have been reported to be highly expressed in some human carcinomas, but the involvement of TRIM29 in carcinogenesis has not been fully elucidated. In this study, we found by using yeast two-hybrid screening that TRIM29 binds to Tip60, which has been reported as a cellular acetyltransferase protein. Overexpression of TRIM29 promoted degradation and changed localization of Tip60 and reduced acetylation of p53 at lysine 120 by Tip60, resulting in enhancement of cell growth and transforming activity. In addition, we found that TRIM29 suppresses apoptosis induced by UV irradiation in HCT116 cell lines. These findings suggest that TRIM29 functions as an oncogene that promotes tumor growth. (C) 2011 Elsevier B.V. All rights reserved.

The canonical Wnt signaling pathway is not involved in renal cyst development in the kidneys of inv mutant mice
Noriyuki Sugiyama, Tadasuke Tsukiyama, Terry P. Yamaguchi, Takahiko Yokoyama
KIDNEY INTERNATIONAL, 79, 9, 957, 965, NATURE PUBLISHING GROUP, 2011年05月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Recent studies have identified several genes whose defects cause hereditary renal cystic diseases with most of the gene products located in the primary cilia. It has been suggested that primary cilia are involved in signaling pathways, defects of which result in abnormal cell proliferation and randomization of oriented cell division in the kidney leading to cyst formation. Mice with a mutation in the inv gene are a model for human nephronophthisis type 2 and develop multiple renal cysts. Inv protein (also called inversin) is located in the base of primary cilia and acts as a switch from canonical to non-canonical Wnt signaling. Here, we studied the orientation of cell division and proliferation in the kidneys of inv mutant mice, as its loss is thought to maintain activation of the canonical Wnt signaling. To establish if canonical signaling was involved in this process, we mated inv mutant with BATlacZ mice to measure canonical Wnt activity. Based on these reporter mice, nuclear localization and phosphorylation of beta-catenin, and responsiveness to Wnt ligands in inv mutant cells, we found that random oriented cell division is an initial event for renal tubule expansion and precedes cell proliferation. Thus, our results do not support the hypothesis that canonical Wnt signaling causes renal cyst development in these mice. Kidney International (2011) 79, 957-965; doi:10.1038/ki.2010.534; published online 19 January 2011

RNF43 interacts with NEDL1 and regulates p53-mediated transcription
Keisuke Shinada, Tadasuke Tsukiyama, Takuya Sho, Fumihiko Okumura, Masahiro Asaka, Shigetsugu Hatakeyama
BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS, 404, 1, 143, 147, ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE, 2011年01月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The ubiquitin-proteasomal system plays a crucial role in oncogenesis in colorectal tissues. Recent studies have shown that stability of beta-catenin, which functions as an oncogene for colorectal cancer, is regulated by ubiquitin-mediated degradation. It has been reported that a putative E3 ubiquitin ligase, RNF43, is highly expressed in human colorectal carcinoma and that RNF43 promotes cell growth. However, the involvement of RNF43 in carcinogenesis has not been fully elucidated. In this study, we found by using yeast two-hybrid screening that RNF43 binds to NEDD-4-like ubiquitin-protein ligase-1 (NEDL1), which enhances pro-apoptotic activity by p53. In addition, we found that RNF43 also interacts with p53 and that RNF43 suppresses transcriptional activity of p53 in H1299 cells and attenuates apoptosis induced by ultraviolet irradiation. These findings suggest that RNF43 is associated with p53-mediated apoptosis in collaboration with NEDL1 in colorectal carcinogenesis. (C) 2010 Elsevier Inc. All rights reserved.

TRIM24 mediates ligand-dependent activation of androgen receptor and is repressed by a bromodomain-containing protein, BRD7, in prostate cancer cells
Misato Kikuchi, Fumihiko Okumura, Tadasuke Tsukiyama, Masashi Watanabe, Naoto Miyajima, Junji Tanaka, Masahiro Imamura, Shigetsugu Hatakeyama
BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-MOLECULAR CELL RESEARCH, 1793, 12, 1828, 1836, ELSEVIER SCIENCE BV, 2009年12月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The androgen receptor (AR) is a ligand-dependent transcription factor that belongs to the family of nuclear receptors, and its activity is regulated by numerous AR coregulators. AR plays an important role in prostate development and cancer. In this study, we found that TRIM24/transcriptional intermediary factor lot (T1F1 alpha), which is known as a ligand-dependent nuclear receptor co-regulator, interacts with AR and enhances transcriptional activity of AR by dihydrotestosterone in prostate cancer cells. We showed that TRIM24 functionally interacts with TIP60, which acts as a coactivator of AR and synergizes with TIP60 in the transactivation of AR. We also showed that TRIM24 binds to bromodomain containing 7 (BRD7), which can negatively regulate cell proliferation and growth. A luciferase assay indicated that BRD7 represses the AR transactivation activity upregulated by TRIM24. These findings indicate that TRIM24 regulates AR-mediated transcription in collaboration with TIP60 and BRD7. (C) 2009 Elsevier B.V. All rights reserved.

TRIM31 interacts with p52(Shc) and inhibits Src-induced anchorage-independent growth
Masashi Watanabe, Tadasuke Tsukiyama, Shigetsugu Hatakeyama
BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS, 388, 2, 422, 427, ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE, 2009年10月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Tripartite motif-containing protein (TRIM) family proteins are involved in a broad range of biological processes and, consistently, their alterations result in diverse pathological conditions such as genetic diseases, viral infection and cancer development. In this study, we found that one of the TRIM family proteins, TRIM31, is highly expressed in the gastrointestinal tract and interacts with p52(Shc), one of the signal transducers. We also found by a binding assay that almost the whole region other than the RING domain is required for the binding to p52(Shc) but found by pulse-chase analysis that overexpression of TRIM31 does not affect the stability of p52(Shc). Moreover, we found that overexpression of TRIM31 suppresses anchorage-independent cell growth induced by the active form of c-Src. These results suggest that TRIM31 attenuates c-Src signaling via p52(Shc) under anchorage-independent growth conditions and is potentially associated with growth activity of cells in the gastrointestinal tract. (C) 2009 Elsevier Inc. All rights reserved.

Ubiquitin-Conjugating Enzyme UBE2Q2 Suppresses Cell Proliferation and Is Down-Regulated in Recurrent Head and Neck Cancer
Hiroyuki Maeda, Naoto Miyajima, Satoshi Kano, Tadasuke Tsukiyama, Fumihiko Okumura, Satoshi Fukuda, Shigetsugu Hatakeyama
MOLECULAR CANCER RESEARCH, 7, 9, 1553, 1562, AMER ASSOC CANCER RESEARCH, 2009年09月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The ubiquitin-proteasome system has a crucial role in maintaining and regulating cellular homeostasis including carcinogenesis. UBE2Q2, also designated Ubci, is one of the ubiquitin-conjugating enzymes (E2), and it has been reported that mRNA of UBE2Q2 is highly expressed in human head and neck squamous cell carcinoma, particularly hypopharyngeal carcinoma. However, the involvement of UBE2Q2 in carcinogenesis has not been fully elucidated. Most cases of head and neck carcinoma are treated with cis-diamminedichloroplatinum (II; CDDP) or docetaxel, which are the most effective chemotherapeutic agents against squamous cell carcinomas. Nevertheless, some head and neck cancers develop resistance to these drugs, although the causes and mechanisms remain unknown. In this study, we found high expression levels of UBE2Q2 in human head and neck carcinoma cell lines and cancer tissues by using an anti-UBE2Q2 antibody at the protein level. We also found that the expression level of UBE2Q2 is decreased in cell lines and cancer tissues that have resistance to CDDP or docetaxel and in cancer tissues treated with CDDP or docetaxel. Furthermore, we found that overexpression of UBE2Q2 affects cell proliferation and anchorage-independent cell growth. These findings suggest that UBE2Q2 is a novel oncosuppressor that inhibits tumor growth and is related to the resistance to anticarcinoma agents and that UBE2Q2 likely functions as a novel diagnostic tool and a potentially therapeutic target for head and neck squamous cell carcinoma. (Mol Cancer Res 2009;7(9):1553-62)

Wnt2/2b and beta-Catenin Signaling Are Necessary and Sufficient to Specify Lung Progenitors in the Foregut
Ashley M. Goss, Ying Tian, Tadasuke Tsukiyama, Ethan David Cohen, Diane Zhou, Min Min Lu, Terry P. Yamaguchi, Edward E. Morrisey
DEVELOPMENTAL CELL, 17, 2, 290, 298, CELL PRESS, 2009年08月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Patterning of the primitive foregut promotes appropriate organ specification along its anterior-posterior axis. However, the molecular pathways specifying foregut endoderm progenitors are poorly understood. We show here that Wnt2/2b signaling is required to specify lung endoderm progenitors within the anterior foregut. Embryos lacking Wnt2/2b expression exhibit complete lung agenesis and do not express Nkx2.1, the earliest marker of the lung endoderm. In contrast, other foregut endoderm-derived organs, including the thyroid, liver, and pancreas, are correctly specified. The phenotype observed is recapitulated by an endoderm-restricted deletion of beta-catenin, demonstrating that Wnt2/2b signaling through the canonical Writ pathway is required to specify lung endoderm progenitors within the foregut. Moreover, activation of canonical Wnt/beta-catenin signaling results in the reprogramming of esophagus and stomach endoderm to a lung endoderm progenitor fate. Together, these data reveal that canonical Wnt2/2b signaling is required for the specification of lung endoderm progenitors in the developing foregut.

Embryonic hair follicle fate change by augmented beta-catenin through Shh and Bmp signaling
Kentaro Suzuki, Yuji Yamaguchi, Mylah Villacorte, Kenichiro Mihara, Masashi Akiyama, Hiroshi Shimizu, Makoto M. Taketo, Naomi Nakagata, Tadasuke Tsukiyama, Terry P. Yamaguchi, Walter Birchmeier, Shigeaki Kato, Gen Yamada
DEVELOPMENT, 136, 3, 367, 372, COMPANY OF BIOLOGISTS LTD, 2009年02月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, beta-catenin signaling is one of the key factors regulating the fate of hair follicles (HFs). To elucidate the regulatory mechanism of embryonic HF fate determination during epidermal development/differentiation, we analyzed conditional mutant mice with keratinocytes expressing constitutively active beta-catenin (K5-Cre Catnb((ex3)fl/+)). The mutant mice developed scaly skin with a thickened epidermis and showed impaired epidermal stratification. The hair shaft keratins were broadly expressed in the epidermis but there was no expression of the terminal differentiation markers K1 and loricrin. Hair placode markers (Bmp2 and Shh) and follicular dermal condensate markers ( noggin, patched 1 and Pdgfra) were expressed throughout the epidermis and the upper dermis, respectively. These results indicate that the embryonic epidermal keratinocytes have switched extensively to the HF fate. A series of genetic studies demonstrated that the epidermal switching to HF fate was suppressed by introducing the conditional mutation K5-Cre Catnb((ex3)fl/+) Shh(fl/-) ( with additional mutation of Shh signaling) or K5-Cre Catnb((ex3)fl/+) BmprIA(fl/fl) ( with additional mutation of Bmp signaling). These results demonstrate that Wnt/beta-catenin signaling relayed through Shh and Bmp signals is the principal regulatory mechanism underlying the HF cell fate change. Assessment of Bmp2 promoter activities suggested a putative regulation by beta-catenin signaling relayed by Shh signaling towards Bmp2. We also found that Shh protein expression was increased and expanded in the epidermis of K5-Cre Catnb((ex3)fl/+) BmprIAfl/fl mice. These results indicate the presence of growth factor signal cross-talk involving beta- catenin signaling, which regulates the HF fate.

Inhibition of NF-kappa B signaling via tyrosine phosphorylation of Ymer
Hiroyuki Kameda, Masashi Watanabe, Miyuki Bohgaki, Tadasuke Tsukiyama, Shigetsugu Hatakeyama
BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS, 378, 4, 744, 749, ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE, 2009年01月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Cytoplasmic zinc finger protein A20 functionally dampens inflammatory signals and apoptosis via inhibition of NF-kappa B activation. We have reported that Ymer interacts with A20 and lysine (K)-63-linked polyubiquitin chain and that Ymer inhibits NF-kappa B signaling in collaboration with A20. It has also been reported that Ymer is phosphorylated by EGF stimulation. We found that Ymer was considerably phosphorylated on tyrosine residues also via Src family kinases such as Lck. A luciferase reporter assay showed that mutation of tyrosines on Ymer (YmerY217/279/304F) results in loss of the inhibitory activity for NF-kappa B signaling. Furthermore, a soft agar colony formation assay showed that the combination of SFCY527F and YmerY217/279/304F has no ability for anchorage-independent growth, suggesting that tyrosine phosphorylation of Ymer is important for inhibition of the NF-kappa B-mediated apoptotic pathway. These findings demonstrate that Ymer is likely to be a negative regulator for the NF-kappa B signaling pathway. (C) 2008 Elsevier Inc. All rights reserved

Involvement of Ymer in suppression of NF-kappaB activation by regulated interaction with lysine-63-linked polyubiquitin chain.
Bohgaki M, Tsukiyama T, Nakajima A, Maruyama S, Watanabe M, Koike T, Hatakeyama S
Biochimica et biophysica acta, 1783, 826, 837, 5, 2008年05月, ［査読有り］

Involvement of Ymer in suppression of NF-kappa B activation by regulated interaction with lysine-63-linked polyubiquitin chain
Miyuki Bohgaki, Tadasuke Tsukiyama, Ayako Nakajima, Satoru Maruyama, Masashi Watanabe, Takao Koike, Shigetsugu Hatakeyama
BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-MOLECULAR CELL RESEARCH, 1783, 5, 826, 837, ELSEVIER SCIENCE BV, 2008年05月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, It is known that the cytoplasmic zinc finger protein A20 functionally dampens inflammatory signals and apoptosis via inhibition of NF-kappa B activation and biochemically acts as a unique ubiquitin-modifying protein with dcubiquitmating activity and ubiquitin ligase activity. However, the molecular mechanisms of A20-modulated signal transduction that influence normal immune responses or tumor immunity have not been fully elucidated. Using a yeast two-hybrid system to search for proteins interacting with A20, we identified one novel binding protein, Ymer. Ymer, which has been reported to be highly phosphorylated on tyrosine residues via EGF stimulation, bound to lysine (K)-63-linked polyubiquitin chain on receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1 (RIP 1), which is essential for NF-kappa B signaling in collaboration with A20. A luciferase assay showed that NF-kappa B signaling was down-regulated by overexpression of Ymer, whereas knock-down of Ymer up-egulated NF-kappa B signaling even without stimulation. These findings demonstrate that Ymer is likely to be a negative regulator for the NF-kappa B signaling pathway. (C)007 Elsevier B.V All rights reserved.

Ro52 functionally interacts with IgG1 and regulates its quality control via the ERAD system
Mutsumi Takahata, Miyuki Bohgaki, Tadasuke Tsukiyama, Takeshi Kondo, Masahiro Asaka, Shigetsugu Hatakeyama
MOLECULAR IMMUNOLOGY, 45, 7, 2045, 2054, PERGAMON-ELSEVIER SCIENCE LTD, 2008年04月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The 52-kDa form of SSA/Ro protein (Ro52) is one of autoantigens associated with autoimmune disorders such as systemic lupus erythematosus and Sjogren's syndrome. Anti-SSA/Ro antibodies, the biological function of which remains unknown, are frequently found in the serum of these patients. Recent functional genomic approaches have shown that Ro52/TRIM21 is one of the TRIM family proteins with a RING-finger domain which is closely associated with E3 ubiquitin ligase activity. We found by using yeast-two hybrid screening that Ro52 has an E3 activity in vitro and interacts with human IgG1 heavy chain. We also found that IgG1 heavy chain was modified with polyubiquitination by Ro52 and degraded through the ubiquitin-proteasome system in mammalian cells. Our results also showed that Ro52 interacts with the molecular chaperone p97/VCP, which is thought to function in the endoplasmic reticulum associated degradation (ERAD) system. It is likely that Ro52 plays a role in proteasomal degradation of unfolded IgG1, which is retrogradely transferred from the endoplasmic reticulum to the cytosol. Taken together, our findings suggest that Ro52 plays a significant role in quality control of IgG1 through the ERAD system. (C) 2007 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Ubiquitylation of epsilon-COP by PIRH2 and regulation of the secretion of PSA
Satoru Maruyama, Naoto Miyajima, Miyuki Bohgaki, Tadasuke Tsukiyama, Masahiko Shigemura, Katsuya Nonomura, Shigetsugu Hatakeyama
MOLECULAR AND CELLULAR BIOCHEMISTRY, 307, 1-2, 73, 82, SPRINGER, 2008年01月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Ubiquitylation appears to be involved in the membrane trafficking system including endocytosis, exocytosis, and ER-to-Golgi transport. We found that PIRH2, which was identified as an interacting protein for androgen receptor or p53, interacts with and ubiquitylates the epsilon-subunit of coatmer complex, epsilon-COP. PIRH2 promotes the ubiquitylation of epsilon-COP in vitro and in vivo and consequently promotes the degradation of epsilon-COP. The interaction between PIRH2 and epsilon-COP is affected by the presence of androgen, and PIRH2 in the presence of androgen promotes ubiquitylation of epsilon-COP in vivo. Furthermore, overexpression of the wild type of PIRH2 in prostate cancer cells causes downregulation of the secretion of prostate-specific antigen (PSA), a secretory protein in prostate epithelial cells and one of diagnostic markers for prostate cancer. Our results indicate that PIRH2 functions as a regulator for COP I complex.

Ligand-dependent transcription of estrogen receptor alpha is mediated by the ubiquitin ligase EFP
Ayako Nakajima, Satoru Maruyama, Miyuki Bohgaki, Naoto Miyajima, Tadasuke Tsukiyama, Noriaki Sakuragi, Shigetsugu Hatakeyama
BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS, 357, 1, 245, 251, ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE, 2007年05月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Estrogen-mediated ubiquitylation and subsequent degradation of the estrogen receptor alpha (ER alpha) appears to be involved in the transcriptional activity of ER alpha. We show that the estrogen-responsive finger protein (EFP) interacts with and ubiquitylates ER alpha. EFP promoted the ubiquitylation of ER alpha in vitro and in vivo and consequently promoted the degradation of ER alpha. The interaction between EFP and ER alpha was greatly enhanced in the presence of estrogen. The action of EFP on ER alpha in the presence of estrogen resulted in a robust interaction between ER alpha and Tip60, one of the transcriptional coactivators, leading to activation of ER alpha transcriptional activity. However, a dominant negative mutant of EFP lacking the RING domain prolonged the half-life of ER alpha and inhibited the transcription by ER alpha. Our results indicate that EFP functions as a cofactor for ER alpha-mediated transcription, thus suggesting that ER alpha-mediated transcription is closely linked to he ubiquitylation of ER alpha. (c) 2007 Elsevier Inc. All rights reserved.

Establishment of a newly improved detection system for NF-kappa B activity
Mayuko Matsuda, Tadasuke Tsukiyama, Miyuki Bohgaki, Katsuya Nonomura, Shigetsugu Hatakeyama
IMMUNOLOGY LETTERS, 109, 2, 175, 181, ELSEVIER SCIENCE BV, 2007年04月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The transcription factor nuclear factor-kappa B (NF-kappa B) plays roles in apoptosis, inflammation and oncogenesis. It is important for biological and medical research to understand when proteins of interest are activated in cells, leading to the establishment of a luciferase/EGFP assay to monitor the activation of transcription factors. Here, we describe an improved reporter system for NF-kappa B, the NF-kappa B-activated transgene (NAT) system that can detect NF-kappa B signalling with high sensitivity and specificity. The NAT system consists of large copy numbers of NF-kappa B consensus sequence and a minimal promoter derived from the mouse interleukin-2 (IL-2) gene. Furthermore, we generated NAT systems with stable or unstable luciferase/EGFP proteins. Stable and unstable types of luciferase/EGFP are suitable for analyzing the accumulation of and the real-time activity of NF-kappa B signal, respectively. Our findings suggest that the NAT system is effective for in vivo imaging of NF-kappa B signalling using cells or animals. (c) 2007 Elsevier B.V. All rights reserved.

Protection of vincristine-induced neuropathy by Wld(S) expression and the independence of the activity of Nmnat1
Masashi Watanabe, Tadasuke Tsukiyama, Shigetsugu Hatakeyama
NEUROSCIENCE LETTERS, 411, 3, 228, 232, ELSEVIER IRELAND LTD, 2007年01月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The slow Wallerian degeneration protein (Wld(S)), a fusion protein containing amino-terminal E4B and full-length nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase 1 (Nmnat1), delays axon degeneration caused by physical damages, toxins and genetic mutations which result in patients being diagnosed with neurodegenerative diseases. It is still controversial whether the suppression of axonal degeneration by Wld(S) is due to Nmnat1 or other portion. We generated Wld(S) or Nmnat1-overexpressing Neuro2A cell lines, in which neuronal differentiation including neurite elongation can be induced by retinoic acid. The overexpression of Wld(S) delayed the neurite degeneration by vincristine, whereas that of Nmnat1 did not delay it much. Taken together, Nmnat1 is considerably weaker than Wld(S) for protection from toxic injury in vitro, suggesting that amino-terminal region of Wld(S) is likely to be more significant for protection from axonal degeneration. (c) 2006 Elsevier Ireland Ltd. All rights reserved.

SNIP1 is a candidate modifier of the transcriptional activity of c-Myc on E box-dependent target genes
Makiko Fujii, Lyudmila A. Lyakh, Cameron P. Bracken, Junya Fukuoka, Morisada Hayakawa, Tadasuke Tsukiyama, Steven J. Soil, Melissa Harris, Sonia Rocha, Kevin C. Roche, Shin-ichi Tominaga, Jin Jen, Neil D. Perkins, Robert J. Lechleider, Anita B. Roberts
MOLECULAR CELL, 24, 5, 771, 783, CELL PRESS, 2006年12月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Using a yeast two-hybrid screen, we found that SNIP1 (Smad nuclear-interacting protein 1) associates with c-Myc, a key regulator of cell proliferation and transformation. We demonstrate that SNIP1 functions as an important regulator of c-Myc activity, binding the N terminus of c-Myc through its own C terminus, and that SNIP1 enhances the transcriptional activity of c-Myc both by stabilizing it against proteosomal degradation and by bridging the c-Myc/p300 complex. These effects of SNIP1 on c-Myc likely contribute to synergistic effects of SNIP1, c-Myc, and H-Ras in inducing formation of foci in an in vitro transformation assay and also in supporting anchorage-independent growth. The significant association of SNIP1 and c-Myc staining in a non-small cell lung cancer tissue array is further evidence that their activities might be linked and suggests that SNIP1 might be an important modulator of c-Myc activity in carcinogenesis.

Wnt3a links left-right determination with segmentation and anteroposterior axis elongation
MA Nakaya, K Biris, T Tsukiyama, S Jaime, JA Rawls, TP Yamaguchi
DEVELOPMENT, 132, 24, 5425, 5436, COMPANY OF BIOLOGISTS LTD, 2005年12月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The alignment of the left-right (LR) body axis relative to the anteroposterior (AP) and dorsoventral (DV) axes is central to the organization of the vertebrate body plan and is controlled by the node/organizer. Somitogenesis plays a key role in embryo morphogenesis as a principal component of AP elongation. How morphogenesis is coupled to axis specification is not well understood. We demonstrate that Wnt3a is required for LR asymmetry. Wnt3a activates the Delta/Notch pathway to regulate perinodal expression of the left determinant Nodal, while simultaneously controlling the segmentation clock and the molecular oscillations of the Wnt/beta-catenin and Notch pathways. We provide evidence that Wnt3a, expressed in the primitive streak and dorsal posterior node, acts as a long-range signaling molecule, directly regulating target gene expression throughout the node and presomitic mesoderm. Wnt3a may also modulate the symmetry-breaking activity of mechanosensory cilia in the node. Thus, Wnt3a links the segmentation clock and AP axis elongation with key left-determining events, suggesting that Wnt3a is an integral component of the trunk organizer.

Early embryonic death in mice lacking the beta-catenin-binding protein duplin
M Nishiyama, K Nakayama, R Tsunematsu, T Tsukiyama, A Kikuchi, KI Nakayama
MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY, 24, 19, 8386, 8394, AMER SOC MICROBIOLOGY, 2004年10月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The Wnt signaling pathway plays a pivotal role in vertebrate early development and morphogenesis. Duplin (axis duplication inhibitor) interacts with beta-catenin and prevents its binding to Tcf, thereby inhibiting downstream Wnt signaling. Here we show that Duplin is expressed predominantly from early- to mid-stage mouse embryogenesis, and we describe the generation of mice deficient in Duplin. Duplin(-/-) embryos manifest growth retardation from embryonic day 5.5 (E5.5) and developmental arrest accompanied by massive apoptosis at E7.5. The mutant embryos develop into an egg cylinder but do not form a primitive streak or mesoderm. Expression of beta-catenin target genes, including those for T (brachyury), Axing, and cyclin D1, was not increased in Duplin(-/-) embryos, suggesting that the developmental defect is not simply attributable to upregulation of Wnt signaling caused by the lack of this inhibitor. These results suggest that Duplin plays an indispensable role, likely by a mechanism independent of inhibition of Wnt signaling, in mouse embryonic growth and differentiation at an early developmental stage.

Increased proliferation of B cells and auto-immunity in mice lacking protein kinase C delta
A Miyamoto, K Nakayama, H Imaki, S Hirose, Y Jiang, M Abe, T Tsukiyama, H Nagahama, S Ohno, S Hatakeyama, KI Nakayama
NATURE, 416, 6883, 865, 869, NATURE PUBLISHING GROUP, 2002年04月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, Protein kinase C (PKC), which comprises 11 closely related isoforms, has been implicated in a wide variety of cellular processes, such as growth, differentiation, secretion, apoptosis and tumour development(1-4). Among the PKC isotypes, PKC-delta is unique in that its overexpression results in inhibition of cell growth(5-11). Here we show that mice that lack PKC-delta exhibit expansion of the B-lymphocyte population with the formation of numerous germinal centres in the absence of stimulation. The rate of proliferation in response to stimulation was greater for B cells from PKC-delta-deficient mice than for those from wild-type mice. Adoptive transfer experiments suggested that the hyperproliferation phenotype is B-cell autonomous. Production of interleukin-6 was markedly increased in B cells of PKC-delta-null mice as a result of an increase in the DNA-binding activity of NF-IL6. Furthermore, the PKC-delta-deficient mice contain circulating autoreactive antibodies and display immune-complex-type glomerulonephritis, as well as lymphocyte infiltration in many organs. These results suggest that PKC-delta has an indispensable function in negative regulation of B-cell proliferation, and is particularly important for the establishment of B-cell tolerance.

Down-regulation of p27(Kip1) expression is required for development and function of T cells
T Tsukiyama, N Ishida, M Shirane, YA Minamishima, S Hatakeyama, M Kitagawa, K Nakayama, K Nakayama
JOURNAL OF IMMUNOLOGY, 166, 1, 304, 312, AMER ASSOC IMMUNOLOGISTS, 2001年01月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The proliferation of T cells is regulated in a development-dependent manner, but it has been unclear whether proliferation is essential for T cell differentiation, The cyclin-dependent kinase inhibitor p27(Kip1) is abundant throughout development in cells of the T cell lineage, with the exception of late stage CD4(-)CD8(-) thymocytes and activated mature T cells, both of which show a high rate of proliferation. The role of down-regulation of p27(Kip1) expression in T cell development and function has now been investigated by the generation and characterization of three strains of p27 transgenic mice that express the transgene at various levels specifically in the T cell lineage. The numbers of thymocytes at CD4(+)CD8(+), CD4(+)CD8(-), and CD4(-)CD8(+) stages of development as well as those of mature T cells in peripheral lymphoid tissues were reduced in transgenic mice in a manner dependent on the level of p27(Kip1) expression. The development of thymocytes in the transgenic strain in which p27(Kip1) is most abundant p27-Tg(high) mice) appeared to be blocked at the CD4(-)CD8(-)CD25(+)CD44(low) stage. Peripheral T cells from p27-Tg(high) mice exhibited a reduced ability to proliferate in response to mitogenic stimulation compared with wild-type T cells, Moreover, Ag-induced formation of germinal centers and Ig production were defective in p27-Tg(high) mice. These results suggest that down-regulation of p27(Kip1) expression is required for the development, proliferation, and immunoresponsiveness of T cells.

Development of dendritic epidermal T cells with a skewed diversity of gamma delta TCRs in V delta 1-deficient mice
H Hara, K Kishihara, G Matsuzaki, H Takimoto, T Tsukiyama, RE Tigelaar, K Nomoto
JOURNAL OF IMMUNOLOGY, 165, 7, 3695, 3705, AMER ASSOC IMMUNOLOGISTS, 2000年10月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, One of the most intriguing features of gamma delta T cells that reside in murine epithelia is the association of a specific V gamma/V delta usage with each epithelial tissue. Dendritic epidermal T cells (DETCs) in the murine epidermis, are predominantly derived from the "first wave" V gamma 5(+) fetal thymocytes and overwhelmingly express the canonical V gamma 5/V delta 1-TCRs lacking junctional diversity, Targeted disruption of the V delta 1 gene resulted in a markedly impaired development of V gamma 5(+) fetal thymocytes as precursors of DETCs; however, gamma delta TCR+ DETCs with a typical dendritic morphology were observed in V delta 1(-/-) mice and their cell densities in the epidermis were slightly lower than those in V delta 1(+/-) epidermis, Moreover, the V delta 1-deficient DETCs were functionally competent in their ability to up-regulate cytokines and keratinocyte growth factor-expression in response to keratinocytes, V gamma 5(+) DETCs were predominant in the V delta 1(-/-) epidermis, though V gamma 5(-) gamma delta TCR+ DETCs were also detected, The V gamma 5(+) DETCs showed a typical dendritic shape, gamma delta TCRhigh, and age-associated expansion in epidermis as observed in conventional DETCs of normal mid, whereas the V gamma 5(-) gamma delta TCR+ DETCs showed a less dendritic shape, gamma delta TCRlow, and no expansion in the epidermis, consistent with their immaturity. These results suggest that optimal DETC development does not require a particular V gamma/V delta-chain usage but requires expression of a limited diversity of gamma delta TCRs, which allow DETC precursors to mature and expand within the epidermal microenvironment.

Aldehyde dehydrogenase (ALDH) 2 associates with oxidation of methoxyacetaldehyde; in vitro analysis with liver subcellular fraction derived from human and Aldh2 gene targeting mouse
K Kitagawa, T Kawamoto, N Kunugita, T Tsukiyama, K Okamoto, A Yoshida, K Nakayama, K Nakayama
FEBS LETTERS, 476, 3, 306, 311, ELSEVIER SCIENCE BV, 2000年07月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, A principal pathway of 2-methoxyethanol (ME) metabolism is to the toxic oxidative product, methoxyacetaldehyde (MALD). To assess the role of aldehyde dehydrogenase (ALDH) in MALD metabolism, in vitro MALD oxidation was examined with liver subcellular fractions from Japanese subjects who carried three different ALDH2 genotypes and Aldh2 knockout mice, which were generated in this study. The activity was distributed in mitochondrial fractions of ALDH2*11*1 and wild type (Aldh2+/+) mice but not ALDH2*11*2, *2/*2 subjects or Aldh2 homozygous mutant (Aldh2-/-) mice. These data suggest that ALDH2 is a key enzyme for MALD oxidation and ME susceptibility may be influenced by the ALDH2 genotype. (C) 2000 Federation of European Biochemical Societies, Published by Elsevier Science B.V. All rights reserved.

Aberrant cell cycle checkpoint function and early embryonic death in Chk1(-/-) mice
H Takai, K Tominaga, N Motoyama, YA Minamishima, H Nagahama, T Tsukiyama, K Ikeda, K Nakayama, N Nakanishi, K Nakayama
GENES & DEVELOPMENT, 14, 12, 1439, 1447, COLD SPRING HARBOR LAB PRESS, PUBLICATIONS DEPT, 2000年06月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The recent discovery of checkpoint kinases has suggested the conservation of checkpoint mechanisms between yeast and mammals. In yeast, the protein kinase Chk1 is thought to mediate signaling associated with the DNA damage checkpoint of the cell cycle. However, the function of Chk1 in mammals has remained unknown. Targeted disruption of Chk1 in mice showed that Chk1(-/-) embryos exhibit gross morphologic abnormalities in nuclei as early as the blastocyst stage. In culture, Chk1(-/-) blastocysts showed a severe defect in outgrowth of the inner cell mass and died of apoptosis. DNA replication block and DNA damage failed to arrest the cell cycle before initiation of mitosis in Chk1(-/-) embryos. These results may indicate that Chk1 is indispensable for cell proliferation and survival through maintaining the G(2) checkpoint in mammals.

Targeted disruption of Skp2 results in accumulation of cyclin E and p27(Kip1), polyploidy and centrosome overduplication
K Nakayama, H Nagahama, YA Minamishima, M Matsumoto, Nakamichi, I, K Kitagawa, M Shirane, R Tsunematsu, T Tsukiyama, N Ishida, M Kitagawa, K Nakayama, S Hatakeyama
EMBO JOURNAL, 19, 9, 2069, 2081, NATURE PUBLISHING GROUP, 2000年05月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, The ubiquitin-proteasome pathway plays an important role in control of the abundance of cell cycle regulators. Mice lacking Skp2, an F-box protein and substrate recognition component of an Skp1-Cullin-F-bos protein (SCF) ubiquitin ligase, were generated. Although Skp2(-/-) animals are viable, cells in the mutant mice contain markedly enlarged nuclei with polyploidy and multiple centrosomes, and show a reduced growth rate and increased apoptosis, Skp2(-/-) cells also exhibit increased accumulation of both cyclin E and p27(Kip1). The elimination of cyclin E during S and G(2) phases is impaired in Skp2(-/-) cells, resulting in loss of cyclin E periodicity. Biochemical studies showed that Skp2 interacts specifically with cyclin E and thereby promotes its ubiquitylation and degradation both in vivo and in vitro. These results suggest that specific degradation of cyclin E and p27(Kip1) is mediated by the SCFSkp2 ubiquitin ligase complex, and that Skp2 may control chromosome replication and centrosome duplication by determining the abundance of cell cycle regulators.

Establishment of an embryonic stem (ES) cell line derived from a non-obese diabetic (NOD) mouse: in vivo differentiation into lymphocytes and potential for germ line transmission
S Nagafuchi, H Katsuta, K Kogawa, T Akashi, S Kondo, Y Sakai, T Tsukiyama, D Kitamura, Y Niho, T Watanabe
FEBS LETTERS, 455, 1-2, 101, 104, ELSEVIER SCIENCE BV, 1999年07月, ［査読有り］
英語, 研究論文（学術雑誌）, A non-obese diabetic (NOD) mouse-derived embryonic stem (ES) cell line has been stably maintained in an undifferentiated state with a characteristic ES cell-like morphology, expressing the stem cell marker alkaline phosphatase, and displaying a normal diploid karyotype, After injecting the NODES cells into blastocysts, chimeric mice were obtained. Small but significant numbers of lymphocytes expressed the NOD-derived MHC allele, When a chimeric mouse was mated with C57BL/6 mice, an agouti mouse was obtained, having the NOD-derived H-2 I-A(beta)(g7) haplotype. Thus, an NOD-ES cell line which cao differentiate into lymphocytes with potential for germ line transmission was successfully established. (C) 1999 Federation of European Biochemical Societies.

DNA-Liposome complexのマウス受精卵前核注入による外来遺伝子導入について
築山 忠維, 新谷 真美, 尾川 昭三
明治大学農学部研究報告, 113, 113, 17, 27, 明治大学農学部, 1997年09月, ［査読有り］, ［筆頭著者］
日本語, 研究論文（大学，研究機関等紀要）

Wnt受容体分解機能を失った発がん型RNF43変異体を機能回復させる試み
築山忠維, 畠山鎮次, 日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web), 46th, 2023年

Mutation in only 2 genes allows multi-step tumorigenesis.　　　　　　　　　　　　　　　
Tadasuke Tsukiyama, Tohru Ishitani, Shigetsugu Hatakeyama, CANCER SCIENCE, 112, 933, 933, 2021年02月, ［筆頭著者］

085 Type XVII collagen suppresses interfollicular epidermal proliferation in neonatal and aged skin, and helps rejuvenate epidermis
M. Watanabe, K. Natsuga, W. Nishie, G. Donati, Y. Fujimura, T. Tsukiyama, H. Ujiie, M. Ozaki, F.M. Watt, H. Shimizu, Journal of Investigative Dermatology, 137, 10, S207, S207, 2017年10月
Elsevier BV

メディエーター複合体による転写終結制御機構
高橋秀尚, 柴田美音, 瀧川一学, 渡部昌, 築山忠維, 山本淳一, 山口雄輝, 藤井聡, 飯田緑, RANJAN Amol, SATO Shigeo, TOMOMORI‐SATO Chieri, CONAWAY Joan, CONAWAY Ronald, 畠山鎮次, 日本生化学会大会(Web), 90th, ROMBUNNO.4P2T15‐06(3P‐0635) (WEB ONLY), 0635)], 2017年
生命科学系学会合同年次大会運営事務局, 日本語

ユビキチン化酵素RNF43によるWntシグナル制御とその破綻による発がん　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維, 日本応用酵素協会誌, 52, 27, 33, 2017年, ［招待有り］
日本語, 記事・総説・解説・論説等（その他）

メディエーター複合体のサブユニットMED26はLittle elongation complexをリクルートすることでsnRNA遺伝子の転写を制御する　　　　　　　　　　　　　　　
高橋秀尚, 瀧川一学, 渡部昌, Delnur Anwar, 柴田美音, 佐藤チエリ, 佐藤滋生, Amol Ranjan, Chris W. Seidel, 築山忠維, 水島航, 林正康, 大川恭行, Joan, W. Conaway,Ronal, C. Conaway, 畠山鎮次, 北海道医学雑誌, 90, 1, 76, 76, 2015年
日本語

プロポロリスコーティング床敷はケージ内常在菌の増殖とマウスアレルゲンの発生を抑制する
土佐紀子, 吉松組子, 築山忠維, 畠山鎮次, 有川二郎, 日本実験動物学会総会講演要旨集, 61st, 280, 2014年05月01日
日本語

Med26はLittle elongation complexをリクルートすることでsmall nuclear RNA遺伝子の発現を制御する
高橋秀尚, 瀧川一学, 渡部昌, ANWAR Delnur, 柴田美音, 佐藤チエリ, 佐藤滋生, RANJAN Amol, SEIDEL Chris, 築山忠維, 林正康, 大川恭行, CONAWAY Joan, CONAWAY Ronald, 畠山鎮次, 日本生化学会大会(Web), 87th, WEB ONLY 2T15P-16(3P-502), 16], 2014年
(公社)日本生化学会, 日本語

メディエーター複合体による転写伸長制御
高橋秀尚, 瀧川一学, 渡部昌, ANWAR Delnur, 柴田美音, 佐藤チエリ, 佐藤滋生, RANJAN Amol, SEIDEL Chris W, 築山忠維, 林正康, 大川恭行, CONAWAY Joan, CONAWAY Ronald C, 畠山鎮次, 日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web), 37th, 1W15-3(1P-0237) (WEB ONLY), 2014年
日本語

AN INFLAMMATORY CYTOKINE IL-1B IS INVOLVED IN BLADDER REMODELLING AFTER PARTIAL BLADDER OUTLET OBSTRUCTION IN MICE
Y. Kanno, T. Mitsui, T. Kitta, K. Moriya, T. Tsukiyama, S. Hatakeyama, K. Nonomura, NEUROUROLOGY AND URODYNAMICS, 32, 6, 925, 926, 2013年08月
WILEY-BLACKWELL, 英語, 研究発表ペーパー・要旨（国際会議）

ダイオキシン受容体内因性リガンドによる前立腺癌細胞におけるアンドロゲンレセプター発現低下と増殖抑制　　　　　　　　　　　　　　　
丸山覚, 築山忠維, 宮島直人, 土屋邦彦, 安部崇重, 佐澤陽, 篠原信雄, 畠山鎮次, 野々村克也, 日本泌尿器科学会雑誌, 104, 2, 415, 2013年03月
日本語

Med26はLittle elongation complexをリクルートすることでsmall nuclear RNA遺伝子の発現を制御する
TAKAHASHI Hidehisa, 瀧川一学, ANWAR Delnur, 柴田美音, TOMOMORI‐SATO Chieri, SATO Shigeo, RANJAN Amol, SEIDEL Chris, 築山忠維, 渡部昌, 林正康, 大川恭行, CONAWAY Joan, CONAWAY Ronald, 畠山鎮次, 日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web), 36th, 1P-0182 (WEB ONLY), 2013年
日本語

胸腺細胞特異的発現p27^トランスジェニックマウスの作製と解析
築山 忠雄, 畠山 鎮次, 北川 雅敏, 中山 啓子, 中山 敬一, 日本分子生物学会年会プログラム・講演要旨集, 21, 589, 589, 1998年12月01日
日本語

発がん過程におけるシグナルのクロストーク
築山忠維
北海道若手がん研究会（HYCIC), 2024年12月03日, 口頭発表（一般）
2024年12月03日 - 2024年12月03日, 42063426

発がん過程におけるシグナルのクロストーク
築山忠維
Wnt研究会2024, 2024年11月30日, 口頭発表（一般）
2024年11月30日 - 2024年11月30日, 42063426

発がん型RNF43変異体にWnt受容体分解機能を回復させるための検討
築山忠維
第47回日本分子生物学会年会, 2024年11月28日, ポスター発表
2024年11月26日 - 2024年11月29日, 42063426

代謝がWntシグナルに及ぼす影響の検討　　　　　　　　　　　　　　　
築山忠維
Wnt研究会, 2023年12月09日, 日本語, 口頭発表（一般）

Wnt受容体分解機能を失った発がん型RNF43変異体を機能回復させる試み
築山忠維, 畠山鎮次
第46回日本分子生物学会年会, 2023年12月08日, 英語, ポスター発表
42063426

発がん過程におけるWntシグナルからp53へのクロストーク
築山忠維, 畠山鎮次
第82回日本癌学会学術総会, 2023年09月23日, 英語, 口頭発表（一般）
42063426

Wnt receptor regulation and maintaining homeostasis
Tadasuke Tsukiyama
CGE International Seminar Series 2023, 2023年03月27日, 英語, 公開講演，セミナー，チュートリアル，講習，講義等
2023年01月09日 - 2023年05月22日, 24556193, ［招待講演］

多段階発がんにおけるRNF43遺伝子変異の意義
築山忠維
北海道がん若手研究者交流会, 2023年03月17日, 日本語, 口頭発表（一般）
2023年03月17日 - 2023年03月17日, 24556193, ［招待講演］

A role of RNF43 other than Wnt receptor regulation in oncogenesis (oral)
Tadasuke Tsukiyama
Wnt 2022, 2022年11月18日, 英語, 口頭発表（一般）
2022年11月15日 - 2022年11月19日, 24556193

A role of RNF43 other than Wnt receptor regulation in oncogenesis (poster)
Tadasuke Tsukiyama, Shigetsugu Hatakeyama
Wnt 2022, 2022年11月17日, 英語, ポスター発表
2022年11月15日 - 2022年11月19日, 24556193

Wnt 受容体調節の破綻が多段階発がん過程で果たす複雑な役割
築山忠維, 畠山鎮次
第81回日本癌学会学術総会, 2022年09月30日, 日本語, ポスター発表
2022年09月29日 - 2022年10月01日, 24556193

Wnt受容体調節の破綻が多段階発がん過程で果たす複雑な役割　　　　　　　　　　　　　　　
築山忠維
第59回日本生化学会北海道支部例会, 2022年07月09日, 日本語, シンポジウム・ワークショップパネル（指名）
［招待講演］

Wnt受容体の発現調節異常と発がん機構の解明　　　　　　　　　　　　　　　
築山忠維, 石谷太, 高橋秀尚, 松本雅記, 大場雄介, 中山敬一, Koo Bonkyoung, 畠山鎮次
第94回日本生化学会大会, 2021年11月05日, 日本語, シンポジウム・ワークショップパネル（指名）
［招待講演］

Wnt receptor regulation
築山忠維
Wnt研究会2021, 2021年01月14日, 日本語, 口頭発表（一般）
24556193

単一遺伝子変異による多段階発がんの起動と完成　　　　　　　　　　　　　　　
築山忠維
第79回日本癌学会学術総会, 2020年10月01日, 英語, その他
2020年10月01日 - 2020年10月03日

RNF43の遺伝子変異は多段階発がんステップにおいてWntとp53経路の変異を代償する　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第42回日本分子生物学会年会, 2019年12月03日, 日本語, ポスター発表
［国内会議］

幹細胞特異的ユビキチンリガーゼRNF43の遺伝子変異による多段階発がんステップの起動と完成　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第78回日本癌学会学術総会, 2019年09月26日, 日本語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

発がん型変異RNF43はリン酸化により正常ながん抑制因子へ機能回復する　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第77回日本癌学会学術総会, 2018年09月28日, 英語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

幹細胞特異的ユビキチンリガーゼRNF43のリン酸化によるWntシグナル調節は個体発生 ・恒常性維持・発がん過程に関与する　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第91回日本生化学会大会, 2018年09月25日, 日本語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

RNF43のリン酸化によるWntシグナルの活性制御は個体の恒常性を制御する　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
Wnt研究会2017, 2017年12月10日, 日本語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

様々な動物モデルを用いたWntシグナル調節異常による発がん機構の解析　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
2017年度生命科学系学会合同年次大会, 2017年12月08日, 英語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

RNF43によるWntシグナルの活性制御は形態形成と発がんを制御する　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第76回日本癌学会学術総会, 2017年09月28日, 日本語, シンポジウム・ワークショップパネル（公募）
［国内会議］

Wntシグナル：私たちのからだを作る・支えるユーティリティプレイヤー　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第39回日本分子生物学会年会, 2016年11月30日, 英語, シンポジウム・ワークショップパネル（公募）
［招待講演］, ［国内会議］

Wntシグナルの分子スイッチ；RNF43のリン酸化による活性制御　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第39回日本分子生物学会年会, 2016年11月30日, 英語, 口頭発表（招待・特別）
［招待講演］, ［国内会議］

RNF43の翻訳後修飾はWntシグナル調節のスイッチとして機能する　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第75回日本癌学会学術総会, 2016年10月07日, 英語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

Post-translational modification of RNF43; a molecular switch of Wnt signaling　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
Wnt meeting 2016, 2016年09月15日, 英語
［国際会議］

カエルモデルを用いたRNF43のリン酸化によるWntシグナル調節機構の解明　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
平成27年度「個体レベルでのがん研究支援活動」ワークショップ, 2016年02月04日, 日本語
［国内会議］

カエルモデルを用いたRNF43のWntシグナル調節と発がんにおける機能検討　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第74回日本癌学会学術総会, 2015年10月08日, 日本語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

カエルモデルから明らかになったWntシグナル調節とがんにおけるRNF43の機能　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
日本生化学会北海道支部 第52回支部例会, 2015年07月17日, 日本語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

Missense mutations of RNF43 establish a positive feedback loop of Wnt/βcatenin signaling　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
2015「個体レベルでのがん研究支援活動」ワークショップ, 2015年02月05日, 日本語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

RNF43遺伝子のミスセンス変異によるWnt/βcatenin経路のポジティブフィードバックループ形成　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第37回日本分子生物学会年会, 2014年11月27日, 日本語, ポスター発表
［国内会議］

RNF43のミスセンス変異はWnt/βcateninシグナルの正のフィードバックループを形成する　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第73回日本癌学会年会, 2014年09月27日, 日本語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

RNF43遺伝子のミスセンス変異によるWnt/βcatenin経路のポジティブフィードバックループ形成　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
日本生化学会北海道支部 第51回支部例会, 2014年07月18日, 日本語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

RNF43遺伝子変異によるがん抑制遺伝子からがん遺伝子への機能転換　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第36回日本分子生物学会年会, 2013年12月03日, 英語, ポスター発表
［国内会議］

がん抑制遺伝子RNF43は異なるメカニズムによってWnt/beta-catenin経路とnoncanonical Wnt経路を抑制する　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第72回日本癌学会学術総会, 2013年10月04日, 英語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

RNF43はcanonical/noncanonical Wntシグナルの両方を抑制する　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第35回日本分子生物学会年会, 2012年12月11日, 英語, ポスター発表
マリンメッセ福岡・福岡, ［国内会議］

RNF43はNEDL1と結合し、p53依存性の転写を調節する　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第71回日本癌学会学術総会, 2012年09月19日, 英語, ポスター発表
札幌, ［国内会議］

Ymer functions as a multifunctional regulator in NF-kB and Fas signaling pathways.　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
41st Australasian Society for Immunology Annual Meeting, 2011年12月13日, 英語, 口頭発表（一般）
アデレード･オーストラリア, ［国際会議］

ポリユビキチン結合タンパク質Ymer は 炎症反応を抑制する　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第48回日本生化学会北海道支部例会, 2011年08月05日, 日本語, 口頭発表（一般）
札幌, ［国内会議］

Ymerトランスジェニックマウスの解析　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第32回日本分子生物学会年会, 2009年12月09日, 日本語, ポスター発表
［国内会議］

がん抑制遺伝子としてのWnt5a　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
Wntシグナルシンポジウム, 2009年03月24日, 日本語, 口頭発表（招待・特別）
［招待講演］, ［国内会議］

K63-ポリユビキチン鎖を介してNF-kBシグナルを抑制するYmerの機能解析　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会 合同大会 （BMB2008）, 2008年12月09日, 日本語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

改良型NF-κB活性検出システムの構築　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第73回日本インターフェロン・サイトカイン学会学術集会, 2008年07月11日, 日本語, ポスター発表
［国内会議］

改良型NF-kB活性検出システムの構築　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会 合同大会 （BMB2007）, 2007年12月11日, 日本語, ポスター発表
［国内会議］

Wnt5a is a haploinsufficient tumor suppressor that cooperates with Tcf1 to suppress T cell lymphomas　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
20th IUBMB International Congress of Biochemistry and Molecular Biology and 11th FAOBMB Congress, 2006年06月22日, 英語, ポスター発表
［国際会議］

Wnt5a synergizes with Tcf1 to suppress T-cell lymphoma　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
日本分子生物学会年会, 2004年12月10日, 日本語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

Evidence that Wnt5a functions as a tumor suppressor in T-cell lymphoma　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
Cold Spring Harboer-Mouse molecular Genetics meeting, 2004年09月03日, 英語, ポスター発表
［国際会議］

Wnt5a is a tumor suppressor in T-cell lymphoma　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
Wnt meeting, 2004年05月22日, 日本語, 口頭発表（一般）
［国際会議］

Wnt signaling regulates mammalian body plan and tumorigenesis.　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
NCI retreat, 2003年10月22日, 英語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

Wnt signaling pathway and anterior- posterior body axis formation　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
Society for Developmental Biology Annual Meeting, 2003年08月03日, 英語, ポスター発表
［国際会議］

Downregulation of p27Kip1 is required for T cell development　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
Cold Spring Harbor Laboratory-The cell cycle meeting, 2000年05月18日, 英語, ポスター発表
［国際会議］

T細胞の分化と細胞周期：p27Kip1トランスジェニックマウスの解析　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
日本分子生物学会年会, 1999年12月09日, 日本語, ポスター発表
［国内会議］

胸腺細胞特異的発現p27Kip1トランスジェニックマウスの作製と解析　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
日本分子生物学会年会, 1998年12月19日, 日本語, ポスター発表
［国内会議］

DNA-リポソームcomplexの前核注入によるTgマウス胚の作出　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
日本繁殖学会, 1996年10月01日, 日本語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

DNA-リポソームcomplexの前核注入によるTgマウス胚の作出　　　　　　　　　　　　　　　
築山 忠維
日本畜産学会, 1996年03月28日, 日本語, 口頭発表（一般）
［国内会議］

生化学実習　　　　　　　　　　　　　　　
北海道大学

プレメディカル演習　　　　　　　　　　　　　　　
北海道大学

基盤医学研究 I・II　　　　　　　　　　　　　　　
北海道大学

医学総論　　　　　　　　　　　　　　　
北海道大学

基本医学研究 I・II　　　　　　　　　　　　　　　
北海道大学

基本医学総論　　　　　　　　　　　　　　　
北海道大学

医学研究セミナー　　　　　　　　　　　　　　　
北海道大学

家畜繁殖学実習　　　　　　　　　　　　　　　
明治大学農学部

医学研究演習　　　　　　　　　　　　　　　
北海道大学

基礎医学実習　　　　　　　　　　　　　　　
北海道大学

2018年 - 現在
日本生化学会　　　　　　　　　　　　　　　

2016年11月 - 現在
Wnt研究会　　　　　　　　　　　　　　　

2012年03月 - 現在
日本癌学会　　　　　　　　　　　　　　　

1998年08月 - 現在
日本分子生物学会　　　　　　　　　　　　　　　

多段階発がんにおけるWntシグナルからp53経路へのクロストークの解明と治療応用
科学研究費助成事業 基盤研究(C)
2023年04月 - 2026年03月
築山 忠維
日本学術振興会, 基盤研究(C), 北海道大学, 23K06605

発がん過程におけるRNF43をハブとしたWntシグナルとp53経路のクロストーク機構の解明　　　　　　　　　　　　　　　
東京大学医科学研究所共同研究
2023年04月 - 2025年03月
築山忠維
東京大学医科学研究所, 研究代表者

RNF43の遺伝子変異を標的とした新たながん治療法の開発（継続）　　　　　　　　　　　　　　　
金沢大学がん進展制御研究所 共同利用・共同研究
2023年04月 - 2024年03月
築山忠維
金沢大学がん進展制御研究所, 研究代表者

RNF43の遺伝子変異を標的とした新たながん治療法の開発　　　　　　　　　　　　　　　
令和４年度 共同研究
2022年04月 - 2023年03月
金沢大学がん進展制御研究所, 研究代表者

Wnt受容体の発現調節破綻による発がん機構の解明をがん治療に応用する ための基礎的研究　　　　　　　　　　　　　　　
ビジョナリーリサーチ助成
2021年04月 - 2023年03月
公益財団法人 武田科学振興財団, 研究代表者

RNF43によるWnt受容体ユビキチン化の分子メカニズムの解明と治療への応用
科学研究費助成事業 基盤研究(C)
2019年04月 - 2022年03月
築山 忠維
日本学術振興会, 基盤研究(C), 北海道大学, 研究代表者, 19K07633

糖代謝が個体の恒常性維持に関与するメカニズムの解明　　　　　　　　　　　　　　　
内分泌・代謝学共同研究拠点 共同研究
2020年04月 - 2021年03月
群馬大学, 群馬大学生体調節研究所

Wntシグナル調節因子が代謝変化を通して発がんに関与するメカニズムの解明　　　　　　　　　　　　　　　
大阪大学微生物病研究所共同研究課題
2020年04月 - 2021年03月
大阪大学, 大阪大学微生物病研究所, 研究代表者

糖代謝がWntシグナルによる恒常性維持に及ぼす影響の検討　　　　　　　　　　　　　　　
生体・調節研究所内分泌 代謝学共同研究拠点共同研究
2019年04月 - 2020年03月
群馬大学, 群馬大学, 研究代表者

RNF43による恒常性の維持とその破綻によるがん化メカニズムの解明
科学研究費助成事業 基盤研究(C)
2016年04月 - 2020年03月
築山 忠維
最近、幹細胞特異的ユビキチンリガーゼであるring finger protein 43 (RNF43)がWnt受容体のFrizzled (Fzd)を分解するユビキチンリガーゼであること、RNF43がFzdをユビキチン化しリソソームで分解することが複数の海外のグループから報告された。これまでの研究において我々は、幹細胞特異的ユビキチンリガーゼであるRNF43がp53経路を抑制すること、Fzdを細胞外ドメインで認識し分解すること、正常型RNF43はがん抑制遺伝子として機能していること、その遺伝子変異によってRNF43の細胞内局在異常が引き起こされた結果、RNF43が形成するWntシグナルのフードバック機構が負から正へと転換することでWntシグナルの暴走に起因する発がんが引き起こされることを報告してきた。しかしRNF43は比較的最近発見された分子であり、その正常組織と発がん過程における機能とその調節にはまだ不明な点が多かった。
本研究では世界に先駆け、多くの生物種において同じRNF43タンパク質上で、またヒトにおいてはRNF43とそのホモログのZNRF3の間で高度に保存されている４つのセリン残基がリン酸化を受けることにより、RNF43のユビキチン化活性が調節されていることを世界に先駆け明らかにした。
また発がん型変異を持ったRNF43はWntシグナルを異常活性化するにもかかわらず、p53を抑制する機能は維持していることも明らかにした。この結果は、以前の報告で膵臓がんにおいてRNF43と活性型Ras変異が高頻度にリンクしている理由を明確にした。1. Wnt活性化＞2. Ras活性化＞3. p53不活性化と進行していく多段階発がんモデルにおいて、RNF43の変異が１段階目と３段階目の両方に関与することで、RasとRNF43の２つの遺伝子変異だけで発がんを達成することを実験的にも証明した。
日本学術振興会, 基盤研究(C), 北海道大学, 研究代表者, 16K07105

Wntシグナルが恒常性維持に果たす役割のゼブラフィッシュモデルを用いた解明　　　　　　　　　　　　　　　
生体・調節研究所内分泌 代謝学共同研究拠点共同研究
2018年04月 - 2019年03月
群馬大学, 群馬大学, 研究代表者

ユビキチン化酵素RNF43による発がん制御機構の解明　　　　　　　　　　　　　　　
酵素研究助成
2016年09月 - 2017年08月
築山 忠維
公益財団法人 日本応用酵素協会, 研究代表者, 競争的資金

ゼブラフィッシュモデルを用いたRNF43の機能解析　　　　　　　　　　　　　　　
生体防御医学研究所 発生工学共同研究課題
2016年04月 - 2017年03月
九州大学, 九州大学生体防御医学研究所, 研究代表者

Wntシグナル調節メカニズムの解明と膵臓がんの診断治療への応用　　　　　　　　　　　　　　　
膵臓病研究奨励賞
2015年10月 - 2016年10月
築山 忠維
公益財団法人 日本膵臓病研究財団, 研究代表者, 競争的資金

Wntシグナル抑制分子RNF43のがんへの関与
科学研究費助成事業 基盤研究(C)
2013年04月 - 2016年03月
築山 忠維, 畠山 鎮次, 高橋 秀尚
膜型ユビキチンリガーゼRNF43は、正常幹細胞や各種がん細胞で高発現することが報告されていた。しかしRNF43の機能とそのがん化に関与する分子メカニズムは不明であった。本研究において以下の解明を行い報告を行った[ Tsukiyama, MCB, 35:2007 (2015)]。
１．RNF43はN末端側でFzdの発現調節を行い、Wnt/βcatenin, noncanonical Wntシグナルを抑制する。２．C末端側でDvlとの結合依存的に noncanonical Wntシグナルを抑制する。３．がんにおけるRNF43のミスセンス変異がWnt/βcateninシグナルの過剰活性化を引き起こす。
日本学術振興会, 基盤研究(C), 北海道大学, 研究代表者, 25430102

細胞の増殖分化に関与するＴＲＩＭ型ユビキチンリガーゼの網羅的解析
科学研究費助成事業
2012年04月01日 - 2015年03月31日
畠山 鎮次, 築山 忠維, 高橋 秀尚
ある種の癌の癌化制御においてTRIM ファミリーユビキチンリガーゼ群の重要性が明らかとなっている。特に細胞の増殖分化過程で重要な転写因子の制御に、TRIM ファミリーユビキチンリガーゼが関与していることが報告されている。今回、プロテオミクス的手法を使用し、転写因子のユビキチン化に関与するTRIM 型ユビキチンリガーゼを網羅的に解析した。その結果、いくつかの癌において、その癌化の機序に関することが明らかとなり、今後、これらの知見は癌の悪性度や早期診断等への臨床応用に貢献することが期待できる。
日本学術振興会, 基盤研究(B), 北海道大学, 24390065

TRIM型ユビキチンリガーゼ介在性癌化制御の網羅的解析
科学研究費助成事業
2009年 - 2011年
畠山 鎮次, 奥村 文彦, 築山 忠維
タンパク質の翻訳後修飾の一つであるユビキチン化は、主にタンパク質分解のシグナルとして機能しており、タンパク質の安定性の調節システムとして重要である。TRIMファミリータンパク質のいくつかはユビキチンリガーゼE3として機能することが判明しており、ヒト及びマウスの遺伝子に70以上存在することが推測されている。本研究申請では、TRIMファミリータンパク質と癌化との関係に焦点を当て、解析を進めた。
日本学術振興会, 基盤研究(B), 北海道大学, 21390087

生体におけるシグナル活性in vivoイメージングマウスライブラリの樹立と応用
科学研究費補助金・若手研究(B)
2008年04月 - 2010年03月
築山 忠維
我々はガン、免疫異常、炎症などの多くの疾患に重要な役割を果たしていると考えられるNF-κBシグナルに注目し、そのシグナル活性を検出するためのシステム、改良型NF-κBレポーターシステム(NATシステム)を構築し、さらにそのレポータートランスジェニックマウスを作製した。また同様の手法でがんや発生、さらには神経形成にも重要な働きをNotchシグナルに対してもレポーターシステムとそのトランスジェニックマウスを作製し(cNotch mouse)、現在解析中である。
日本学術振興会, 若手研究(B), 北海道大学, 研究代表者, 競争的資金, 20700361

マウス生体内におけるシグナル経路のin vivo イメ ージングシステムの確立と応用　　　　　　　　　　　　　　　
生命科学研究助成金
2007年04月 - 2008年03月
築山 忠維
秋山財団, 研究代表者, 競争的資金

マウス生体内におけるシグナル経路のin vivoイメージングシステムの確立と応用
科学研究費補助金・若手研究(B)
2006年04月 - 2008年03月
築山 忠維
全ての生物においてシグナル伝達システムの厳密な制御は、生命を維持することに決定的に重要である。我々は、本研究において生体内でこれらのシグナル活性を蛍光・発光によりイメージングするためのシステム構築を目指し、様々なシグナル活性変化を検出するレポーターとして活用することで、個体の形態形成から恒常性維持までに至る生命現象を対象とした幅広い研究に対応させることを目的とした。まず我々はガン、免疫異常、炎症などの多くの疾患に重要な役割を果たすNF-kBシグナルに注目し、その活性を検出するためのシステム構築を行った。NF-kBシグナルを高感度・特異的に検出するレポーターシステムの確立には、NF-kB結合配列とNF-kBシグナルの下流において特異的と考えられるIL-2遺伝子由来ミニマルプロモーターを用い、改良型NF-kBレポーター:NATシステムを構築した。さらにシグナルの蓄積とリアルタイムでのシグナル活性変化検出ため、レポーター遺伝子として安定型・不安定型のルシフェラーゼ・EGFPと組み合わせ細胞レベルでの検討を行った結果、従来のNF-kBシグナルレポーターシステムに対し検出感度で18倍、特異性で5倍高い値を示し、またシグナルの蓄積とリアルタイムでのシグナル活性変化を同時に測定出来るシステムであることが示された(Matsuda et al., Immunology Letters、 200...
日本学術振興会, 若手研究(B), 北海道大学, 研究代表者, 競争的資金, 18700393

TRIMファミリーユビキチンリガーゼの網羅的解析
科学研究費補助金(基盤研究(B))
2006年 - 2007年
畠山 鎮次, 築山 忠維
多くの細胞質・核質に存在するタンパク質の分解にユビキチンープロテアソーム系が関与している。そして、標的タンパク質のユビキチン化に必要な酵素群の中で、特にユビキチンリガーゼE3は標的タンパク質を認識し、最終的にユビキチンを付加する重要な酵素サブユニットである。この分解系の特徴は、基質特異性が高く、分解速度が速いことである。この特徴を利用して、癌遺伝子産物や癌抑制遺伝子産物や転写因子などの発現量は厳密に調節されている。。本研究計画では、既に癌化および癌の悪性度に影響を与えるといわれているTRIM/RBCCファミリータンパク質(TRIMタンパク質)を網羅的に解析し、ユビキチン化される基質タンパク質の同定および分子論的解明を行い、最終的には癌などに対する臨床応用に向けた試みを遂行する。これまでも癌や白血病に関連するTRIMファミリーとして、PML(白血病)やEFP(乳癌)やTRIM32(頭頸部癌)などが報告されている。具体的にはDNAデータベースを利用しTRIMタンパク質を網羅的にクローニングしている(ヒトゲノム上に約70遺伝子存在する)。現在までのところ、約13種類のTRIMタンパク質のクローニングし、その解析を進めているところである(TRIM2、TRIM3、TRIM9、TRIM10、TRIM13、TRIM18、TRIM21、TRIM25、TRIM26、TRIM32、TRIM36、...
文部科学省, 基盤研究(B), 北海道大学, 連携研究者, 競争的資金, 18390079

ハイブリッド型ユビキチン化酵素による神経変性疾患の治療
科学研究費補助金(萌芽研究)
2006年 - 2007年
畠山 鎮次, 築山 忠維
多くの細胞質・核質に存在するタンパク質の分解に関わっているのはユビキチン-プロテアソーム系である。この分解系の特徴は、基質特異性が高く、分解速度が速いことである。分解されるべきタンパク質はユビキチンが鎖状に結合され(ポリユビキチン鎖)、タンパク質分解装置であるプロテアソームがポリユビキチン鎖を認識して標的タンパク質ごと分解する。標的タンパク質のユビキチン化に必要な酵素群の中で、特にユビキチンリガーゼは標的タンパク質を認識し、最終的にユビキチンを付加する重要な因子である。本研究課題においては、各ポリグルタミン病関連タンパク質(ハンチンティン、Atrophin-1、Ataxin(ATX)-1,-2,-3,-17等)には特異的に結合するタンパク質が同定されているので、この結合タンパク質とユビキチンリガーゼであるU-ボックスタンパク質のキメラ酵素(人工ハイブリッドユビキチンリガーゼ)を作製し、ポリグルタミン含有タンパク質が人工ハイブリッドユビキチンリガーゼによってユビキチン化を受け、プロテアソームによって分解される系を構築する。さらに実際の遺伝子治療に応用できるかどうかを検討するために、ウイルスベクターを利用して細胞やマウスへの導入実験を行い、神経機能異常に対する効果を判定する。特に、ATX-3/MJD1とVCP/p97の結合に注目し、VCPにおける最小結合領域を同定しているところで...
文部科学省, 萌芽研究, 北海道大学, 連携研究者, 競争的資金, 18659252

大腸がんの進行抑制できるタンパク質の働きを初解明　　　　　　　　　　　　　　　
2020年10月13日
本人以外
NHK
北海道のがん研究最前線・ほっとニュース北海道
［テレビ・ラジオ番組］

大腸がん発症のスイッチを発見 北大　　　　　　　　　　　　　　　
2020年10月09日
本人以外
東京メトロポリタンテレビジョン
MEDICAL NEWS LINE
［テレビ・ラジオ番組］

大腸がん発症、RNF43遺伝子のリン酸化が 関わる新たなメカニズムを発見－北大ほか
2020年09月18日
本人以外
QlifePro
医療NEWS
http://www.qlifepro.com/news/20200917/rnf43-tumorigenesis.html, 24556193, ［インターネットメディア］

大腸がんタンパク質の働き解明
2020年09月18日
本人以外
NHK
NHKニュース・おはよう北海道
24556193, ［テレビ・ラジオ番組］

Molecular basis underlying colorectal cancer revealed　　　　　　　　　　　　　　　
2020年09月15日
bioengineer.org
Bioengineer
https://bioengineer.org/molecular-basis-underlying-colorectal-cancer-revealed/, ［インターネットメディア］

Molecular basis underlying colorectal cancer revealed　　　　　　　　　　　　　　　
2020年09月15日
本人以外
7thspace.com
7thSpace
http://7thspace.com/headlines/1309965/molecular_basis_underlying_colorectal_cancer_revealed.html, ［インターネットメディア］

The Wnt pathway gets even more complicated　　　　　　　　　　　　　　　
2020年09月15日
本人以外
American Association for the Advancement of Science (AAAS)
EurekAlart!
https://www.eurekalert.org/pub_releases/2020-09/iiom-twp091520.php, ［インターネットメディア］

Molecular basis underlying colorectal cancer revealed　　　　　　　　　　　　　　　
2020年09月15日
本人以外
bionewscentral.com
BioNews CENTRAL
https://bionewscentral.com/molecular-basis-underlying-colorectal-cancer-revealed/, ［インターネットメディア］

The Wnt pathway gets even more complicated　　　　　　　　　　　　　　　
2020年09月15日
本人以外
alphagalileo.org
Alpha Galileo
https://www.alphagalileo.org/en-gb/Item-Display/ItemId/197278?returnurl=https://www.alphagalileo.org/en-gb/Item-Display/ItemId/197278, ［インターネットメディア］

Molecular basis underlying colorectal cancer revealed by Hokkaido University　　　　　　　　　　　　　　　
2020年09月15日
本人以外
Oncology & Cancer
medicalxpress.com
https://medicalxpress.com/news/2020-09-molecular-basis-underlying-colorectal-cancer.html, ［インターネットメディア］

Molecular basis underlying colorectal cancer revealed　　　　　　　　　　　　　　　
2020年09月15日
本人以外
asiaresearchnews.com
Asia Research News
https://www.asiaresearchnews.com/content/molecular-basis-underlying-colorectal-cancer-revealed, ［インターネットメディア］

Scientists unravel the molecular mechanism underlying the causes of colorectal cancer　　　　　　　　　　　　　　　
2020年09月15日
本人以外
news-medical.net
The Medical News
https://www.news-medical.net/news/20200915/Scientists-unravel-the-molecular-mechanism-underlying-the-causes-of-colorectal-cancer.aspx, ［インターネットメディア］

Wnt研究会 世話人　　　　　　　　　　　　　　　
2016年11月30日 - 2019年02月02日
企画立案・運営等, パネル司会・セッションチェア等
学会・研究会等
築山忠維・その他

日本分子生物学会年会シンポジウム 企画（Wntシグナル：私たちのからだを作る・支えるユーティリティプレイヤー ）　　　　　　　　　　　　　　　
2016年11月30日
企画立案・運営等, パネル司会・セッションチェア等
学会・研究会等
日本分子生物学会

Wnt研究会 設立　　　　　　　　　　　　　　　
2016年11月30日
企画立案・運営等
学会・研究会等
築山忠維・石谷太

セッション３ Wntシグナルと発癌　　　　　　　　　　　　　　　
2009年03月24日
パネル司会・セッションチェア等
学会・研究会等
Wntシグナルシンポジウム